熊忠良 溫文生 史小娜 丁凡 程敏華 楊純杰 王肆玖 呂長(zhǎng)軍

摘要?[目的]優(yōu)化免疫接種程序，減少疫苗接種次數(shù)以及減輕豬場(chǎng)疫苗接種工作量。[方法]對(duì)豬瘟、豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病以及豬喘氣病5種豬場(chǎng)常見(jiàn)豬病的疫苗按照不同組合采用混合注射、分點(diǎn)注射以及單苗注射等接種方式進(jìn)行免疫試驗(yàn)。[結(jié)果]通過(guò)田間16輪次的重復(fù)試驗(yàn)和效果觀察發(fā)現(xiàn)，3種不同免疫方式對(duì)豬群不同時(shí)期的抗體水平、日增重以及育成率等沒(méi)有顯著差異。[結(jié)論]5種疫苗不同組合混合接種在臨床上具有可行性，為豬場(chǎng)因地制宜地制定免疫程序提供參考。

關(guān)鍵詞?疫苗;不同組合;免疫效果

中圖分類號(hào)?S858.28文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A文章編號(hào)?0517-6611（2018）33-0061-04

豬瘟（CSF）、藍(lán)耳?。≒RRS）、豬偽狂犬（PR）、豬圓環(huán)病毒?。≒CVD）以及豬支原體肺炎（MPS，又稱“喘氣病”）是我國(guó)豬場(chǎng)臨床最常見(jiàn)的5種傳染性疾病。為了預(yù)防以上疾病，豬場(chǎng)通常采用疫苗免疫接種，但由于豬場(chǎng)豬病復(fù)雜繁多，需要接種的疫苗也很多，往往在制訂免疫程序時(shí)發(fā)生時(shí)間上的沖突，另外在免疫接種時(shí)需要多次注射，這樣不但會(huì)造成豬群的多次應(yīng)激，不利于豬的生長(zhǎng)，而且增加了防疫人員的工作量。為了減少免疫接種次數(shù)，又能達(dá)到同樣的免疫效果，筆者在一普通規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)的商品豬群中將豬瘟等五種豬病疫苗按照不同組合進(jìn)行免疫接種試驗(yàn)。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)地點(diǎn)

湖北漢川市某規(guī)模化豬場(chǎng)，生產(chǎn)母豬800頭，自繁自養(yǎng)，封閉式管理，豬群總體健康狀況良好，為CSF陰性豬場(chǎng)。雖然該場(chǎng)是PRRSV陽(yáng)性豬場(chǎng)，部分母豬也檢測(cè)到PRVgE-Ab陽(yáng)性，但各項(xiàng)生產(chǎn)成績(jī)和技術(shù)指標(biāo)正常。供試豬為該場(chǎng)母豬所產(chǎn)的健康仔豬，每頭試驗(yàn)仔豬打耳標(biāo)，做好標(biāo)記。

1.2?疫苗

豬圓環(huán)病毒2型桿狀病毒滅活疫苗（CP08株），簡(jiǎn)稱亞單位圓苗，批號(hào)為20170606;豬瘟活疫苗（細(xì)胞源），簡(jiǎn)稱豬瘟苗，批號(hào)為20170703;豬偽狂犬病耐熱保護(hù)劑活疫苗（C株），簡(jiǎn)稱偽狂苗，批號(hào)為20170402;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（JXA1-R株），簡(jiǎn)稱藍(lán)耳苗，批號(hào)為20170204，以上疫苗均由武漢中博生物股份有限公司生產(chǎn)。豬支原體肺炎復(fù)合佐劑滅活疫苗（P株），又稱喘泰克，雙針型（簡(jiǎn)稱喘氣雙針），批號(hào)為MHB-17014，一針型（簡(jiǎn)稱喘氣單針），批號(hào)為MHB-17017，由美國(guó)普泰克公司生產(chǎn)。

1.3?檢測(cè)試劑?CSFV-Ab檢測(cè)試劑盒、PRRSV-Ab檢測(cè)試劑盒、PRVgE-Ab檢測(cè)試劑盒均為韓國(guó)金諾（MEDIAN）診斷試劑盒;PRVgB-Ab檢測(cè)試劑盒為愛(ài)德士（IDEXX）診斷試劑盒;PCV2-Ab檢測(cè)試劑盒由武漢中博生物股份有限公司研制提供。操作方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)均按照各試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4?試驗(yàn)分組

每輪次試驗(yàn)使用仔豬90頭，分為3組，每組30頭。Ⅰ組為疫苗混合接種組，Ⅱ組為疫苗兩側(cè)接種組，對(duì)照組（CK）為單苗接種組，對(duì)照組除“圓+喘”2種滅活苗為混合接種外，藍(lán)耳苗、豬瘟苗及偽狂苗均按照不同時(shí)間先后單苗接種。試驗(yàn)時(shí)間為2017年8月16日至2018年3月28日，共完成16輪次的重復(fù)接種試驗(yàn)，共使用仔豬1 440頭。

1.5?接種方案

3組仔豬除1日齡使用偽狂苗1 mL滴鼻相同外，其余均不相同。另外，藍(lán)耳苗、豬瘟苗以及偽狂苗等活疫苗接種前均要進(jìn)行稀釋，按照以下方案進(jìn)行配苗。具體接種方案見(jiàn)表1。

1.6?采血及抗體檢測(cè)

每輪次每組30頭仔豬中各選擇10頭仔豬進(jìn)行采血，分別在7、21、35、42、56、63、77、91日齡連續(xù)采血，分離血清后檢測(cè)CSFV-Ab、PRRSV-Ab、PRVgE-Ab、PRVgB-Ab以及PCV2-Ab等抗體水平，再?gòu)拿拷M10份血樣中再隨機(jī)選擇具有完整檢測(cè)數(shù)據(jù)的5頭仔豬血樣進(jìn)行跟蹤分析，統(tǒng)計(jì)16輪試驗(yàn)中各組仔豬的80頭豬血樣分別在不同日齡各種抗體水平和陽(yáng)性率。

1.7?日增重計(jì)算

分別在28和91日齡對(duì)每組30頭仔豬中未采血的20頭仔豬逐頭稱重，采用自由采食的飼喂方式，計(jì)算各組試驗(yàn)仔豬在28～91日齡的平均日增重。

1.8?臨床觀察

1.8.1

免疫副反應(yīng)。副反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)如下：疫苗接種前后體溫變化1.0 ℃以上，接種20 min內(nèi)出現(xiàn)嘔吐、呼吸困難、臥地不起、尖叫、口吐白沫、四肢抽搐、全身皮膚紫癜以及休克死亡等癥狀，發(fā)生任何一種癥狀即判定為副反應(yīng)。

1.8.2?育成率計(jì)算與病原學(xué)檢測(cè)。觀察仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育情況，統(tǒng)計(jì)發(fā)病死亡情況，計(jì)算各組育成率，另外對(duì)部分病樣進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)。

2?結(jié)果與分析

2.1?血清抗體檢測(cè)結(jié)果

2.1.1?豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果。

從圖1可以看出，Ⅰ、Ⅱ、CK組豬瘟抗體平均阻斷率分別為33.41%、45.83%和46.07%，對(duì)照組（CK）的平均阻斷率較高，這可能是因?yàn)閷?duì)照組仔豬在28、63日齡分別用豬瘟單苗接種，而Ⅰ組和Ⅱ組則分別用幾種疫苗同時(shí)分點(diǎn)或混合注射，從而對(duì)抗體整齊度產(chǎn)生一定影響。

從圖2可以看出，7日齡Ⅰ、Ⅱ、CK組仔豬CSF抗體平均陽(yáng)性率分別為66.3%、73.8%和68.8%，此后逐漸下降，28日齡豬瘟初免后Ⅰ組仍呈下降趨勢(shì)，56日齡降至17.5%，但在63日齡經(jīng)過(guò)“瘟+偽”混合接種加強(qiáng)后，豬瘟抗體陽(yáng)性率明顯上升，91日齡Ⅰ組豬瘟抗體陽(yáng)性率明顯高于Ⅱ組和對(duì)照組（CK）。

2.1.2?豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果。

在豬藍(lán)耳病疫苗的免疫豬群中，可以通過(guò)抗體水平的離散度，抗體值的高低等間接評(píng)價(jià)疫苗的免疫效果[1]。從圖3可以看出，Ⅰ、Ⅱ、CK組PRRSV抗體S/P值分別為1.14、1.52和1.55，雖然Ⅰ組S/P值相對(duì)較小，免疫效果不如Ⅱ組和對(duì)照組（CK）。

從圖4可以看出，7日齡后PRRS抗體陽(yáng)性率先下降再逐漸上升，91日齡Ⅰ、Ⅱ、CK組PRRS抗體陽(yáng)性率分別為94%、100%和98%，結(jié)合抗體S/P值、陽(yáng)性率及臨床表現(xiàn)可知，試驗(yàn)后期PRRSV陽(yáng)性率高可能是疫苗和野毒感染共同作用的結(jié)果。

2.1.3?豬偽狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果。

從圖5、6可以看出，3組仔豬PRVgE-Ab S/N值絕大多數(shù)大于0.6，呈陰性，說(shuō)明PRV野毒感染壓力小，7日齡PRVgE-Ab抗體平均陽(yáng)性率分別為37%、21%和17%，應(yīng)屬于母源性抗體，隨著時(shí)間的推移，仔豬母源抗體逐步消失，91日齡絕大多數(shù)仔豬PRVgE-Ab為陰性，Ⅰ、Ⅱ、CK組PRVgE-Ab抗體平均陽(yáng)性率分別為5%、11%、12%。

從圖7、8可以看出，3組PRVgB-Ab S/N值均逐步增加，抗體陽(yáng)性率也逐步降低。結(jié)合抗體檢測(cè)、臨床表現(xiàn)以及病原學(xué)檢測(cè)可知，91日齡PRVgB-Ab抗體陽(yáng)性率應(yīng)該主要是由疫苗接種產(chǎn)生的。

檢測(cè)結(jié)果表明，63日齡豬瘟和偽狂犬2種活疫苗同時(shí)分點(diǎn)和混合注射均不影響各自免疫抗體的產(chǎn)生，與單苗接種相比，3組間無(wú)明顯差異。

2.1.4?豬圓環(huán)病毒抗體檢測(cè)結(jié)果。

從圖9、10可以看出，對(duì)照組的PCV2-Ab抗體平均值相對(duì)較小，且PCV2-Ab抗體陽(yáng)性率也相對(duì)較低，可能與Ⅰ組和Ⅱ組均接種圓環(huán)苗2次，而對(duì)照組只在14日齡接種1次有關(guān)。不管接種1次還是2次，91日齡各組PCV2-Ab抗體陽(yáng)性率分別為75.8%、82.5%和71.3%，3組間沒(méi)有顯著差異（P>0.05）。

2.1.5?豬喘氣病觀察結(jié)果分析。

評(píng)價(jià)豬喘氣病疫苗的免疫效果主要從生長(zhǎng)速度、日增重、飼料報(bào)酬、臨床病例、抗體水平及病理變化等方面著手，因條件有限未進(jìn)行飼料報(bào)酬和抗體水平測(cè)定。Ⅰ組和Ⅱ組先后接種2次雙針型喘氣苗，對(duì)照組只接種單針型喘氣苗1次，經(jīng)觀察3組試驗(yàn)仔豬喘氣病臨床病例均很少，剖檢也很少發(fā)現(xiàn)肺臟上有典型的肉樣病變，在生長(zhǎng)發(fā)育、日增重及育成率等方面3組間也沒(méi)有明顯差異，說(shuō)明單針型和雙針型均能有效預(yù)防喘氣病的發(fā)生。

2.2?仔豬日增重結(jié)果

統(tǒng)計(jì)16輪試驗(yàn)中的每輪每組試驗(yàn)仔豬28～91日齡的平均日增重。Ⅰ組仔豬的平均日增重為（467.5±51.1）g，Ⅱ組仔豬的平均日增重為（485.9±47.0）g，對(duì)照組仔豬的平均日增重為（461.4±39.8）g。28～91日齡Ⅱ組仔豬的平均日增重最高，高于Ⅰ組和對(duì)照組，但差異不顯著（P>0.05）。

2.3?免疫接種副反應(yīng)情況統(tǒng)計(jì)

根據(jù)副反應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)，分別統(tǒng)計(jì)16輪試驗(yàn)中幾種疫苗組合接種所導(dǎo)致的副反應(yīng)頭數(shù)。由表2可知，幾種疫苗組合接種后引起1.1%～1.7%的應(yīng)激反應(yīng)，均在正常范圍內(nèi)，其余幾種單苗（豬瘟苗外）或組合苗接種后幾乎沒(méi)有觀察到明顯的應(yīng)激反應(yīng)，尤其是豬瘟苗和偽狂犬苗2種活苗在63日齡不管是混合接種還是分開(kāi)兩側(cè)接種均沒(méi)有發(fā)現(xiàn)仔豬出現(xiàn)副反應(yīng)，說(shuō)明豬瘟苗和偽狂苗同時(shí)接種是安全的。

2.4?仔豬死亡情況與育成率

統(tǒng)計(jì)7～91日齡16輪試驗(yàn)各組仔豬的死亡情況及總的育成率。由表3可知，16輪仔豬初試總頭數(shù)1 440頭，7～91日齡共死亡仔豬143頭，主要是由于腹瀉及呼吸道疾病造成的，其中Ⅰ組死亡47頭仔豬，Ⅱ組死亡51頭仔豬，對(duì)照組死亡45頭仔豬，Ⅰ、Ⅱ、CK組仔豬育成率分別為90.2%、89.4%和90.6%，經(jīng)t檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)3組間沒(méi)有顯著差異（P>0.05）。

2.5?臨床發(fā)病死亡仔豬病原學(xué)檢測(cè)

由表4可知，CSFV和PRV病原學(xué)檢測(cè)均呈陰性，PCV2也只有1頭仔豬呈陽(yáng)性，說(shuō)明這3種疾病的壓力較小，但送檢病樣中PRRSV病原檢測(cè)陽(yáng)性率均較高，另外該場(chǎng)保育豬中副豬嗜血桿菌病較為突出，結(jié)合臨床表現(xiàn)、病理剖檢等，認(rèn)為試驗(yàn)仔豬死亡可能與這2種疾病混合感染有關(guān)。

3?討論

為了優(yōu)化免疫接種程序，減少免疫接種次數(shù)，減輕基層獸醫(yī)的工作量，國(guó)內(nèi)許多專業(yè)人士對(duì)臨床常見(jiàn)的幾種豬苗進(jìn)行各種聯(lián)合試驗(yàn)，其中豬瘟、豬口蹄疫和高致病性藍(lán)耳病3種疫苗聯(lián)合使用試驗(yàn)最多[2-9]，試驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床應(yīng)用均具有一定的指導(dǎo)意義。朱子健等[10]將PCV2滅活疫苗和豬瘟活疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射和混合注射，結(jié)果表明2種免疫方式均不影響各自免疫抗體的產(chǎn)生，但用2種滅活苗混合后稀釋活苗進(jìn)行接種試驗(yàn)國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)報(bào)道。

“喘泰克”是美國(guó)PORTATEK公司產(chǎn)品，為第4代支原體肺炎疫苗，有雙針型（P株抗原60 μg/mL）和單針型（P株抗原80 μg/mL）2種，該苗物理滅活，不含滅活劑。亞單位圓苗（CP08株）是國(guó)內(nèi)首個(gè)桿狀病毒表達(dá)的基因工程亞單位疫苗，該苗采用的β-丙內(nèi)脂（BPL）滅活劑能在疫苗液體中完全水解為無(wú)毒性的β-羥基丙酸，因此成品苗中無(wú)殘留有害成分，臨床上常與喘泰克混合使用。由于2種疫苗均為滅活苗，且均為復(fù)合水性佐劑和成苗中無(wú)殘留滅活劑等特點(diǎn)，為2種疫苗混合接種甚至稀釋活苗提供了臨床應(yīng)用的可能性。

該試驗(yàn)是將“圓+喘”2種滅活苗混合后分別稀釋藍(lán)耳病活苗和豬瘟活苗以及將豬瘟活苗和偽狂犬活苗進(jìn)行混合接種等，以期探索“死苗+活苗”和“活苗+活苗”混合使用的免疫效果，尤其是“圓+喘”2種滅活苗混合稀釋活苗的接種方式，雖然在一定時(shí)間段內(nèi)存在不同程度上影響活苗抗體水平的可能性，但是通過(guò)16輪次的重復(fù)田間試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，混合接種、分點(diǎn)接種以及單苗接種對(duì)豬群日增重、生長(zhǎng)狀況以及育成率等方面沒(méi)有顯著差異，為豬場(chǎng)因地制宜地制定免疫程序

提供一定的參考與借鑒。

關(guān)于疫苗混合接種的問(wèn)題，尤其是多種疫苗或“死苗+活苗”混合接種的問(wèn)題，有的學(xué)者持謹(jǐn)慎態(tài)度。該試驗(yàn)通過(guò)16輪次田間的重復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，某些特性疫苗按照一定的接種方式、免疫時(shí)間以及規(guī)范操作，進(jìn)行混合或分點(diǎn)同時(shí)接種，其免疫效果與單苗接種無(wú)明顯差異，而某些指標(biāo)還優(yōu)于單苗接種組，同時(shí)該試驗(yàn)是在江漢平原上的一個(gè)普通的大型豬場(chǎng)進(jìn)行的，具有一定的代表性，不過(guò)由于該場(chǎng)是一個(gè)藍(lán)耳病陽(yáng)性豬場(chǎng)，且豬場(chǎng)環(huán)境相對(duì)較差以及其他疾病的困擾等，對(duì)試驗(yàn)產(chǎn)生一定的干擾和影響，其試驗(yàn)結(jié)果可能具有一定的局限性，因此有必要與實(shí)驗(yàn)室相關(guān)研究相結(jié)合，以便更好地在臨床上推廣應(yīng)用。

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