楊素芳 陳旭豐 楊志葉 吳芳 辛凡 阮國(guó)洪

摘 要：研究絞股藍(lán)黃芪保健茶對(duì)小鼠免疫功能的影響。將200只清潔級(jí)ICR雌性小鼠，按體重分成免疫5大組，每組隨機(jī)分成4小組，每小組10只；按人日推薦用量的5倍、10倍、30倍，分別設(shè)0.415、0.830、2.490g/kgBw 3個(gè)劑量組和蒸餾水對(duì)照組。小鼠每天按20mL/kgBW連續(xù)灌胃30d后，分別測(cè)定小鼠的體重、臟器指數(shù)、細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬功能以及NK細(xì)胞活性。結(jié)果表明：樣品高劑量組小鼠淋轉(zhuǎn)OD差值、抗體積數(shù)、溶血空斑數(shù)和碳廓清吞噬指數(shù)a都明顯高于對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；高劑量的樣品對(duì)小鼠的免疫功能有明顯的增強(qiáng)作用。

關(guān)鍵詞：絞股藍(lán)；黃芪；茶葉；免疫力

中圖分類號(hào) R151 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2018）08-0048-04

Effect of Gynostemma Astragalus Health Tea on Immune Function

Yang Sufang1 et al.

（1College of Pharmacy，F(xiàn)ujian University of Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou 350108，China）

Abstract：To study the effect of gynostemma astragalus health tea on immune function in mice. 200 clean grade ICR female mice were divided into 5 groups according to their body weight. Each group was randomly divided into 4 groups with 10 in each group. According to the recommended daily dosage of 5 times，10 times，and 30 times，0.415 ，0.830 and 2.490g/kgBw were set with distilled water control group. The mice were continuously fed with 20 mL/kg BW daily for 30 days. The body weight，organ index，cellular immune function，humoral immune function，monocyte-macrophage function and NK cell activity were measured. The results showed that the OD value，anti-volume number，hemolytic plaque number，and carbon clearance phagocytic index a of the high-dose mice in the high-dose group were significantly higher than those in the control group. Statistically，the differences were statistically significant（p<0.05）. High-dose samples have a significant enhancement of immune function in mice.

Key words：Gynostemma；Astragalus；Tea；Immunity

研究表明，絞股藍(lán)、黃芪富含的多糖、黃酮類、皂苷及茶葉高含量的茶多酚等活性成分都有利于增強(qiáng)機(jī)體免疫力，其相關(guān)的制劑在免疫治療中是種很有希望的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。

絞股藍(lán)始載于《救荒本草》，功善益氣健脾，化痰止咳，有“七葉參、賽人參、南方人參”等美譽(yù)。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，絞股藍(lán)中6種皂苷和人參皂苷相似，能增強(qiáng)免疫力。如絞股藍(lán)總皂苷（Gyp）能提高正常小鼠淋巴細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞免疫和體液免疫功能[1]，并對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠免疫功能低下有明顯拮抗作用，對(duì)正常小鼠有一定雙向免疫調(diào)節(jié)作用[2]。絞股藍(lán)多糖對(duì)小鼠特異性免疫能力有提高作用[3]，且顯著增強(qiáng)Heps小鼠NK細(xì)胞活性，提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力及小鼠血清溶血素含量[4-5]。

黃芪始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，本名“黃耆”，具有益氣升陽(yáng)、固表止汗，利水消腫和托毒生肌等功效，為補(bǔ)藥之長(zhǎng)，經(jīng)藥理結(jié)果可得其對(duì)體液免疫、細(xì)胞免疫均有促進(jìn)作用。如黃芪能顯著增加血白細(xì)胞和多核白細(xì)胞的數(shù)量，提升巨噬細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)[6]；黃芪能促進(jìn)溶血素形成，提高空斑形成細(xì)胞的溶血能力，具有比較明顯的碳粒廓清作用，增加脾臟重量[7]；常人服用黃芪后，血漿IgM，IgE顯著增加[8]；服用黃芪能顯著提高淋巴因子（白介素-2）激活的自然殺傷細(xì)胞（LAK）的活性[9]。

武夷巖茶始載于《送茶與焦刑部書》，文中名為“晚甘侯”，陳椽在《茶葉商品學(xué)》指出：“福建武夷巖茶，溫而不寒，提神健胃，消食下氣解酒”，性味獨(dú)特?，F(xiàn)代藥理探得武夷巖茶屬于半發(fā)酵茶，富含有效成分茶多酚，從而提高機(jī)體總免疫力。茶多酚可以通過提高機(jī)體免疫球蛋白總量并使其維持在高水平，刺激抗體活性的變化；提高全血谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活力，有助于清除體內(nèi)生物自由基；使蛋白質(zhì)凝固而殺菌，保護(hù)黏膜；提高刀豆球蛋白A（ConA）刺激脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，抑制N-甲基-N-硝基-N-亞硝基胍（MNNG）誘發(fā)腸道惡性腫瘤等 [10-12]。

本實(shí)驗(yàn)以絞股藍(lán)為主要原料，配以適量的黃芪、茶葉，通過對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)功能試驗(yàn)研究，為絞股藍(lán)系列保健品開發(fā)、推廣提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品及配制 實(shí)驗(yàn)樣品絞股藍(lán)黃芪保健茶由福建杰特生物科技有限公司提供，具體配制比例為：絞股藍(lán)50%、黃芪25%、武夷巖茶25%。使用前稱取樣品450g加入10倍量的蒸餾水，在85℃常壓下浸泡30min，過濾，重復(fù)上述操作1次，合并濾液，于65℃減壓濃縮至3L，每毫升含樣品0.15g。量取樣品提取濃縮液100mL混勻作為高劑量組樣品；量取高劑量組樣品40mL加蒸餾水至120mL混勻作為中劑量樣品；量取中劑量組樣品40mL加蒸餾水至80mL混勻作為低劑量樣品。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的3周齡清潔級(jí)ICR雌性小鼠200只，體重范圍為18～21g，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（閩）2012-0001。

1.1.3 儀器 8mm直徑打孔器（上海善久自動(dòng)化技術(shù)有限公司）、微量血凝試驗(yàn)板（上海古朵生物科技有限公司）、2-16K通用離心機(jī)（上海精密儀器儀表有限公司）、MODEL680酶標(biāo)儀（上海古朵生物科技有限公司）、96孔培養(yǎng)板（上海凌初環(huán)保儀器有限公司）、Co-150C02培養(yǎng)箱（上海精密儀器儀表有限公司）、UV-1800紫外可見光分光光度計(jì)（北京普析通用儀器責(zé)任有限公司）、OLympusIX71倒置顯微鏡、顯微鏡（河南鄭州南北儀器設(shè)備有限公司）、BS224S電子天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.1.4 試劑 注射用印度墨汁、刀豆蛋白A（ConA）、MTT、DNFB、丙嗣、麻油、SRBC、生理鹽水、雞紅細(xì)胞、羊紅細(xì)胞、甲醇、Giemsa染液、YAC-1細(xì)胞、Hank's液（PH7.2-7.4）、RPMI1640完全培養(yǎng)液、乳酸鋰、典硝基氯化四氮唑（INT）、吩嗪二甲酯硫酸鹽（PMS）、NAD、Tris-HCL緩沖液（PH8.2）、1%NP40、臺(tái)酚蘭、lmoL/L鹽酸、酸性異丙醇等（上海笛柏化學(xué)品技術(shù)有限公司）

1.2 方法 該樣品成人日推薦用量為5.0g，即0.083g/kgBW（成人體重以60kg計(jì)）。小鼠按體重分成五大組，分別為：免疫一組，測(cè)定空斑、溶血素、臟器指數(shù)；免疫二組，進(jìn)行小鼠NK活性、淋轉(zhuǎn)試驗(yàn)；免疫三組，進(jìn)行小鼠DTH試驗(yàn)；免疫四組，進(jìn)行小鼠碳廓清試驗(yàn)；免疫五組，進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)。每大組待試驗(yàn)小鼠按體重隨機(jī)分成4小組，每小組10只，按人日推薦量的5倍、10倍、30倍，分別設(shè)0.415、0.830、2.490g/kgBw 3個(gè)劑量組和蒸餾水對(duì)照組。小鼠每天按20mL/kgBW連續(xù)灌胃30d后，分別進(jìn)行以下項(xiàng)目的試驗(yàn)。

碳廓清實(shí)驗(yàn)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）、抗體生成細(xì)胞和血清溶血素、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（半體內(nèi)法）和臟器/體重比值以及ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和小鼠NK細(xì)胞活性測(cè)定按規(guī)范方法[13]進(jìn)行；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析。經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，方差齊的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用LSP法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，方差不齊的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Tambane法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品對(duì)小鼠體重的影響 各組小鼠的體重均增長(zhǎng)，但與對(duì)照組比較，差異均不顯著（p>0.05），結(jié)果如表1。

2.2 樣品對(duì)小鼠臟器/體重比值的影響 各劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與對(duì)照組比較均無顯著性差異（P>0.05），結(jié)果見表2。

2.3 樣品對(duì)正常小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

2.3.1 樣品對(duì)ConA誘導(dǎo)的正常小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響 高劑量組淋巴細(xì)胞增殖明顯高于對(duì)照組，差異顯著（P<0.05），結(jié)果見表3。

2.3.2 樣品對(duì)正常小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)水平（DTH）的影響 與對(duì)照組相比，樣品各劑量組對(duì)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)水平無顯著性差異（p>0.05），結(jié)果見表3。

2.4 樣品對(duì)正常小鼠體液免疫功能的影響

2.4.1 對(duì)正常小鼠血清溶血素的影響 高劑量組抗體積數(shù)明顯高于對(duì)照組，差異顯著（p<0.05），結(jié)果見表3。

2.4.2 對(duì)正常小鼠抗體生成細(xì)胞的影響 高劑量組小鼠溶血空斑的數(shù)量明顯高于對(duì)照組，差異顯著（P<0.05），結(jié)果見表3。

2.5 樣品對(duì)正常小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能的影響

2.5.1 對(duì)正常小鼠碳廓清的影響 高劑量組小鼠的碳廓清吞噬指數(shù)a明顯高于對(duì)照組，差異顯著（P<0.05），結(jié)果見表4。

2.5.2 對(duì)正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響 各劑量組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)與對(duì)照組比較，差異不顯著（P>0.05），結(jié)果見表4。

2.6 對(duì)正常小鼠NK細(xì)胞活性的影響 高劑量組NK細(xì)胞活性明顯高于對(duì)照組，差異顯著（p<0.05），結(jié)果見表4。

3 討論

免疫一詞我國(guó)最早出現(xiàn)于明朝《免疫類方》，是指“免除疫癘”的意思，與中醫(yī)的“祛邪”寓意相通。中醫(yī)認(rèn)為，正氣強(qiáng)弱是決定人體發(fā)病御病的最基本因素，故《黃帝內(nèi)經(jīng)》曰：“正氣存內(nèi)，邪不可干”，經(jīng)過補(bǔ)充人體陰陽(yáng)、氣血、津液等不足，增強(qiáng)人體免疫功能[14]以實(shí)現(xiàn)《黃帝內(nèi)經(jīng)》之“未病先防，既病防變”，即所謂“扶正”能“祛邪”。

縱觀功效，絞股藍(lán)、黃芪皆補(bǔ)脾益肺、武夷巖茶溫中健脾，三藥都能補(bǔ)脾益氣，屬于中醫(yī)的增效配伍。剖析成分，實(shí)驗(yàn)樣品以絞股藍(lán)為主要原料，配以黃芪、茶葉，多種活性成分因子協(xié)同發(fā)揮，從而達(dá)到增強(qiáng)機(jī)體免疫力的保健效果[15-16]。

免疫器官包括中樞免疫器官和外周免疫器官。前者包括胸腺和骨髓，后者包括脾、淋巴結(jié)、消化道、呼吸道和泌尿生殖道淋巴結(jié)。免疫器官的發(fā)育將直接影響機(jī)體的免疫功能[17]。本實(shí)驗(yàn)分別進(jìn)行了碳廓清測(cè)定、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）檢測(cè)、抗體生成細(xì)胞和血清溶血素測(cè)定、抗體生成細(xì)胞檢測(cè)、血清溶血素的測(cè)定、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（半體內(nèi)法）和臟器/體重比值、ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和小鼠NK細(xì)胞活性測(cè)定（乳酸脫氫酶LDH測(cè)定法）、ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、小鼠NK細(xì)胞活性測(cè)定（乳酸脫氫酶LDH測(cè)定法），實(shí)驗(yàn)結(jié)果高劑量的樣品對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力、體液免疫、NK細(xì)胞活性、小鼠碳廓清能力等方面均有增強(qiáng)作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果全面可信。

綜上所述，高劑量的絞股藍(lán)黃芪保健茶樣品對(duì)小鼠多個(gè)免疫功能具有良好的增強(qiáng)作用，提示該配方產(chǎn)品具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力功能，同時(shí)很好地體現(xiàn)傳統(tǒng)中醫(yī)扶正治療的原則。

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（責(zé)編：王慧晴）