黃勇 張鐵 陳秋宏

摘 要 用金線蘭試管苗作為試驗(yàn)材料，以基本培養(yǎng)基、IBA、NAA、活性炭4因素3水平進(jìn)行正交試驗(yàn)。結(jié)果表明，在“1/2MS+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+ AC 1.0 g·L-1”培養(yǎng)基中，生根率達(dá)90.87%，生根效果佳。

關(guān)鍵詞 金線蘭；生根；組織培養(yǎng)；正交試驗(yàn)

中圖分類號：Q813.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2018.1.030

金線蘭（Anoectochilus roxburghii）別名花葉開唇蘭、金線蓮等，是蘭科開唇蘭屬一種多年生草本植物，因其葉脈呈金紅色而得名[1]。金線蘭是我國傳統(tǒng)的珍貴藥材，享有“金草”“神藥”“烏人參”“藥王”等美譽(yù)。其種子自然條件下極難萌發(fā)，由于長期采挖，野生種質(zhì)資源稀缺。通過組織培養(yǎng)技術(shù)可對其進(jìn)行搶救性保護(hù)[2～16]。組培苗是否具有良好的根系是成敗的關(guān)鍵，但目前對金線蘭組培苗生根培養(yǎng)的研究較少，且大多都是基于單因素進(jìn)行分析與描述，難以確定最佳分析條件的精度。本試驗(yàn)在已有的研究基礎(chǔ)上，以金線蘭組培苗為外植體，著重研究基本培養(yǎng)基、生長素（IBA、NAA）、活性炭（AC）對生根的影響，應(yīng)用L9（34）設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)對金線蘭生根培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化選擇，不僅可以精簡試驗(yàn)次數(shù)、克服培養(yǎng)基配方設(shè)計(jì)的盲目性，還可以大大提高工作效率和試驗(yàn)的可靠性，以期找出最佳生根配比方案，為改善金線蘭快速繁殖條件提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以文山學(xué)院組培實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的金線蘭組培苗為材料，挑選生長健壯、整齊一致的組培苗作為試驗(yàn)材料。

1.2 研究方法

1.2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

對基本培養(yǎng)基、IBA、NAA、活性炭4個(gè)因素分別選取3水平進(jìn)行正交設(shè)計(jì)L9（34），研究其對金線蘭組培苗生根的影響，試驗(yàn)因素及水平列于表1。

運(yùn)用正交設(shè)計(jì)共形成表2的9個(gè)處理。

每個(gè)處理添加蔗糖30 g·L-1、瓊脂7 g·L-1，pH值調(diào)至5.8。

1.2.2 接種與培養(yǎng)

將金線蘭組培苗切成帶有1個(gè)節(jié)、1.5～2.0 cm長的莖段，分別接種到上述9個(gè)處理的生根培養(yǎng)基中，每個(gè)處理接種13瓶，每瓶接種9個(gè)外植體，放置在培養(yǎng)溫度為25 ℃，光照強(qiáng)度為1 000 lx，光照時(shí)間為10 h·d-1條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)。每7 d觀察1次生長情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 生根情況

培養(yǎng)21 d左右，金線蘭莖段開始長根，隨后根的數(shù)量進(jìn)一步增多，并逐漸伸長。56 d左右，植株長勢良好，苗粗壯，培養(yǎng)基底部可見大量根，平均根長1～2 cm，其表面被大量絨毛，較粗壯。在不同的生根培養(yǎng)基中，組培苗形成根的數(shù)量與根的長度不一。其中，最佳的生根培養(yǎng)基為處理A3B2C1D3（即1/2MS+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+AC 1.0 g·L-1），根數(shù)最多，平均為2.8；根最長，平均達(dá)1.46 cm。

2.2 生根率極差分析

對不同處理的金線蘭組培苗生根率進(jìn)行極差分析，如表3所示。

由極差R的大小可以看出，4因素對金線蘭組培苗生根率影響的大小順序?yàn)椋篈>B>D>C。

由K值大小可以看出，各因素3水平對生根率影響的主次順序分別為：A3>A2>A1， B3>B2>B1，C2>C3>C1，D3>D2>D1，即誘導(dǎo)金線蘭組培苗生根的最佳組合是A3B3C2D3，這與生根率最高（90.87%）的組合A3B2C1D3不一致，可能是2種生長素（IBA和NAA）相互作用所致，故需對IBA和NAA進(jìn)行交互效應(yīng)檢驗(yàn)。

2.3 IBA、NAA交互效應(yīng)檢驗(yàn)

對IBA和NAA作交互效應(yīng)檢驗(yàn)，如表4所示。

從表4可以看出，IBA*NAA的Sig<0.01，說明IBA和NAA之間對試管苗生根率存在極顯著的交互作用。

2.4 不同因素對金線蘭組培苗生根率方差分析

生根率在組培中是一個(gè)重要指標(biāo)，且生根率和根數(shù)成正相關(guān)。為了更好地反應(yīng)各因子對金線蘭生根影響作用的差異，以便尋求最佳生根培養(yǎng)基組合，對試驗(yàn)結(jié)果作方差分析，如表5所示。

由表5可以看出，基本培養(yǎng)基、IBA、NAA、AC的Sig值均小于0.01，說明4個(gè)因素對組培苗生根率均具有極顯著的影響。

3 結(jié)論與討論

在已有研究基礎(chǔ)之上，對影響金線蘭生根培養(yǎng)的主要因素進(jìn)行正交試驗(yàn)。MS培養(yǎng)基被廣泛用于植物組織培養(yǎng)，誘導(dǎo)植物生根的時(shí)候多降低其大量元素濃度，本試驗(yàn)中大量元素減半最適合金線蘭組培苗生根。誘導(dǎo)植物生根常用IBA和NAA兩種生長素，一般說來，IBA可誘導(dǎo)出較多的根，而NAA可誘導(dǎo)出較粗的根。本試驗(yàn)將合理濃度的IBA、NAA搭配使用，取得了較高生根率?；钚蕴靠纱龠M(jìn)試管苗生根，本試驗(yàn)亦如此。4因素對生根率影響的主次順序?yàn)椋夯九囵B(yǎng)基>IBA>活性炭>NAA，均具有極顯著的作用，且IBA和NAA之間存在極顯著的相互影響。通過正交試驗(yàn)，篩選出誘導(dǎo)金線蘭組培苗生根的最佳培養(yǎng)基為“1/2MS+IBA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+ AC 1.0 g·L-1”，誘導(dǎo)率達(dá)90.87%，且根較粗壯。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中國科學(xué)院《中國植物志》編委會.中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1999：220.

[2] 陳兆貴.金線蓮組織培養(yǎng)和移栽技術(shù)研究[J].惠州學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，27（6）：14-17.

[3] 江建銘，俞旭平，沈曉霞，等.金線蓮組培快繁技術(shù)研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009，20（2）：408-410.

[4] 周銳，孔瓊，薛春麗，等.屏邊野生金線蓮組培快繁技術(shù)研究[J].云南農(nóng)業(yè)科技，2014（4）：7-9.

[5] 朱旭偉，溫學(xué)森，邵清松，等.金線蓮生根培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2014，25（2）：470-471.

[6] 范子南，肖華山，范曉紅，等.金線蓮的組織培養(yǎng)研究[J].福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，13（2）：82-87.

[7] 陳穗云，陳永喆，王玉梅，等.臺灣金線蓮的離體快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，1998，34（6）：443.

[8] 邵果園，鄔玉芬.不同培養(yǎng)基組分對金線蓮組培苗壯苗生根的影響[J].熱帶農(nóng)業(yè)科技，2014，37（1）：14-15.

[9] 楊紅麗，胡靖鋒，徐學(xué)忠，等.金線蓮的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，26（6）：2485-2488.

[10] 張鐵，田雪琪，李彬，等.滇越金線蘭快速繁殖技術(shù)研究[J].文山師范高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2006，19（3）：110-114.

[11] 陳裕德.臺灣金線蓮組培生根苗煉苗試驗(yàn)[J].林業(yè)科技開發(fā)，2007，21（5）：78-80.

[12] 王麗芳.不同培養(yǎng)基及添加物對金線蓮生長量的影響[J].北方園藝，2011（5）：175-176.

[13] 范子南，范曉紅，等.金線蓮的離體培養(yǎng)[J].植物生理學(xué)通訊，1998，31（6）：430-431.

[14] 梁麗鳳，林曉林，伍宇雁，等.金線蓮增殖和生根條件的優(yōu)化[J].仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，27（3）：5-13.

[15] 黃惠蓮，劉賢旺，吳祥松，等.金線蓮無根苗的壯苗促根試驗(yàn)研究[J].中國野生植物資源，2001（6）：74-75.

[16] 魏翠華，秦建彬，謝宇，等.應(yīng)用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選臺灣金線蓮快繁培養(yǎng)基[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，29（4）：114-117.

（責(zé)任編輯：丁志祥）