劉勃纓 ，姜雙瑜 ，李新悅 ，吳玉梅 ，張 瀛 ，徐松林

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，現(xiàn)代中藥發(fā)現(xiàn)與制劑技術(shù)教育部工程中心，天津300193；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津300193；3.浙江海昶生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，杭州310000）

阿司匹林（asprin，ASP）又名乙酰水楊酸，具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗癌、抗風(fēng)濕作用[1]，另外，阿司匹林能夠降低血小板黏附力，可以防止血栓形成和降低心腦血管疾病發(fā)病率，已常規(guī)用于冠心病及腦血栓的防治[2]。阿司匹林是傳統(tǒng)的非類(lèi)固醇抗炎藥，它最大的問(wèn)題是消化道的毒副作用[3-6]，由于其酸性成分可透過(guò)胃黏膜上皮脂蛋白膜層，破壞脂蛋白膜的保護(hù)作用，使胃酸可逆地彌散到組織中損傷細(xì)胞，導(dǎo)致毛細(xì)血管破損而出血，這種嚴(yán)重的胃腸道不良反應(yīng)限制了其在臨床的應(yīng)用[7-10]。磷脂（phospholipid，PC）復(fù)合物是指藥物與PC以一定的配比關(guān)系結(jié)合而成的復(fù)合物[11]。磷脂是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)，它存在于人體的每一個(gè)細(xì)胞中，是細(xì)胞膜主要成分，在生物體內(nèi)降解，無(wú)毒性、無(wú)免疫原性，可以降低阿司匹林對(duì)胃腸道的刺激[12-13]。本文通過(guò)大鼠胃腸道刺激性實(shí)驗(yàn)來(lái)探究磷脂復(fù)合物對(duì)阿司匹林造成的胃腸道損傷的改善作用，從而為傳統(tǒng)的非類(lèi)固醇抗炎藥的劑型研究提供新的方向。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 阿司匹林普通腸溶片劑（浙江海昶生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號(hào)16112103-02,規(guī)格：81 mg）；阿司匹林磷脂復(fù)合物（浙江海昶生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號(hào)：16122801,阿司匹林含量：42.7%）；阿司匹林磷脂復(fù)合物膠囊（浙江海昶生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號(hào)16122802，規(guī)格：81 mg）；生理鹽水（山東康寧藥業(yè)有限公司）；多聚甲醛、甲醛溶液（天津市康科德科技有限公司）。

1.2 主要儀器 ASP200S自動(dòng)真空組織脫水機(jī)，Leica EG1150H自動(dòng)生物組織包埋機(jī)，Leica RM2255切片機(jī)，NikonCi-L顯微鏡。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量（220±20）g[天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（軍）2014-0001]。動(dòng)物室溫度：（25±2）℃，相對(duì)濕度：（50±2）℃。健康雄性SD大鼠分為4組，每組10只，分別給予生理鹽水（2 mL）、阿司匹林片劑、阿司匹林磷脂復(fù)合物膠囊和阿司匹林磷脂復(fù)合物膠囊內(nèi)容物，每次按300 mg/kg阿司匹林灌胃給藥。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物處理 實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食12 h，每日灌胃1次，連續(xù)給藥14 d，后頸椎脫臼法處死動(dòng)物并解剖取胃，向胃內(nèi)注射多聚甲醛溶液2 mL。將胃浸入10%甲醛固定液中浸泡10 min，沿胃大彎開(kāi)胃，生理鹽水洗凈胃內(nèi)容物，所有胃組織均以10%甲醛固定液固定24 h，制作病理組織切片，照相，觀察胃部潰瘍的發(fā)生情況。

1.4.2 組織制片與觀察 解剖取材固定于10%甲醛固定液固定，組織經(jīng)ASP200S自動(dòng)真空組織脫水機(jī)脫水浸蠟，Leica EG1150H自動(dòng)生物組織包埋機(jī)包埋，Leica RM2255切片機(jī)制片，HE染色，NikonCi-L顯微鏡觀察,HMIAS-2000高清晰度數(shù)碼顯微圖像分析系統(tǒng)采圖。

1.4.3 參考評(píng)價(jià)依據(jù) 根據(jù)胃黏膜的完整性及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)情況分為以下4種情況：正常（0分）胃黏膜結(jié)構(gòu)完整，上皮細(xì)胞無(wú)缺損或脫落，排列整齊，胃底腺形狀規(guī)則，黏膜層偶見(jiàn)少量散在的炎癥細(xì)胞；輕度（1分）胃黏膜結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，上皮細(xì)胞無(wú)缺損或脫落，黏膜上皮及胃底腺整體排列較規(guī)則或局部欠規(guī)則，黏膜層上1/3可見(jiàn)較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；中度（2分）胃黏膜結(jié)構(gòu)不完整，黏膜上皮及胃底腺排列不規(guī)則，部分上皮細(xì)胞缺損或脫落壞死，黏膜層上2/3伴較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；重度（3分）上皮細(xì)胞成片缺損或脫落壞死，黏膜層大于2/3甚至全層伴大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，胃底腺結(jié)構(gòu)紊亂。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行相應(yīng)的處理及分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以分級(jí)評(píng)分表示，無(wú)損傷為0分,輕度1分，中度2分,重度3分。各組間的數(shù)據(jù)采用秩和檢驗(yàn)分析方法進(jìn)行分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察結(jié)果 將病理切片分別置于低倍鏡和高倍鏡觀察胃的損傷情況，結(jié)果見(jiàn)圖1、2。

圖1 顯微鏡下觀察到的胃損傷圖像（×4）Fig 1 Images of the gastric injury observed with microscope（×4）

圖2 顯微鏡下觀察到的胃損傷圖像（×10）Fig 2 Images of the gastric injury observed with microscope（×10）

由圖1、2可知，對(duì)照組見(jiàn)胃黏膜結(jié)構(gòu)完整，上皮細(xì)胞排列整齊，上皮細(xì)胞未見(jiàn)明顯缺損或脫落，胃底腺形狀規(guī)則，黏膜層偶見(jiàn)少量散在的炎癥細(xì)胞，黏膜肌層無(wú)增厚及向黏膜層擴(kuò)張現(xiàn)象；4/10只動(dòng)物黏膜下層至肌層間見(jiàn)輕度充血和水腫。

阿司匹林片劑組鏡下胃黏膜結(jié)構(gòu)較完整，黏膜上皮排列規(guī)則，7/10胃底腺局部排列欠規(guī)則，黏膜層4/10輕度至重度以嗜中性粒細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，7/10輕度至中度充血；9/10只動(dòng)物黏膜下層至肌層間見(jiàn)輕度至中度充血和輕度水腫，8/10只動(dòng)物輕度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

阿司匹林磷脂復(fù)合物組鏡下胃黏膜結(jié)構(gòu)較完整，黏膜上皮排列規(guī)則，4/10胃底腺形狀規(guī)則，黏膜層偶見(jiàn)少量散在的炎癥細(xì)胞，6/10輕度充血；4/10只動(dòng)物黏膜下層至肌層間見(jiàn)輕度充血，8/10輕度水腫，2/10只動(dòng)物輕度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

阿司匹林復(fù)合物膠囊組鏡下胃黏膜結(jié)構(gòu)較完整，黏膜上皮排列規(guī)則，4/10胃底腺局部排列欠規(guī)則，黏膜層3/10少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，5/10輕度充血；9/10只動(dòng)物黏膜下層至肌層間見(jiàn)輕度至中度充血，8/10輕度水腫，4/10只動(dòng)物輕度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

2.2 損傷情況 口服給藥14 d后胃潰瘍發(fā)生率見(jiàn)表1，由表可知，生理鹽水對(duì)照組胃潰瘍情況最低，阿司匹林普通片劑組胃潰瘍發(fā)生率最高，4組實(shí)驗(yàn)對(duì)象具體胃損傷情況見(jiàn)表2。

表1 口服給藥14 d后各組胃損傷發(fā)生率Tab 1 Incidence of gastric injury after oral administration of 14 d in each group

表2 各組胃損傷情況評(píng)分Tab 2 Gastric damage score in each group

由表1可知，對(duì)照組胃潰瘍發(fā)生率最低，阿司匹林磷脂復(fù)合物組和膠囊組相對(duì)較高，阿司匹林普通片劑組胃潰瘍發(fā)生率最高；采用秩和檢驗(yàn)對(duì)表2所示的每組各級(jí)別損傷的樣本數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，比較各組間差異，結(jié)果為阿司匹林普通片劑組與對(duì)照組生理鹽水相比，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；阿司匹林磷脂復(fù)合物組和阿司匹林磷脂復(fù)合物膠囊組與對(duì)照組相比，結(jié)果均為P＞0.05，沒(méi)有顯著性差異；阿司匹林片劑組與阿司匹林磷脂復(fù)合物組、阿司匹林磷脂復(fù)合物膠囊組相比，結(jié)果均為P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。說(shuō)明阿司匹林磷脂復(fù)合物能有效降低阿司匹林對(duì)胃腸道的損傷。

3 討論

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道了多種類(lèi)型的藥物與磷脂在一定條件下形成磷脂復(fù)合物后，使藥物的理化性質(zhì)發(fā)生改變[14-16]。許建文等[17]對(duì)水飛薊賓-磷脂酞膽堿復(fù)合物的急性毒性的研究表明復(fù)合物的安全范圍很大，安全性好，其機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。目前，藥物磷脂復(fù)合物已應(yīng)用于普通藥用劑型中，如已經(jīng)用于糖漿劑、片劑、膜劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液和適合局部用藥的乳劑、凝膠、水分散體等[18-20]。

本文通過(guò)兩周灌胃給藥后對(duì)大鼠胃部取材并制作病理切片，觀察阿司匹林藥物對(duì)胃腸道的損傷情況，通過(guò)與普通阿司匹林腸溶片比較可以發(fā)現(xiàn)，加工成阿司匹林磷脂復(fù)合物后對(duì)胃腸道的損傷明顯改善，這應(yīng)該與磷脂本身的性質(zhì)有關(guān)。活性成分通過(guò)與磷脂的極性基團(tuán)相互作用而被固定，而磷脂的兩個(gè)長(zhǎng)脂肪酸鏈不參與復(fù)合反應(yīng)可自由移動(dòng)，形成一個(gè)親脂性的表面[21]，多個(gè)磷脂復(fù)合物分子有序排列形成一個(gè)球狀體將藥物中具有不良反應(yīng)和刺激性的基團(tuán)包裹起來(lái)，從而使得藥物的不良反應(yīng)及刺激性明顯下降[17]，確切的機(jī)制還有待研究。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，阿司匹林磷脂復(fù)合物組胃組織無(wú)明顯病變，胃損傷情況與普通片劑組相比有顯著性差異（P＜0.05），但將磷脂復(fù)合物制成膠囊對(duì)胃腸道保護(hù)作用沒(méi)有明顯提高，這可能是由于在給藥環(huán)節(jié)無(wú)法將整粒膠囊讓動(dòng)物吞服，只能將膠囊內(nèi)容物取出溶解再灌胃，從而失去膠囊這一劑型本身的優(yōu)勢(shì)，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，但膠囊的劑型從生物利用度到患者順應(yīng)性都有重要意義和研究空間。

[1]賀智勇，吳朝花，嚴(yán)俊麗，等.阿司匹林磷脂復(fù)合物的制備及其表征[J].中國(guó)藥房，2017，28（25）：3562

[2]李成軍，馬丹丹，祝友朋，等.阿司匹林對(duì)大鼠胃潰瘍愈合的影響和機(jī)制[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31（15）：2898

[3]丁順，王昕.生姜對(duì)阿司匹林誘發(fā)胃潰瘍大鼠的胃粘膜保護(hù)作用研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2012，21（21）：22

[4]顧同進(jìn)，曹憶嶸.低劑量阿司匹林對(duì)黏膜損傷的防治[J].老年醫(yī)學(xué)與保健，2007，13（1）：58

[5]練新飛，向定成.服藥時(shí)間對(duì)腸溶阿司匹林胃腸道副作用的影響[J].中國(guó)煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2005，8（5）：457

[6]Li J P，Guo J M，Hua Y Q，et al.The mixture of Salvia miltiorrhiza-Carthamus tinctorius (Danhong injection)alleviates low-dose aspirin induced gastric mucosal damage in rats[J].Phytomedicine，2016，23（6）：662

[7]辛文妤，張雷明，王天，等.娑羅子提取物對(duì)阿司匹林致胃潰瘍作用的研究[J].中國(guó)藥物警戒，2010，7（6）：321

[8]Mccarthy D M.Efficacy and gastrointestinal risk of aspirin used for the treatment of pain and cold[J].Best Pract Res Clin Gastroenterol，2012，26（2）：101

[9]Saha L，Bhatia A，Chakrabarti A.Gastroprotective effect of bezafibrate，a peroxisome proliferator activated receptor agonist and its mechanism in a rat model of aspirin-induced gastric ulcer[J].Advanc Digest Med，2016，3(3)：101

[10]Elshinnawy N A，Abdelmageid S A，Alshailabi E M.Evaluation of antiulcer activity of indole-3-carbinol and/or omeprazole on aspirin-induced gastric ulcer in rats[J].Toxicol Ind Health，2014，30(4)：357375

[11]顧海濱.藥物磷脂復(fù)合物的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2015，13(33)：33

[12]翟光喜，婁紅祥，鄒立家，等.藥物磷脂復(fù)合物的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2001，36(12)：10

[13]郝海軍，張紅芹，賈幼智，等.采用制劑新技術(shù)提高中藥磷脂復(fù)合物的溶出度和生物利用度研究進(jìn)展 [J].中草藥，2013，44(17)：2474

[14]Semalty A，Semalty M，Singh D，et al.Development and characterizationofaspirin-phospholipidcomplexforimproveddrugdelivery[J].EpigenetPsychiatr，2010，35(2)：79

[15]Tarnawski A S.Cellular and molecular mechanisms of gastrointestinal ulcer healing[J].Digest Dis Sci，2005，50(1)：S24

[16]Giraud M N，Sanduja S K，F(xiàn)elder T B，et al.Effect of omeprazole on the bioavailability of unmodified and phospholipid-complexed aspirin in rats[J].Aliment Pharm Therap，2015，11(5)：899

[17]許建文，張光軍，陳正躍.水飛薊賓-卵磷脂復(fù)合物制備工藝比較[J].中國(guó)生化藥物雜志，2002，23(5)：245

[18]凌沛學(xué)，湯漩，王鳳山，等.藥物與磷脂復(fù)合物研究近況[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2005，40(6)：401

[19]丁冬梅，張振海，蔣艷榮，等.中藥磷脂復(fù)合物的研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2013，38(13)：2046

[20]李瑾，朱美娟，周凱，等.丹酚酸B磷脂復(fù)合物的制備和質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].廣州化工，2016，44(21)：26

[21]廉潔，王伯初.藥物磷脂復(fù)合物工藝評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及應(yīng)用研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通訊，2006，17(5)：830