楊 希，李 平*，袁永峰，薛 梅，王 豐,2

(1.陜西省水產(chǎn)研究所，陜西西安 710086；2.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)院黃河水產(chǎn)研究所，陜西西安 710086)

秦嶺細(xì)鱗鮭(Brachymystaxlenoktsinlingensis)屬鮭形目、鮭科、細(xì)鱗魚(yú)屬,別名梅花魚(yú)、花魚(yú)，國(guó)內(nèi)分布僅見(jiàn)于陜西、甘肅渭河的部分山區(qū)支流和北側(cè)支流的上游中，屬?lài)?guó)家二級(jí)水生野生保護(hù)動(dòng)物[1]，多棲息山澗溪流中，肉食性，主要攝食水生昆蟲(chóng)和蚊蠅，活動(dòng)敏捷，應(yīng)激性強(qiáng)，在人工繁育和增殖放流中容易引起應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致魚(yú)體掉鱗、充血、受傷，繼發(fā)感染，引起死亡[2]。

麻醉劑能夠降低魚(yú)體應(yīng)激反應(yīng)，方便人工操作和運(yùn)輸，降低對(duì)魚(yú)體的傷害，提高成活率[3]?，F(xiàn)在魚(yú)用麻醉劑很多，包括丁香酚、CO2、喹哪啶、美托味酯等近30種。目前，對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭繁殖、標(biāo)記、運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程中麻醉使用和劑量問(wèn)題尚處于探索階段。間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(C10H15NO5S,tricaine methane sulfonate，MS-222)是一種性能優(yōu)良的魚(yú)用鎮(zhèn)靜劑，它具有使用濃度低、作用時(shí)間長(zhǎng)、見(jiàn)效快、復(fù)蘇快、無(wú)副作用等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于魚(yú)類(lèi)的活體運(yùn)輸、親魚(yú)采卵采精、標(biāo)志放流、外科手術(shù)及免疫注射等領(lǐng)域[4]，是唯一被美國(guó)FDA批準(zhǔn)能用于食魚(yú)的麻醉劑[5]。被動(dòng)式整合雷達(dá)(PIT)標(biāo)記是近年來(lái)比較流行的電子生物標(biāo)記技術(shù)，被標(biāo)記的魚(yú)類(lèi)通過(guò)專(zhuān)用設(shè)備進(jìn)行掃描便可識(shí)別。該技術(shù)準(zhǔn)確率高，可以讓每個(gè)被標(biāo)記動(dòng)物個(gè)體有一個(gè)唯一的身份識(shí)別碼，有助于回捕并對(duì)放流魚(yú)類(lèi)進(jìn)行跟蹤監(jiān)測(cè)[6]。本試驗(yàn)結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，探討了不同濃度MS-222對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭苗種和成魚(yú)在人工繁育、標(biāo)記放流及運(yùn)輸環(huán)節(jié)中使用劑量和麻醉效果，以期為MS-222在秦嶺細(xì)鱗鮭的麻醉研究方面提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

秦嶺細(xì)鱗鮭成魚(yú)為人工馴化培育的野生個(gè)體，體重為160 g±52 g，苗種為全人工繁育所得，規(guī)格為9.8 g±5.2 g，試驗(yàn)用魚(yú)均健康無(wú)傷病。試驗(yàn)在養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行，麻醉前停食1 d，試驗(yàn)用水為自然河道水，pH 7.8～8.5，溶解氧≥7.5 mg/L，水溫10.5℃。MS-222購(gòu)自北京綠源伯德生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 成魚(yú)麻醉試驗(yàn) 一般來(lái)說(shuō)，MS-222的劑量與水產(chǎn)品的種類(lèi)和大小有關(guān)[7]。參照文獻(xiàn)[5]，將MS-222溶于水配成15、25、30、35、40、45、50 mg/L的麻醉液?？紤]到秦嶺細(xì)鱗鮭為珍稀水生動(dòng)物，綜合試驗(yàn)對(duì)象及實(shí)際要求，沒(méi)有設(shè)置致死濃度。將成魚(yú)從暫養(yǎng)池中移入麻醉容器中，每組放30尾，雌雄比為1∶2，觀察魚(yú)的活動(dòng)情況，用秒表記錄魚(yú)體進(jìn)入不同麻醉階段的時(shí)間。隨后，轉(zhuǎn)入相同水溫的清水中復(fù)蘇，記錄魚(yú)體完全復(fù)蘇的時(shí)間。麻醉和復(fù)蘇時(shí)間為最后1尾試驗(yàn)魚(yú)進(jìn)入到相應(yīng)狀態(tài)所用的時(shí)間。

在MS-222的作用下，秦嶺細(xì)鱗鮭在麻醉和復(fù)蘇階段表現(xiàn)出一系列不同的行為變化，不同的學(xué)者對(duì)麻醉和復(fù)蘇過(guò)程的分期標(biāo)準(zhǔn)不盡相同，參考王利娟等[4]，魏鎖成[8]，劉長(zhǎng)琳等[9]分期標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合秦嶺細(xì)鱗鮭的實(shí)際情況，將秦嶺細(xì)鱗鮭的麻醉過(guò)程分為5個(gè)時(shí)期，復(fù)蘇過(guò)程分為5個(gè)時(shí)期(表1)。

1.2.2 PIT標(biāo)記麻醉試驗(yàn) 一般采用PIT人工標(biāo)記放流技術(shù)。標(biāo)記前，為減少操作過(guò)程中的物理傷害，一般會(huì)對(duì)魚(yú)苗進(jìn)行麻醉。選擇合理的麻醉濃度，有利于操作。結(jié)合人工繁育試驗(yàn)的試驗(yàn)效果中MS-222對(duì)各種魚(yú)的使用濃度和作用時(shí)間，設(shè)置麻醉濃度為25、30、35、40、45、50 mg/L的濃度梯度，按照人工繁育的操作步驟，參考表1和表2，記錄魚(yú)苗麻醉時(shí)間和復(fù)蘇時(shí)間。

表1 麻醉程度分期及魚(yú)類(lèi)行為特征

根據(jù)放流秦嶺細(xì)鱗鮭的大小選擇規(guī)格為1.35 mm×0.7 mm的芯片。采用背鰭基部植入芯片的方式，操作時(shí)離背鰭基部3 mm～5 mm，沿著頭的一邊向尾部方向30度角插針植入。植入芯片后，在傷口處涂抹紅霉素軟膏，并將標(biāo)記魚(yú)苗放入室內(nèi)暫養(yǎng)池進(jìn)行分組飼養(yǎng)，每日觀察傷口愈合情況、有無(wú)感染及芯片脫落情況發(fā)生，并及時(shí)進(jìn)行應(yīng)對(duì)處理。

1.2.3 苗種麻醉運(yùn)輸試驗(yàn) 暫養(yǎng)觀察1周后，無(wú)死亡和芯片掉落現(xiàn)象發(fā)生的魚(yú)苗采用人工增氧運(yùn)輸至放流地點(diǎn)?？紤]到運(yùn)輸過(guò)程中活魚(yú)不能進(jìn)入全麻狀態(tài)，參考魏鎖成等MS-222對(duì)各種魚(yú)的使用濃度和作用時(shí)間，設(shè)置0、10、15、20、25、30 mg/L 5個(gè)濃度梯度，每個(gè)氧氣袋裝50尾魚(yú)苗，在保證相同運(yùn)輸條件的情況下，測(cè)定其成活率。

表2 復(fù)蘇過(guò)程分期及魚(yú)類(lèi)行為特征

1.2.4 數(shù)據(jù)處理分析 用SPSS18.0和Excel軟件對(duì)結(jié)果分析進(jìn)行處理，P<0.01表示差異極顯著，P<0.05表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度MS-222對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭親魚(yú)麻醉效果

由表3可知，隨著MS-222濃度的增加，秦嶺細(xì)鱗鮭親魚(yú)進(jìn)入同一麻醉期的時(shí)間縮短，而完全復(fù)蘇的時(shí)間增加。在15 mg/L和20 mg/L的濃度下，魚(yú)體保持在深度鎮(zhèn)靜期。隨著濃度加深，麻醉程度隨之加深，復(fù)蘇所用時(shí)間越來(lái)越長(zhǎng)。在所設(shè)置的濃度梯度內(nèi)，24 h后的存活率可以達(dá)到100%。該試驗(yàn)是為了找到合適的可用于人工繁育的麻醉濃度，出于實(shí)際情況考慮，并未設(shè)置過(guò)高濃度，避免親魚(yú)受損。

單因素方差分析發(fā)現(xiàn)，MS-222濃度為35 mg/L和40 mg/L時(shí)，麻醉效果差異不顯著(P>0.05)，其余各麻醉濃度為差異極顯著(P<0.01)。

2.2 不同濃度MS-222對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭苗種麻醉效果

由表4可知，隨著MS-222濃度的增加，秦嶺細(xì)鱗鮭苗種進(jìn)入同一麻醉時(shí)期所用的時(shí)間越來(lái)越短，復(fù)蘇時(shí)間越來(lái)越長(zhǎng)。在25 mg/L的濃度下，魚(yú)苗保持在深度鎮(zhèn)靜期。在30 mg/L、35 mg/L的濃度下，魚(yú)苗保持在平衡失調(diào)期。在40 mg/L、45 mg/L的濃度下，魚(yú)苗保持在深度鎮(zhèn)靜期。單因素方差分析發(fā)現(xiàn)，MS-222濃度為35、40、45mg/L時(shí)，麻醉效果差異不顯著(P>0.05)，其余各麻醉濃度差異極顯著(P<0.01)。

表3 不同濃度MS-222對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭成魚(yú)麻醉效果

注:同列平均值間上標(biāo)字母不同者差異顯著(P<0.05) 。

Note: Means with different superscript letters in the same column were significantly different(P<0.05) ．

表4 不同濃度MS-222對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭苗種麻醉效果

注:同列平均值間上標(biāo)字母不同者差異顯著(P<0.05) 。

Note: Means with different superscript letters in the same column were significantly different(P<0.05) ．

2.3 不同濃度MS-222對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭苗種運(yùn)輸麻醉效果

由表5可知，伴隨著MS-222濃度的增大，麻醉反應(yīng)越來(lái)越強(qiáng)烈，苗種運(yùn)輸過(guò)程中的成活率略微有所下降。單因素方差分析發(fā)現(xiàn)，MS-222濃度為10mg/L和15mg/L時(shí)，麻醉效果差異不顯著(P>0.05)，其余各麻醉濃度均存在極顯著差異(P<0.01)。

表5 不同濃度MS-222對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭苗種運(yùn)輸麻醉效果

注:同列平均值間上標(biāo)字母不同者差異顯著(P<0.05) 。

Note: Means with different superscript letters in the same column were significantly different(P<0.05) ．

3 討論

3.1 關(guān)于最佳麻醉狀態(tài)

使用麻醉劑后，麻醉劑被鰓絲吸收，進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，然后在大腦中累積，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，最終在血液中達(dá)到平衡，此時(shí)，魚(yú)體能夠達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的、行為特征明顯的最佳麻醉狀態(tài)[10]。處于深度鎮(zhèn)靜期狀態(tài)下的魚(yú)體對(duì)外界刺激幾乎沒(méi)有反應(yīng)能力，代謝率下降，但依然能夠保持平衡，相比于輕度鎮(zhèn)靜期魚(yú)體顯得更為安定，有利于運(yùn)輸。若麻醉程度過(guò)深，魚(yú)體會(huì)因肌肉張力喪失，失去平衡，無(wú)法游動(dòng)，最終聚集引起缺氧窒息，或者與運(yùn)輸裝置撞擊發(fā)生機(jī)械損傷[11]，因此，活魚(yú)運(yùn)輸?shù)淖罴崖樽頎顟B(tài)是深度鎮(zhèn)靜期。

3.2 關(guān)于MS-222對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭的麻醉效果

MS-222的處理濃度一般為0.2 g/L～5.0 g/L，依據(jù)動(dòng)物的體重大小及種類(lèi)而有不同。國(guó)內(nèi)學(xué)者研究表明，MS-222 麻醉鱸魚(yú)(Pescepersico)[4]?；钸m宜濃度為80 mg/L，刀鱭(Coiliaectenes)麻醉適宜濃度為150 mg/L[12]，中華鱘(Acipensersinensis)和施氏鱘(Acipenserschrenckii)較好麻醉效果濃度為30 mg/L～40 mg/L[13]，斑馬魚(yú) (Daniorerio)深度麻醉濃度為75 mg/L～90 mg/L[14]，半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)適宜麻醉效果濃度為60 mg/L[15]，國(guó)外學(xué)者對(duì)真鯛(Pagrusmajor)[16]、庸鰈(Hippoglossus)[17]等魚(yú)種進(jìn)行了研究。目前,MS-222對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭的麻醉劑量研究卻鮮有報(bào)道。結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果，認(rèn)為當(dāng)MS-222的濃度達(dá)到45 mg/L，對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭親魚(yú)麻醉效果最佳。為保證后期成活率，當(dāng)MS-222達(dá)到40 mg/L，對(duì)秦嶺細(xì)鱗鮭苗種麻醉效果最佳。當(dāng)MS-222的濃度為10 mg/L時(shí)，秦嶺細(xì)鱗鮭苗種運(yùn)輸效果最佳。

3.3 關(guān)于不同水溫和魚(yú)的規(guī)格下麻醉效果

MS-222在不同水溫、不同規(guī)格下麻醉效果存在差異性。廖國(guó)璋等[18]研究結(jié)果表明，水溫越低，入麻時(shí)間越短，麻醉效果隨溫度降低而增加，較低水溫對(duì)魚(yú)體本身就有一定的麻醉效果。陳細(xì)華等[13]研究發(fā)現(xiàn)，同種魚(yú)，規(guī)格越小，對(duì)MS-222的反應(yīng)更敏感；相同麻醉濃度，規(guī)格越大，進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)所需時(shí)間越長(zhǎng)。

秦嶺細(xì)鱗鮭為冷水性魚(yú)類(lèi)，在設(shè)置試驗(yàn)濃度梯度時(shí)，相比較于其他種類(lèi)，MS-222試驗(yàn)最高濃度和最低濃度都進(jìn)行了相應(yīng)調(diào)整。面對(duì)不同規(guī)格大小的秦嶺細(xì)鱗鮭，MS-222試驗(yàn)濃度也做出了相應(yīng)調(diào)整，從而使得試驗(yàn)效果更加科學(xué)。

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