羅涵夫，齊 曉，麥靖雯，張巨明

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與風(fēng)景園林學(xué)院，廣東 廣州 510642； 2.廣東省草業(yè)工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510642；3.全國(guó)畜牧總站全國(guó)草品種審定委員會(huì)辦公室，北京100125)

在知識(shí)和經(jīng)濟(jì)全球化迅猛發(fā)展的大背景下，我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品在質(zhì)量、價(jià)格和知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)等方面面臨著全球化帶來(lái)的激烈競(jìng)爭(zhēng)。因此建立以知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)為基礎(chǔ)的植物新品種保護(hù)體系，對(duì)提高我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力有著重要作用[1]。截至2016年4月，農(nóng)業(yè)部已公布了9批、93種植物新品種保護(hù)名錄，授予新品種權(quán)7 443個(gè)，有效品種權(quán)5 209件；國(guó)家林業(yè)局已公布5批、198種植物新品種保護(hù)名錄，授予新品種權(quán)913個(gè)[2]。我國(guó)新品種保護(hù)工作取得了巨大的進(jìn)展。

對(duì)植物新品種的特異性(distinctness)、一致性(uniformity)和穩(wěn)定性(stability)測(cè)試，簡(jiǎn)稱DUS測(cè)試，由國(guó)際植物新品種保護(hù)聯(lián)盟(International Union for the Protection of New Varieties of Plants,UPOV)提出，其是植物新品種保護(hù)的技術(shù)基礎(chǔ)和授權(quán)依據(jù)[3]。美國(guó)、歐洲和日本等國(guó)家研究較早，我國(guó)直到1998年才開(kāi)始DUS測(cè)試研究及測(cè)試工作[4]。1997年10月1日，我國(guó)頒布《植物新品種保護(hù)條例》，規(guī)定品種授權(quán)必須具有新穎性、特異性、一致性和穩(wěn)定性。開(kāi)展新品種保護(hù)的技術(shù)條件是建立新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性的測(cè)試體系。截至2015年，我國(guó)共開(kāi)展366個(gè)測(cè)試指南的研制工作,已完成了186種植物的DUS測(cè)試指南研制，發(fā)布了16種植物DNA指紋圖譜鑒定方法[5]。而UPOV已經(jīng)開(kāi)展了592個(gè)測(cè)試指南的研制工作，頒布了281個(gè)種屬(2013年)的測(cè)試指南；日本也開(kāi)展了500多個(gè)種屬的指南研制工作[1]。

結(jié)縷草屬(Zoysia)隸屬于禾本科(Gramineae)，包括11個(gè)種和部分變種和變型，我國(guó)有5個(gè)種、2個(gè)變種、1個(gè)變型，其中5個(gè)種為結(jié)縷草(Z.japonica)、中華結(jié)縷草(Z.sinica)、大穗結(jié)縷草(Z.macrostachya)、溝葉結(jié)縷草(Z.matrella)和細(xì)葉結(jié)縷草(Z.tenuifolia)，2個(gè)變種為長(zhǎng)花結(jié)縷草(Z.sinicavar.nipponica)和青結(jié)縷草(Z.japonicavar.pollida)，1個(gè)變型為大穗日本結(jié)縷草(Z.japonicaf.macrostachya)[6-7]。結(jié)縷草原產(chǎn)于我國(guó)，是我國(guó)重要的草坪草種質(zhì)資源，其抗逆性強(qiáng)，耐磨，對(duì)水肥需求低，被公認(rèn)為環(huán)境友好型草坪草，廣泛應(yīng)用于亞熱帶和溫帶地區(qū)。結(jié)縷草屬植物于2014年被中國(guó)農(nóng)業(yè)部列入第10批新品種保護(hù)名錄，同年4月，農(nóng)業(yè)部頒布實(shí)施《植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南結(jié)縷草屬》農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，這為我國(guó)結(jié)縷草品種保護(hù)工作奠定了基礎(chǔ)。根據(jù)國(guó)家草品種區(qū)域試驗(yàn)的要求，從2016年開(kāi)始對(duì)申報(bào)品種在區(qū)域試驗(yàn)的基礎(chǔ)上還需進(jìn)行DUS測(cè)試。但由于我國(guó)結(jié)縷草DUS測(cè)試指南2014年才頒布，還未見(jiàn)對(duì)結(jié)縷草新品種的測(cè)試報(bào)道。華南農(nóng)業(yè)大學(xué)2016年接受了農(nóng)業(yè)部2個(gè)結(jié)縷草申請(qǐng)品種的DUS測(cè)試任務(wù)，首次按結(jié)縷草屬DUS測(cè)試指南，對(duì)結(jié)縷草進(jìn)行了連續(xù)2個(gè)獨(dú)立生長(zhǎng)周期DUS測(cè)試，從12個(gè)數(shù)量性狀中選取8個(gè)需要測(cè)量的數(shù)量性狀進(jìn)行分析，以期驗(yàn)證、優(yōu)化結(jié)縷草DUS測(cè)試判定方法，為結(jié)縷草新品種DUS測(cè)試性狀的判定提供更可靠充分的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料共10份(表1)，分別為不同的種、品種(系)，其中測(cè)試申請(qǐng)品種2個(gè)，分別為廣綠結(jié)縷草(以下簡(jiǎn)稱廣綠)、Z0413-1雜交結(jié)縷草(以下簡(jiǎn)稱Z0413-1)；對(duì)應(yīng)的近似品種2個(gè)，分別為蘭引Ⅲ號(hào)結(jié)縷草(以下簡(jiǎn)稱蘭引Ⅲ號(hào))、Diamond結(jié)縷草(以下簡(jiǎn)稱Diamond)；以及6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品種，分別為大穗結(jié)縷草、青島結(jié)縷草、中華結(jié)縷草、溝葉結(jié)縷草、細(xì)葉結(jié)縷草和蘭引Ⅱ號(hào)結(jié)縷草。供試材料均為營(yíng)養(yǎng)莖。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

申請(qǐng)品種和近似品種相鄰種植。種植分為單株種植(單株區(qū))和密植種植(密植區(qū))。單株區(qū)每個(gè)品種種植15株，株行距1.5 m；密植區(qū)小區(qū)面積1 m×2 m，株行距5 cm×15 cm，設(shè)置2個(gè)重復(fù)。

1.3 試驗(yàn)實(shí)施

試驗(yàn)地位于廣東增城華南農(nóng)業(yè)大學(xué)寧西實(shí)驗(yàn)基地，海拔約41 m，地形平坦，坡向西南，土壤類型為壤土，土壤有機(jī)質(zhì)含量1.65%，速效N含量12.25 clamg·kg-1，速效P含量49.08 mg·kg-1，速效K含量142.02 mg·kg-1，土壤pH 6.61。試驗(yàn)時(shí)間為2016年7月10日到2017年9月30日，連續(xù)進(jìn)行兩個(gè)年度兩個(gè)完整生長(zhǎng)周期的測(cè)試。種植采用營(yíng)養(yǎng)莖繁殖方式，取含2～3個(gè)莖節(jié)、長(zhǎng)5～8 cm、生長(zhǎng)一致的營(yíng)養(yǎng)莖扦插。單株區(qū)每穴扦插3枝，深度3～5 cm，成活后保留1枝，用于觀測(cè)；密植區(qū)按株行距扦插，深度3～5 cm。田間管理按常規(guī)管理措施，每月施肥一次，施用“挪威牌”復(fù)合肥(總養(yǎng)分45%；N、P、K養(yǎng)分比例各占15%)，施肥量為30 g·m-2；每周澆水1～2次；根據(jù)小區(qū)具體生長(zhǎng)情況及時(shí)拔除雜草并開(kāi)展病蟲(chóng)害防治；單株區(qū)不修剪，密植區(qū)修剪，生長(zhǎng)季節(jié)每周修剪一次，剪草高度3～5 cm。

表1 結(jié)縷草DUS測(cè)試品種材料名稱Table 1 Names of Zoysiagrass varieties for DUS testing

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

試驗(yàn)按照《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南結(jié)縷草屬》[8]，從12個(gè)數(shù)量性狀中剔除4個(gè)目測(cè)數(shù)量性狀(即測(cè)試指南中觀測(cè)方法為VG或VS),選取植株自然高度和匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)度等8個(gè)需要測(cè)量的數(shù)量性狀(即測(cè)試指南中觀測(cè)方法為MG或MS)。數(shù)量性狀用直尺、游標(biāo)卡尺和電子天平測(cè)量(表2)，并進(jìn)行代碼法分級(jí)和統(tǒng)計(jì)分析。

代碼法是指對(duì)于某個(gè)特定的性狀，依據(jù)種植試驗(yàn)中記錄的品種表達(dá)狀態(tài)進(jìn)行特異性評(píng)價(jià)。測(cè)試指南中每一個(gè)數(shù)量性狀都規(guī)定了不同的分級(jí)及相應(yīng)代碼和描述，測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)品種，使用公式(1)計(jì)算得到數(shù)量性狀分級(jí)的級(jí)差。

R=(Vi-Vj)/(Ci-Cj)。

(1)

式中：R為數(shù)量性狀分級(jí)的級(jí)差，Vi、Vj為該性狀標(biāo)準(zhǔn)品種測(cè)量均值，Ci、Cj為標(biāo)準(zhǔn)品種對(duì)應(yīng)的代碼。

分級(jí)范圍的上下限通過(guò)公式(2)、(3)計(jì)算得到。

S上=(n-i+0.5)×R+Vi；

(2)

S下=(n-i-0.5)×R+Vi。

(3)

式中：S上、S下為代碼n對(duì)應(yīng)分級(jí)范圍的上限和下限，i為標(biāo)準(zhǔn)品種對(duì)應(yīng)的代碼，R為級(jí)差，Vi為標(biāo)準(zhǔn)品種測(cè)量均值。

再測(cè)量申請(qǐng)品種，根據(jù)其所屬的分級(jí)范圍，最后確定其對(duì)應(yīng)的代碼及描述。申請(qǐng)品種與其近似品種代碼和描述相同，則表示沒(méi)有差異，反之表示有差異。

統(tǒng)計(jì)分析采用Excel 2010、SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理及兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，在0.05水平下進(jìn)行比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 數(shù)量性狀測(cè)試結(jié)果

從2016年7月到2017年9月，對(duì)結(jié)縷草測(cè)試材料8個(gè)數(shù)量性狀連續(xù)兩個(gè)生長(zhǎng)季做DUS測(cè)試，結(jié)果表明，無(wú)論是標(biāo)準(zhǔn)品種，還是測(cè)試種或近似種，年度間性狀表現(xiàn)差異很大(表3)。

2.2 代碼法分析

在2016年至2017年連續(xù)兩年測(cè)試中，通過(guò)測(cè)量測(cè)試指南規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)品種，分別計(jì)算得到2016年和2017年8個(gè)數(shù)量性狀的不同代碼所對(duì)應(yīng)的分級(jí)范圍(表4、表5)。

表2 結(jié)縷草DUS測(cè)試數(shù)量性狀及觀測(cè)方法Table 2 Quantitative characteristics and methods for zoysiagrass DUS testing

MG，群體測(cè)量； MS，個(gè)體測(cè)量； PNH，植株自然高度；SLOI，匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)；SD,匍匐莖直徑；LL,葉長(zhǎng)；LW,葉寬；IL,花序長(zhǎng)度；INOS,花序小穗數(shù)；KGW,千粒重。下同。

MG, measurement of a group of plants or parts of plants; MS, measurement of a number of individual plants or parts of plants; PNH, plant natural height; SLOI, stolon length of internode; SD, stolon diameter; LL, leaf length; LW, leaf width; IL, inflorescence length; INOS, Inflorescence numbers of spikelet; KGW, kilo grain weight. similarly for the following tables.

表3 結(jié)縷草DUS測(cè)試數(shù)量性狀測(cè)試結(jié)果Table 3 Results of quantitative characteristics measurement of zoysiagrass DUS testing

標(biāo)準(zhǔn)品種i和標(biāo)準(zhǔn)品種j為測(cè)試指南所選定的對(duì)應(yīng)性狀的2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品種。

Standard varietyiand standard varietyjare two standard varieties for corresponding characteristics.

根據(jù)表4和表5測(cè)定分級(jí)范圍及代碼，分別對(duì)表3測(cè)定結(jié)果進(jìn)行特異性判別，得到2016年和2017年兩個(gè)測(cè)試種的特異性判別結(jié)果(表6)。2016年度申請(qǐng)品種廣綠與其近似品種有5個(gè)性狀有差異，其中匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)、葉長(zhǎng)、種子千粒重3個(gè)性狀的差異大于1個(gè)級(jí)差；而申請(qǐng)品種Z0413-1與其近似品種有3個(gè)有差異的性狀，分別為匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)、葉寬、花序小穗數(shù)，但3個(gè)有差異的性狀級(jí)差均為1(表6)。2017年度申請(qǐng)品種廣綠與其近似品種僅有4個(gè)有差異的性狀。2016年與2017年相比，性狀匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)，葉長(zhǎng)，葉寬3個(gè)性狀在兩年獨(dú)立的測(cè)試中均表現(xiàn)為有差異，而株高、花序長(zhǎng)和種子千粒重3個(gè)性狀僅在一年中表現(xiàn)出差異；申請(qǐng)品種Z0413-1與其近似品種在匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)和花序小穗數(shù)2個(gè)性狀在兩年獨(dú)立的測(cè)試中均表現(xiàn)為有差異，而性狀株高和葉寬僅在一年中有差異。

表4 2016年測(cè)試數(shù)量性狀分級(jí)范圍及代碼Table 4 Scales and notes of quantitative characteristics in 2016

表5 2017年測(cè)試數(shù)量性狀分級(jí)范圍及代碼Table 5 Scales and notes of quantitative characteristics in 2017

2.3 數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析

對(duì)數(shù)量性狀測(cè)定結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)(表7)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，2016年度申請(qǐng)品種廣綠與其近似品種在匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)、葉寬、葉長(zhǎng)、花序長(zhǎng)和種子千粒重5個(gè)性狀上有顯著差異差異(P<0.05)；2017年度廣綠匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)、葉長(zhǎng)和種子千粒重3個(gè)性狀上存在顯著差異(P<0.05)。

2016年度申請(qǐng)品種Z0413-1與其近似品種在匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)、葉寬、花序長(zhǎng)、花序小穗數(shù)和種子千粒重5個(gè)性狀上存在顯著差異(P<0.05)。2017年度的測(cè)試中，在株高、匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)、葉片長(zhǎng)、葉寬、花序長(zhǎng)度、花序小穗數(shù)和種子千粒重7個(gè)性狀上存在顯著差異(P<0.05)。

2.4 代碼法和數(shù)理統(tǒng)計(jì)法分析結(jié)果對(duì)比

代碼法和數(shù)理判別結(jié)果不盡相同(表8)。代碼法判定有特異性的數(shù)量性狀不一定在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異，而判定為沒(méi)有特異性的數(shù)量性狀在統(tǒng)計(jì)學(xué)上卻有顯著差異。

表6 數(shù)量性狀代碼法判別結(jié)果Table 6 Results ofquantitative characteristicswith the note method

Y，具備特異性；N，不具備特異性。下同。

Y, With distinctness; N, without distinctness; similarly for the following tables.

從對(duì)比結(jié)果可以看出，2016年度申請(qǐng)品種廣綠與其近似品種的統(tǒng)計(jì)結(jié)果與“代碼”法判別結(jié)果完全相同，而2017年度的測(cè)試在株高和葉寬上兩種方法判定有差異。2016年度申請(qǐng)品種Z0413-1與其近似品種的統(tǒng)計(jì)結(jié)果和代碼法判別結(jié)果基本一致，在花序長(zhǎng)和種子千粒重上兩種方法判定有差異。而2017年度的測(cè)試中在葉長(zhǎng)、葉寬、花序長(zhǎng)和種子千粒重4個(gè)性狀上，代碼法判定沒(méi)有特異性，而t檢驗(yàn)結(jié)果顯示差異顯著(P<0.05)。

3 討論與結(jié)論

數(shù)量性狀是以一維的、線性等級(jí)進(jìn)行描述的性狀，這種一維、線性和連續(xù)變化的特性決定了該性狀不能單純依靠性狀所處的分級(jí)范圍相同與否來(lái)判斷申請(qǐng)品種與其近似品種特異性有無(wú)[9]。本研究結(jié)果證明了這一點(diǎn)：部分處于相鄰分級(jí)范圍的數(shù)量性狀，實(shí)際上并沒(méi)有顯著性差異，如廣綠的葉寬，株高等就屬于這種情況。2017年度申請(qǐng)品種廣綠葉片寬度(3.84 mm)與其近似品種蘭引Ⅲ號(hào)葉片寬度(4.28 mm)之間無(wú)顯著差異(P<0.05)，卻落入了分級(jí)邊界(3.9 mm)左右，被賦予了‘6’和‘7’兩個(gè)不同的描述代碼。為了避免兩個(gè)品種都非常接近同一分級(jí)值(如代碼6的上端和代碼7的下端)導(dǎo)致的代碼法和數(shù)理統(tǒng)計(jì)法判定出現(xiàn)差異，陳海榮和顧曉君[10]認(rèn)為，在符合一致性和穩(wěn)定性要求的情況下，若申請(qǐng)品種與其近似品種的性狀取值的平均數(shù)分別處于非相鄰的分級(jí)范圍，或者處于相鄰分級(jí)范圍，但兩者之間的差值大于該性狀的級(jí)差時(shí)，則認(rèn)定兩者存在明顯差異，說(shuō)明申請(qǐng)品種具備特異性；若申請(qǐng)品種與其近似品種的性狀取值的平均數(shù)處于相鄰的分級(jí)范圍，且兩者之間的差值小于或等于該性狀的級(jí)差時(shí)，即可認(rèn)定申請(qǐng)品種與其近似品種間不存在顯著差異，說(shuō)明申請(qǐng)品種不具備特異性。但這也不是判定特異性的絕對(duì)標(biāo)準(zhǔn)。隨著育種技術(shù)的日新月異，新品種之間的差異較測(cè)試指南制定時(shí)，品種間的差異更加精細(xì)，而且受品種測(cè)試地點(diǎn)、年份、環(huán)境差異或表達(dá)程度等因素的影響[11]。

為確保數(shù)量性狀特異性判別結(jié)果的科學(xué)性和客觀性，本研究在代碼法判別的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步進(jìn)行了數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)特異性進(jìn)行綜合判定。數(shù)量性狀特異性判定既要符合DUS測(cè)試特異性判別要求，又要同時(shí)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著性要求，可分3種情形判定。第一，如果某一數(shù)量性狀在2個(gè)年度的測(cè)試中2種判定方法均判定為有差異，則可認(rèn)為申請(qǐng)品種在該性狀上具備特異性，如廣綠結(jié)縷草測(cè)試中的性狀匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)、葉長(zhǎng)和Z0413-1結(jié)縷草測(cè)試中的性狀匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)、花序小穗數(shù)；第二，如果某一數(shù)量性狀在2個(gè)年度的測(cè)試中數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析均有差異且僅有其中1個(gè)年度的代碼法判定沒(méi)有差異，也可認(rèn)為申請(qǐng)品種在該性狀上具備特異性，因?yàn)檫@極有可能是兩個(gè)品種該年度的測(cè)量值很接近同一分級(jí)邊界值導(dǎo)致代碼法判定沒(méi)有差異，只能通過(guò)數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行判定，如廣綠結(jié)縷草測(cè)試中的種子千粒重和Z0413-1結(jié)縷草測(cè)試中的葉寬；第三，其他情況，如代碼法判別連續(xù)2個(gè)年度均沒(méi)有特異性，統(tǒng)計(jì)法連續(xù)2個(gè)年度均沒(méi)有顯著差異，代碼法判別有1個(gè)年度有特異性但統(tǒng)計(jì)法連續(xù)2個(gè)年度均沒(méi)有顯著差異等，均不能判定申請(qǐng)品種在該性狀上具備特異性。根據(jù)以上判別原則，本研究申請(qǐng)品種廣綠結(jié)縷草與其近似品種蘭引Ⅲ號(hào)結(jié)縷草相比，在匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)、葉長(zhǎng)和種子千粒重3個(gè)數(shù)量性狀上具備特異性；申請(qǐng)品種Z0413-1結(jié)縷草與其近似品種Diamond結(jié)縷草相比，在匍匐莖節(jié)間長(zhǎng)、花序小穗數(shù)和葉寬3個(gè)數(shù)量性狀上具備特異性。

表7 數(shù)量性狀t檢驗(yàn)結(jié)果Table 7 T-test result of quantitative characteristics

數(shù)據(jù)后“*”表示申請(qǐng)品種與近似品種該性狀在0.05水平上有顯著差異。

Value with ‘*’ indicate significant differences among candidate variety and selecting variety at the 0.05 level.

表8 測(cè)量性狀t檢驗(yàn)和代碼法結(jié)果對(duì)比Table 8 Quantitative characteristics comparison between t-test result and note assessment

國(guó)外的DUS測(cè)試起步早，特異性判別方法較為專業(yè)、系統(tǒng)和先進(jìn)。針對(duì)植物新品種DUS測(cè)試自身特性，UPOV有關(guān)專家研制出了一種跨年度綜合特異性的方法(Combined Over-Years Distinctness Criterion,COYD)。該方法考慮到了年度間的變異，主要用于異花授粉品種，也可以用于自花授粉和無(wú)性繁殖品種。除此之外，還開(kāi)發(fā)了數(shù)據(jù)庫(kù)自動(dòng)篩選程序(GAIA法)，該程序可以完成不同品種(尤其是成對(duì)材料)間數(shù)量性狀、質(zhì)量性狀和電泳測(cè)試性狀的分析比較，對(duì)于申請(qǐng)品種和近似品種過(guò)于相近的情況具有較好的辨別和分析能力[12]。除了傳統(tǒng)的DUS測(cè)試，DNA分子標(biāo)記技術(shù)已經(jīng)廣泛地用于植物新品種鑒定和檢測(cè)試驗(yàn)中。李汝玉等[13]認(rèn)為，SSR標(biāo)記是植物品種特異性鑒定的最好方法。已成功運(yùn)用于油菜(Brassicanapus)[14]、小麥(Triticumaestivum)[15]、大麥(Hordeumvulgare)[16]和西瓜(Citrulluslanatus)[17]等多種作物的DUS測(cè)試。目前，我國(guó)玉米(Zeamays)和水稻(Oryzasativa)品種鑒定的指紋方法已經(jīng)成為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[1]。草品種中的柱花草(Stylosanthesspp．)[18]、牛鞭草(Hemarthriaaltissima)[19]和苜蓿(Medicagosativa)[20]也已經(jīng)完成了DNA指紋圖譜的構(gòu)建。我國(guó)DUS測(cè)試研究及實(shí)施較晚，還沒(méi)有COYD等測(cè)試方法的報(bào)道，今后除了完善符合國(guó)情的DUS測(cè)試體系，加快DNA指紋圖譜的構(gòu)建，還要借鑒國(guó)外成熟的經(jīng)驗(yàn)，盡早開(kāi)展COYD研究工作，并開(kāi)發(fā)我國(guó)自己的GAIA程序，這應(yīng)該是我國(guó)DUS測(cè)試的研究方向。

參考文獻(xiàn)References:

[1] 張肖娟,孫振元.植物新品種保護(hù)與DUS測(cè)試的發(fā)展現(xiàn)狀.林業(yè)科學(xué)研究,2011,24(2):247-252.

Zhang X J,Sun Z Y.Development status of new plant variety protection and DUS testing.Forest Research,2011,24(2):247-252.(in Chinese)

[2] 李新一.加快我國(guó)新草品種保護(hù)工作.中國(guó)飼料,2016(15):28-31,43.

Li X Y.Accelerating the protection of the new grass varieties in China.China Feed,2016(15):28-31,43.(in Chinese)

[3] Baum B R.DNA fingerprinting of cereal cultivars for intellectual property rights protection.UK:In proceedings of the third Symposium on the Taxonomy of Cultivated Plants Edinburgh,1998.

[4] 蔣林峰,黃琳凱,張新全,李寧,王鵬喜.鴨茅重要種質(zhì)DUS測(cè)試及農(nóng)藝性狀評(píng)價(jià)篩選.草地學(xué)報(bào),2017,25(2):351-360.

Jiang L F,Huang L K,Zhang X Q,Li L,Wang P X.DUS testing and agronomic character evaluation-screening of important Cocksfoot Germplasm.Acta Agrestia Sinica,2017,25(2):351-360.(in Chinese)

[5] 卓文飛.我國(guó)植物新品種保護(hù)及農(nóng)作物新品種權(quán)研究.種業(yè)導(dǎo)刊,2015(12):14-19.

Zhuo W F.Study on the new plant variety protection and property of the national authorized crop varieties in China.Journal of Seed Industry Guide,2015(12):14-19.(in Chinese)

[6] 李亞,劉建秀,向其伯.結(jié)縷草屬種質(zhì)資源研究進(jìn)展.草業(yè)學(xué)報(bào),2002，11(6):7-14.

Li Y,Liu J X,Xiang Q B.Research progress on germplasm resources ofZoysia.Acta Prataculture Sinica,2002，11(6):7-14.(in Chinese)

[7] 張新全.草坪草育種學(xué).北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2004.

Zhang X Q.Turfgrass Breeding.Beijing:China Agriculture Press,2004.(in Chinese)

[8] 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展中心.NY/T 2489-2013,植物新品種特異性,一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南:結(jié)縷草屬.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2014.

Science and Technology Development Center of the Ministry of Agriculture.NY/T 2489-2013,Guidelines for the Conduct of Tests for Distinctness,Uniformity and Stability:Zoysiagrass.Beijing:Standards Press of China,2014.(in Chinese)

[9] 徐振江,劉洪,李春蘭,李之林,任永浩.水稻新品種DUS測(cè)試數(shù)量性狀特異性統(tǒng)計(jì)分析判別研究.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,29(1):6-9.

Xu Z J,Liu H,Li C L,Li Z L,Ren Y H.Study on the statistical assessment of distinctness of quantitative characteristics in DUS testing of new rice varieties.Journal of South China Agriculture University,2008,29(1):6-9.(in Chinese)

[10] 陳海榮,顧曉君.水稻新品種測(cè)試中性狀差異顯著性判定的分析.上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2003,19(4):18-20.

Chen H R,Gu X J.Analysis on the significance of the difference of traits in new rice varieties.Acta Agriculturae Shanghai,2003,19(4):18-20.(in Chinese)

[11] 國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.BG/T 19557.1-2004,中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn):植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南:總則.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2004.

The state bureau of quality and technical supervision.BG/T 19557.1-2004,General Directives for the Conduct of Tests of Distinctness,Uniformity and Stability for New Varieties of Plants.Beijing:Standards Press of China,2004.(in Chinese)

[12] UPOV.Document TGP/8/1(draft1):Use of statistical procedures indistinctness,uniformity and stability testing,[2016-10-28].http://www.upov.int/edocs/tgpdocs/en/tgp_8.pdf

[13] 李汝玉,宋國(guó)安,楊平平.利用SSR標(biāo)記進(jìn)行品種權(quán)有爭(zhēng)議品種的鑒定.種子,2000(1):66-67.

Li R Y,Song G A,Yang P P.Identification of varieties with disputed rights using SSR Markers.Seed,2000(1):66-67.(in Chinese)

[14] 張清華.利用多重?zé)晒釹SR標(biāo)記構(gòu)建甘藍(lán)型油菜品種的DNA指紋圖譜.武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文,2011.

Zhang Q H,Construction of DNA fingerprinting in rapeseed varieties(B.napusL.) using multiplexed fluorescent SSR markers.Master Thesis.Wuhan:Huazhong Agricultural University,2011.(in Chinese)

[15] 王立新,常利芳,李宏博,季偉,劉麗華,趙昌平.小麥區(qū)試品系DUS測(cè)試的分子標(biāo)記.作物學(xué)報(bào),2010,36(7):1114-1125.

Wang L X,Chang L F,Li H B,Ji W,Liu L H,Zhao C P.Molecularmarkers for estimating distinctness,uniformity and stability of wheat lines in regional trials.Acta Agrononica Sinica,2010,36(7):1114-1125.(in Chinese)

[16] 王艷平,沈奇,張繼紅,李華勇,吳燕.大麥DUS測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)品種的遺傳多樣性分析及指紋圖譜的構(gòu)建.麥類作物學(xué)報(bào),2013,33(2):273-278.

Wang Y P,Shen Q,Zhang J H,Li H Y,Wu Y.Genetic diversity analysis and building of DNA fingerprints of barley standard varieties in DUS testing based on SSR markers.Journal of Triticeae Crops,2013,33(2):273-278.(in Chinese)

[17] 范建光,張海英,宮國(guó)義,肖菁,郭紹貴,任毅,張潔,王秀峰,馬艷明,許勇.西瓜DUS測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)品種SSR指紋圖譜構(gòu)建及應(yīng)用.植物遺傳資源學(xué)報(bào),2013,14(5):892-899.

Fang J G,Zhang H Y,Gong G Y,Xiao J,Guo S G,Ren Y,Zhang J,Wang X F,Ma Y M,Xu Y.Construction and application of SSR fingerprint database of the example varieties in watermelon DUS testing.Journal of Plant Genetic Resources,2013,14(5):892-899.(in Chinese)

[18] 丁西朋,張龍,羅小燕,嚴(yán)琳玲,劉國(guó)道,白昌軍.柱花草DUS測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)品種DNA指紋圖譜構(gòu)建.草業(yè)科學(xué),2015,32(12):2047-2056.

Ding X P,Zhang L,Luo X Y,Yan L L,Liu G D,Bai C J.Construction of DNA fingerprinting ofStylosanthesstandard cultivars for DUS testing.Pratacultural Science,2015,32(12):2047-2056.(in Chinese)

[19] 楊盛婷,武炳超,馮芹,黃秀,張新全,凌瑤,黃婷,黃琳凱.牛鞭草屬DUS測(cè)試材料的SSR指紋圖譜構(gòu)建.分子植物育種,2017,15(5):1790-1799.

Yang S T,Wu B C,Feng Q,Huang X,Zhang X Q,Ling Y,Huang T,Huang L K.Constructing SSR fingerprinting of DUS testing materials in Hemarthria.Molecular Plant Breeding,2017,15(5):1790-1799.(in Chinese)

[20] 閔學(xué)陽(yáng),劉文獻(xiàn),張正社,韋興燚,齊曉,張義,劉志鵬,王彥榮.苜蓿DUS測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)品種SSR分子標(biāo)記指紋圖譜的構(gòu)建.草業(yè)學(xué)報(bào),2017,26(11):47-56.

Min X Y,Liu W X,Zhang Z S,Wei X Y,Qi X,Zhang Y,Liu Z P.Wang Y R.Construction of SSR marker fingerprint database of standard alfalfa varieties utilizing DUS tests.Acta Prataculturae Sinica,2017,26(11):47-56.(in Chinese)