劉紹歡 何晶晶 詹云慧 樊天珺 黃哲 王世清

摘要?[目的]采用不同濃度試劑對(duì)透骨香種子進(jìn)行浸種處理，篩選出透骨香種子在此條件下發(fā)芽的最佳條件。[方法]采用不同濃度的C2H5OH、NaOH、KMnO4、GA3、NaCl對(duì)透骨香種子分別浸種30、60、90、120 min，采用培養(yǎng)皿發(fā)芽試驗(yàn)，以發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率以及發(fā)芽指數(shù)3個(gè)指標(biāo)對(duì)不同處理進(jìn)行評(píng)價(jià)。[結(jié)果]不同處理方法處理后的透骨香種子的發(fā)芽率均在80%以上，且發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)相比對(duì)照組明顯提高。其中用10 mg/mL NaOH 浸種60 min的種子發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率均最高，分別為85%、96%，發(fā)芽指數(shù)為184.90，與對(duì)照組相比分別提高55.5、31百分點(diǎn)和105.63;而GA3對(duì)透骨香種子初期有一定的抑制作用，發(fā)芽勢(shì)均比對(duì)照組小。[結(jié)論]透骨香種子育苗最佳處理方式為10 mg/mL NaOH浸種60 min。

關(guān)鍵詞?透骨香;發(fā)芽率;發(fā)芽勢(shì);發(fā)芽指數(shù)

中圖分類號(hào)?S567文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A文章編號(hào)?0517-6611（2018）33-0025-03

透骨香作為貴州常用苗族藥之一，為杜鵑花科植物滇白珠Gaultheria yunnanensis（Franch.）Rehd 的干燥全株或根[1-2]，具有清熱解毒、活血祛瘀、祛風(fēng)除濕、降氣平喘的功效，在治療肌肉酸痛及跌打損傷、軟組織傷、風(fēng)濕病、踝扭傷、腰椎骨質(zhì)增生、腰膝疼痛、風(fēng)濕痹痛等方面具有顯著作用[3-4]。

目前，在貴州以透骨香為主要原料的民族成方制劑有：“痹痛寧膠囊（金骨蓮膠囊）”[4]、“復(fù)方透骨香藥乳” [5]、“清痹通絡(luò)藥酒” [5]等。該藥材及制劑為貴州省中藥現(xiàn)代化及經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來了效益。但是《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（2003 年版）及有關(guān)透骨香的研究文獻(xiàn)中僅見其藥性記載、藥材鑒定、藥理及毒理作用、化學(xué)成分與含量測(cè)定及臨床使用效果等報(bào)道。但筆者查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)國內(nèi)外罕見有關(guān)于透骨香藥材人工栽培相關(guān)技術(shù)的研究，且隨著對(duì)其化學(xué)成分[6-8]、藥理及臨床研究[9-10]的逐步深入，其臨床使用越來越廣，該藥材的來源也越來越重要，因此，將其由野生變?yōu)榧曳N，建立規(guī)范化種植，從而更好地控制其藥材質(zhì)量，真正做到“藥材好，藥才好”。

該試驗(yàn)擬通過研究不同濃度的C2H5OH、NaOH、KMnO4、NaCl、GA3 5種試劑在不同時(shí)間處理下[11-16]對(duì)透骨香種子發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)的影響，以選出試驗(yàn)所需的最優(yōu)處理?xiàng)l件，為下一步工作提供參考。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

供試用種子來自貴州省花溪區(qū)高坡鄉(xiāng)，經(jīng)筆者鑒定均為杜鵑花科的透骨香[Gaultheria yunnanensis（Franch.）Rehd.]的果實(shí)（含種子），連同蒴果自然風(fēng)干后裝袋備用。

1.2?種子選定

隨機(jī)選定飽滿的種子進(jìn)行試驗(yàn)。

1.3?儀器與試劑

供試儀器：AL204型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器）;供試試劑：95%乙醇（20150202成都金山化學(xué)試劑有限公司）、氫氧化鈉（080603成都金山化學(xué)試劑有限公司）、高錳酸鉀（20141213重慶川東化工有限公司）、氯化鈉（20151219重慶江川化工（集團(tuán)）有限公司）、赤霉素（150418上海宇涵生物科技有限公司）。

1.4?試驗(yàn)方法

用不同濃度的C2H5OH（10%、30%、50%、70%、90%）、NaOH（10、30、50、70、90、110 mg/mL）、KMnO4（0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1 mg/mL）、GA3（100、300、500、700、900、1 100 mg/mL）、NaCl（10、30、50、70、90、110 mg/mL）分別浸種30、60、90、120 min處理透骨香種子。用蒸餾水處理作為對(duì)照，每組100粒種子。

發(fā)芽床采用直徑9 cm的培養(yǎng)皿，內(nèi)鋪一層濾紙，上蓋皿蓋保濕。置于室溫條件下培養(yǎng)。每天定時(shí)觀察種子發(fā)芽情況，并補(bǔ)充相應(yīng)水分使濾紙保持濕潤，種子露白時(shí)開始計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)不同試劑、濃度、浸種時(shí)間下的累計(jì)發(fā)芽數(shù)、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)，直到連續(xù)3 d不再發(fā)出新芽，停止計(jì)數(shù)，從發(fā)芽到不再長出新芽，一共記錄43 d數(shù)據(jù)。

1.5?觀測(cè)指標(biāo)

以發(fā)芽后第10天作發(fā)芽勢(shì)計(jì)算，第34天作發(fā)芽率計(jì)算，10～34 d作發(fā)芽指數(shù)計(jì)算。所得數(shù)據(jù)用SPSS 21.0、Excel數(shù)據(jù)軟件分析。其中對(duì)照組發(fā)芽勢(shì)為29.5%，發(fā)芽率為65%，發(fā)芽指數(shù)為79.27。發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)的計(jì)算公式如下：

n34為發(fā)芽第34天的正常發(fā)芽的粒數(shù)，

Gt為相應(yīng)各日的正常發(fā)芽數(shù)，Dt為置床之日的天數(shù)。

2?結(jié)果與分析

2.1?不同濃度C2H5OH溶液、不同處理時(shí)間對(duì)透骨香種子發(fā)芽率的影響

由表1可知，經(jīng)C2H5OH溶液處理的透骨香種子，發(fā)芽率大多得到提升，在低濃度中，僅10%浸種60 min和30%浸種30 min的發(fā)芽率比對(duì)照組低，但90%浸種對(duì)種子發(fā)芽率全呈抑制狀態(tài)。在用30%浸種60 min，50%、70%浸種90 min，10%浸種120 min時(shí)，其發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)均比對(duì)照組高，其中50%浸種90 min發(fā)芽率最高，其發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率和發(fā)芽指數(shù)分別為33%、90%、93.66，與對(duì)照組相比，分別提高了3.5、25百分點(diǎn)，發(fā)芽指數(shù)提高14.39。

由SPSS分析發(fā)現(xiàn)，各處理組對(duì)發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)影響Sig.值均為0.00，極具顯著性差異影響;發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)變化呈近似正相關(guān)，整齊度好。

2.2?不同濃度NaOH溶液、不同處理時(shí)間對(duì)透骨香種子發(fā)芽率的影響

由表2可知，經(jīng)NaOH溶液處理的透骨香種子，低濃度（10、30 mg/mL）對(duì)種子萌發(fā)具明顯促進(jìn)作用，用10 mg/mL浸種60、90、120 min，30 mg/mL浸種30、60、90 min，50 mg/mL浸種30 min時(shí)，發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)均明顯增大，其中以10 mg/mL浸種60 min發(fā)芽最好，發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)分別為85%、96%、184.90，與對(duì)照組相比，分別提高了55.5、31百分點(diǎn)，發(fā)芽指數(shù)提高105.63。但隨著NaOH溶液濃度增大，出現(xiàn)抑制萌發(fā)的情況，如在濃度50 mg/mL浸種90 min時(shí)，發(fā)芽率才4%，且幼苗后期有死亡現(xiàn)象。

SPSS數(shù)據(jù)分析可見，濃度對(duì)發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)極具顯著性差異影響，浸種時(shí)間對(duì)發(fā)芽率極具顯著性差異影響，對(duì)發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)沒有明顯差異影響;種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)在NaOH處理下變化呈正相關(guān)，整齊度好。

2.3?不同濃度KMnO4溶液、不同處理時(shí)間對(duì)透骨香種子發(fā)芽率的影響

由表3可知，經(jīng)KMnO4溶液處理的透骨香種子，發(fā)芽率總體比對(duì)照組高，僅3組發(fā)芽率比對(duì)照組低，幼苗死亡情況不明顯，且在高濃度時(shí)發(fā)芽率相對(duì)低濃度要好，其用0.50 mg/mL浸種30 min，0.70 mg/mL浸種90 min，1.10 mg/mL浸種60 min時(shí)，發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)相比對(duì)照組均明顯提高;在0.50 mg/mL浸種30 min時(shí)，發(fā)芽率最好，發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)分別為51%、87%、112.93，與對(duì)照組相比，分別提高了21.5、22百分點(diǎn)，發(fā)芽指數(shù)提高33.66。

由SPSS進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，濃度對(duì)發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)及浸種時(shí)間對(duì)發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)均不具顯著性差異影響，浸種時(shí)間對(duì)發(fā)芽率極具顯著性差異影響;種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)變化成近似正相關(guān)，整齊度較好。

2.4?不同濃度NaCl溶液、不同處理時(shí)間對(duì)透骨香種子發(fā)芽率的影響

由表4可知，經(jīng)NaCl溶液處理的透骨香種子，發(fā)芽率大多得到提高，在30 mg/mL浸種30 min時(shí)，發(fā)芽率最高，發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)為84%、96.04，與對(duì)照組相比，發(fā)芽率提高了19百分點(diǎn)，發(fā)芽指數(shù)提高16.77，但發(fā)芽勢(shì)降低為26%。

由SPSS進(jìn)行分析可知，濃度對(duì)發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)具顯著性差異影響，浸種時(shí)間對(duì)發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)沒有明顯差異影響;種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)變化成近似正相關(guān)，整齊度較好。

2.5?不同濃度GA3溶液、不同處理時(shí)間對(duì)透骨香種子發(fā)芽率的影響

由表5可知，經(jīng)GA3溶液處理的透骨香種子，發(fā)芽勢(shì)均比對(duì)照組低，但發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)大多得到提高，在100 mg/mL浸種30 min時(shí)，發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)均為最高，分別為24%、90%、93.19，與對(duì)照組相比，發(fā)芽勢(shì)降低了5.5百分點(diǎn)，發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)分別升高了25百分點(diǎn)、13.92。

由SPSS處理可知，濃度和浸種時(shí)間對(duì)發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)均不具顯著性差異影響;種子發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)變化成近似正相關(guān)，整齊度較好。

3?結(jié)論與討論

（1）不同試劑處理后的種子與對(duì)照組相比，發(fā)芽率大多能夠得到提升，如10 mg/mL NaOH浸種30、60 min等;其中用10% C2H5OH浸種120 min，50%浸種90 min，10、30 mg/mL NaOH分別浸種60、90 min，0.50 mg/mL KMnO4浸種30 min、0.70 mg/mL浸種90 min、1.10 mg/mL浸種60 min，10 mg/mL NaCl浸種30 min，超聲浸種90 min后，發(fā)芽率均在80%以上，且發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)相比對(duì)照組明顯提高;其中用10 mg/mL NaOH浸種60 min發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)均最高，發(fā)芽指

數(shù)第二，分別為96%、85%、184.90。

（2）透骨香種子種皮硬、厚，胚小，發(fā)芽率不高（由對(duì)照組可知），造成種子發(fā)芽率不高的原因很多，如種皮的蠟質(zhì)層、油脂層，種皮細(xì)胞內(nèi)的果膠質(zhì)、種子霉變等;透骨香種子過小，數(shù)種過程可能混雜不夠成熟飽滿的種子，同樣可能影響試驗(yàn)結(jié)果。

（3）種子發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)作為測(cè)定種子萌發(fā)的指標(biāo)，發(fā)芽勢(shì)高，種子發(fā)芽快;發(fā)芽率高，種子發(fā)芽多，存活率高;而在發(fā)芽指數(shù)也高時(shí)，才能保證種子發(fā)芽快且存活率好。在不同試劑、濃度、浸種時(shí)間處理中NaOH處理組發(fā)芽情況最好，整體發(fā)芽較快，即使有幼苗死亡情況，但幼苗存活率依然很高，其中以10 mg/mL浸種60 min處理最好，綜合三因素，下一步試驗(yàn)時(shí)建議選用10 mg/mL NaOH溶液對(duì)透骨香種子浸種60 min。

參考文獻(xiàn)

[1] 《貴州植物志》編委會(huì).貴州植物志：第三卷[M].貴陽：貴州人民出版社，1990：265.

[2] 貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（2003年版）[M].貴陽：貴州科技出版社，2003：308.

[3] 陳芳，汪毅，杜江.貴州民族藥物研究及開發(fā)現(xiàn)狀[J].中國民族民間醫(yī)藥，2013，22（6）：1-2，5.

[4] 徐晏.苗藥透骨香的研究概況[J].醫(yī)學(xué)信息，2013，26（4）：677-678.

[5] 徐樹蕓.貴州十種民族藥的應(yīng)用研究[J].世界科學(xué)技術(shù)，2006，8（6）：73-78.

[6] 李蒙禹，朱玉梅，王世清.不同干燥方式對(duì)透骨香藥材水楊酸甲酯含量的影響[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，38（4）：36-38.

[7] 扶教龍，譚昌恒，譚俊杰，等.云南透骨草的化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24（1）：8-11.

[8] 劉紹歡，何晶晶，王世清.不同采收期和部位的黔產(chǎn)透骨香中槲皮素含量測(cè)定[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2015，26（8）：2030-2032.

[9] 何飛，韋桂寧，蘇華，等.滇白珠提取物對(duì)胃腸功能以及止瀉作用研究[J].中國藥導(dǎo)報(bào)，2016，22（9）：20-22.

[10] 龍婷，丁丹，田夢(mèng)杰，等.滇白珠水提物對(duì)慢性阻塞性肺疾病大鼠氧化應(yīng)激的影響[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2014，22（2）：29-30.

[11] 蘇家樂，李暢，陳璐，等.不同預(yù)處理方法對(duì)牛皮杜鵑和小葉杜鵑種子萌發(fā)的影響[J].植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào)，2011，20（4）：64-69.

[12] 王紅明，郭素娟，賈漢森.超聲波處理對(duì)不同種源紅砂種子萌發(fā)的影響[J].種子，2015，34（1）：19-24.

[13] 孟靜靜，崔文寧，田蕊.不同處理對(duì)菘藍(lán)種子萌發(fā)及幼苗生長的影響[J].河北林果研究，2016，31（1）：34-37.

[14] 劉仁陽，歐靜，陳訓(xùn)，等.赤霉素浸種對(duì)雷山杜鵑種子萌發(fā)的影響[J].貴州科學(xué)，2013，31（2）：69-71.

[15] 譚金玉，李安定，羅充，等.土人參種子萌發(fā)特性研究[J].種子，2012，31（5）：85-87，90.

[16] 史麗萍，歐巧明，崔文娟，等.甘肅傳統(tǒng)中藥材黃芪種子發(fā)芽方法的優(yōu)選研究[J].中藥材，2014，37（4）：548-552.