周廣舟，孫彥鶴，郭爽爽

(河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，河南鄭州 450001)

現(xiàn)代水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)在過去的30年中取得了巨大發(fā)展，并成為世界范圍內(nèi)主要的經(jīng)濟(jì)和農(nóng)業(yè)增產(chǎn)途徑之一，但近來(lái)細(xì)菌、真菌、病毒和其他病原侵染引起的大量水生動(dòng)物性疫病嚴(yán)重制約著該產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，而且每年還不斷有新的病原體出現(xiàn)[1]。對(duì)病毒性病原體來(lái)說，鑒于其主要隱藏在宿主細(xì)胞內(nèi)并利用細(xì)胞代謝系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)制和擴(kuò)散，開發(fā)能正常干擾病毒復(fù)制而又不影響宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的抑制或治療措施尚無(wú)成功，致使水生動(dòng)物病毒性疾病的暴發(fā)成為目前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)面臨的難解課題之一[2]。目前，世界各地不同研究小組已從養(yǎng)殖或野生水生動(dòng)物體內(nèi)尋找并鑒定出包括虹彩病毒、呼腸病毒、水生雙RNA病毒等多種病毒，并證明它們是多類水生動(dòng)物傳染性疫病的主要病原和引起水產(chǎn)動(dòng)物產(chǎn)量和價(jià)值降低的主要元兇[3]。

細(xì)胞程序性死亡(programmed cell death，PCD)大多是細(xì)胞在遇到內(nèi)外環(huán)境因素刺激后而采取的一種主動(dòng)的受基因調(diào)控啟動(dòng)的有序死亡方式，涉及到多種細(xì)胞因子和調(diào)控機(jī)制，常見的有細(xì)胞凋亡(apoptosis)、自噬(autophagy)等[4]。宿主細(xì)胞可以利用凋亡和自噬過程限制入侵病毒的擴(kuò)增和傳播[5]，反過來(lái)病毒也可能在該過程中產(chǎn)生更多的子代病毒或利于自身的釋放[6]。除此之外，近年來(lái)還有在病毒感染過程中有新的細(xì)胞程序性非典型死亡方式如細(xì)胞壞死性凋亡(necroptosis)、焦亡(pyroptosis)等的報(bào)道[7-8]，都提示病毒與宿主細(xì)胞之間的關(guān)系是復(fù)雜而多樣的。在水生動(dòng)物病毒學(xué)研究領(lǐng)域，也有多科病毒在感染細(xì)胞過程中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并發(fā)揮特定功能的報(bào)道[9]。近幾年還有一些魚類病毒如鯉春彈狀病毒(Spring viraemia of carp virus,SVCV)、虹彩病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)等誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的研究報(bào)道[10-11]。這些研究實(shí)踐為未來(lái)深入探討水生動(dòng)物病毒的致病機(jī)制和開發(fā)可能的防控措施提供了理論基礎(chǔ)。本文就水生動(dòng)物病毒感染后誘導(dǎo)的細(xì)胞程序性死亡機(jī)制研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為今后水生動(dòng)物病毒與宿主細(xì)胞的關(guān)系研究積累更多資料。

1 水生動(dòng)物病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡研究

作為一種常見的用來(lái)清除非必需或受損細(xì)胞器且受到高度調(diào)控的細(xì)胞程序性機(jī)制，凋亡在維持機(jī)體細(xì)胞正常發(fā)育、動(dòng)態(tài)平衡等方面發(fā)揮重要作用[12]。常見的凋亡路徑包括外源性(死亡受體)和內(nèi)源性(線粒體)通路兩種，往往都涉及到多種半胱氨酸蛋白酶的激活和切割。在近年來(lái)對(duì)水生動(dòng)物病毒的研究中，發(fā)現(xiàn)多科病毒具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力，并在特定細(xì)胞內(nèi)執(zhí)行不同的功能。

1.1 Bad介導(dǎo)的細(xì)胞死亡途徑——水生雙RNA病毒(Aquabirnavirus)

研究最廣泛和深入的魚類病毒之一——傳染性胰腺壞死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus，IPNV)即是該病毒屬的重要成員。盡管在20世紀(jì)40年代就在養(yǎng)殖鱒魚中發(fā)現(xiàn)了相關(guān)疫病，但直到1955年前后才最終根據(jù)其感染組織病理變化進(jìn)行了定名。IPNV宿主范圍廣泛能感染多種魚類，并引起不同程度的侵染病癥，帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

研究發(fā)現(xiàn)，IPNV在感染魚類細(xì)胞CHSE-214后6 h即能檢測(cè)到典型的凋亡形態(tài)變化，細(xì)胞逐漸變圓并進(jìn)入凋亡程序，8 h后已有超過60%受染細(xì)胞出現(xiàn)DNA片段化現(xiàn)象[13]。進(jìn)一步的研究顯示，IPNV感染時(shí)能激活凋亡前體蛋白Bad基因表達(dá)，下調(diào)Mcl-1因子。在斑馬魚細(xì)胞系ZLE中單獨(dú)過表達(dá)IPNV的結(jié)構(gòu)蛋白基因VP3后也能導(dǎo)致Bad基因上調(diào)，進(jìn)而引起線粒體膜電位降低，激活起始和效應(yīng)caspases，最終引起細(xì)胞死亡[14]。這表明IPNV可以通過其蛋白誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

最近有關(guān)IPNV的研究顯示，IPNV在感染后其幾個(gè)蛋白基因?qū)Υ笪餮篚qI型干擾素具有顯著的拮抗效應(yīng)，其中VP2、VP3、VP4和VP5拮抗IFNa1啟動(dòng)子活性，而VP1卻能誘導(dǎo)IFNa1的產(chǎn)生[15]。這種凋亡晚期標(biāo)志現(xiàn)象提示作為一種應(yīng)對(duì)IPNV復(fù)制的防御機(jī)制，細(xì)胞凋亡能有效導(dǎo)致細(xì)胞死亡從而不會(huì)長(zhǎng)時(shí)間維持病毒的復(fù)制循環(huán)，進(jìn)而減少子代病毒的產(chǎn)生。但實(shí)際上在感染的CHSE-214細(xì)胞中仍會(huì)產(chǎn)生高滴度的IPNV，表明有部分細(xì)胞能逃避凋亡并維持病理狀態(tài)從而導(dǎo)致生成更多的子代病毒粒子。上述結(jié)果體現(xiàn)了IPNV感染細(xì)胞后的復(fù)雜性。

1.2 線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞死亡通路——乙型野田村病毒(Betanodavirus)

該病毒屬的代表株——神經(jīng)壞死癥病毒(Nervous necrosis virus,NNV)是一種RNA病毒，主要侵染魚類腦、視網(wǎng)膜和脊髓等部位，對(duì)仔(幼)魚的致死率可達(dá)95%，能感染至少40余種海水和淡水魚類，并不斷有新的宿主范圍報(bào)道[16]。

研究表明，該科病毒主要是通過線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞死亡方式誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。如赤點(diǎn)石斑魚神經(jīng)壞死病毒(Red spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)感染細(xì)胞后在早期復(fù)制階段(24 h內(nèi))誘導(dǎo)線粒體ROS產(chǎn)生，激活氧化應(yīng)激反應(yīng)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[17]。在感染的早中期，胞內(nèi)線粒體膜電位(MMP)下調(diào)，而特異性抑制劑BKA可以阻止其下調(diào)和細(xì)胞色素c的釋放。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，RGNNV感染能引起細(xì)胞抗凋亡蛋白基因Bcl-2表達(dá)下調(diào)，反過來(lái)Bcl-2家族成員zfBcl-xL和zfMcl-1a均能較強(qiáng)的抑制RGNNV引起的細(xì)胞壞死，抑制率分別達(dá)到90%和93%[18]。但RGNNV感染的多個(gè)caspases酶活包括caspases-3，8，9等與對(duì)照組相比并無(wú)明顯差別，廣譜性caspases抑制劑處理也對(duì)病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡沒有顯著影響[18]。這些結(jié)果都提示，乙型野田村病毒能在不同細(xì)胞系分別激活caspase依賴和非依賴的兩種細(xì)胞死亡途徑。其中RGNNV主要激活caspase非依賴的死亡通路，而如巨石斑魚神經(jīng)壞死病毒(Greasy grouper nervous necrosis virus,GGNNV)等在海鱸細(xì)胞里能引起caspase依賴的細(xì)胞死亡[19]。

1.3 p38 MAPK/ROS介導(dǎo)的細(xì)胞死亡途徑——正粘病毒(Orthomyxovirus)

傳染性鮭魚貧血病病毒(Infectious salmon anemia virus,ISAV)即是該病毒屬的主要代表，其基因組由八個(gè)單股負(fù)義RNA分子構(gòu)成，至少編碼10個(gè)病毒蛋白，主要侵染大西洋鮭魚，引起魚體貧血、腹水、內(nèi)臟器官和皮膚等點(diǎn)狀出血，可導(dǎo)致受染魚急性病變或處于長(zhǎng)期帶毒狀態(tài)。

最近的研究顯示，ISAV感染S.salar白細(xì)胞后能激發(fā)氧自由基的產(chǎn)生，并通過p38 MAPK信號(hào)通路介導(dǎo)凋亡前體蛋白的激活和表達(dá)并最終引起細(xì)胞凋亡。Olavarría V H等[20]在ISAV感染的鮭魚細(xì)胞系SHK-1內(nèi)，利用抑制劑SB203580阻斷caspase-3酶活后發(fā)現(xiàn)，病毒激活的p38 MAPK仍能導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)凋亡。用夾竹桃麻素(apocynin)處理抑制NADPH氧化酶活性后，caspase-3活性與未感染組相當(dāng)。但在感染72 h后，病毒滴度有16%的降低，表明細(xì)胞超氧陰離子的水平影響病毒粒子的成熟。但由于Apocynin只阻斷NADPH氧化酶而不干擾p38 MAPK的活性，對(duì)ISAV感染引起的p38 MAPK和NAPDH氧化酶激活之間的關(guān)系仍然未知，后續(xù)需要繼續(xù)開展ISAV感染的細(xì)胞和分子生物學(xué)機(jī)制研究。

1.4 ROS介導(dǎo)的細(xì)胞死亡途徑——水生呼腸病毒(Aquareovirus)

水生呼腸病毒為無(wú)包膜病毒，基因組通常由11個(gè)節(jié)段的線性雙股RNA構(gòu)成，草魚呼腸病毒(Grass carp reovirus,GCRV)作為其中致病力最強(qiáng)的毒株之一[21]，是引起草魚出血病的主要病原。近年來(lái)在草魚腎臟細(xì)胞系CIK的感染試驗(yàn)表明，GCRV能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和胞內(nèi)氧化損傷[22]。在感染早期(24 h前)，胞內(nèi)TNF-α釋放進(jìn)而激活caspase-8和下游的caspases酶(如caspase-3等)，導(dǎo)致細(xì)胞典型的內(nèi)源性和外源性凋亡的發(fā)生。但需注意的是，caspases酶的激活不依賴于病毒的復(fù)制，而且感染72 h后可能由于細(xì)胞的大量死亡，caspase 3、8、9酶活還會(huì)下降。以上結(jié)果提示，GCRV感染早期誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生在感染后期(72 h～96 h)，且后者影響病毒的復(fù)制循環(huán)。事實(shí)上，氧化應(yīng)激(主要是ROS和RNS的產(chǎn)生)是很多病毒感染的特征[23]，所以GCRV感染采用這樣的策略導(dǎo)致宿主細(xì)胞的死亡機(jī)制也并不鮮見。

1.5 ERK細(xì)胞死亡途徑——蛙虹彩病毒(Ranavirus)

虹彩病毒科成員是一類大DNA病毒，能感染包括甲殼類、貝類、昆蟲、魚類、兩棲類和爬行類生物，具有廣泛的宿主范圍并對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失[24]。該科病毒目前分成5個(gè)屬，誘導(dǎo)細(xì)胞死亡機(jī)制復(fù)雜，其中的信號(hào)通路機(jī)制仍有很多未知。

大口鱸魚病毒(Largemouth bass virus,LMBV)是一種屬于虹彩病毒蛙病毒屬(Ranavirus)的成員，Huang X等[25]對(duì)其研究發(fā)現(xiàn)，LMBV能誘導(dǎo)具典型內(nèi)源和外源性特征的細(xì)胞凋亡，包括出現(xiàn)凋亡小體、caspases酶激活和細(xì)胞色素c釋放等。此外還發(fā)現(xiàn)，PI3K和ERK細(xì)胞信號(hào)通路不僅參與到病毒自身的復(fù)制過程中，還跟病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有關(guān)。用LY294002抑制劑阻斷PI3K信號(hào)通路后，病毒滴度會(huì)嚴(yán)重降低，同時(shí)細(xì)胞凋亡程度加劇，表明PI3K通路對(duì)LMBV的感染是必需的。而抑制劑U0126抑制ERK信號(hào)通路后雖能降低子代病毒的產(chǎn)量，但病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬也被抑制，這與另一種蛙病毒屬成員——新加坡石斑魚虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)感染細(xì)胞后激活的ERK信號(hào)通路的作用類似[26]，提示ERK信號(hào)通路可能是一個(gè)潛在的抗虹彩病毒分子靶點(diǎn)。但需注意的是，LMBV感染后，細(xì)胞的p53、AP-1、NF-κB和CREB等因子的啟動(dòng)子活性均顯著降低，這與其他蛙虹彩病毒的不同。

1.6 Fas介導(dǎo)的細(xì)胞死亡途徑——細(xì)胞腫大虹彩病毒(Megalocytivirus)

條石鯛虹彩病毒(Rock bream iridovirus,RBIV)是虹彩病毒科的另一個(gè)病毒屬——腫大細(xì)胞病毒屬成員，感染魚體后能引起脾腫大和各內(nèi)臟器官嗜堿性細(xì)胞的增多。目前，盡管對(duì)條石鯛?wèi)?yīng)對(duì)RBIV的抗病毒免疫機(jī)制尚未明晰，但RBIV侵染過程中細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)因子如穿孔素、顆粒酶、Fas配體和caspases酶等已在不同宿主內(nèi)得到鑒定。學(xué)者們對(duì)RBIV在不同致病力條件下感染條石鯛后細(xì)胞凋亡相關(guān)因子進(jìn)行了研究，并發(fā)現(xiàn)了Fas介導(dǎo)參與的細(xì)胞死亡信號(hào)通路。

研究發(fā)現(xiàn)，RBIV感染后若魚體放置到26℃水溫條件下，致死率往往能達(dá)到100%。而如果感染后放置在23℃ 1周后移至17℃水溫條件下，致死率僅能達(dá)到18%(30 d后)[27]。在高致病組，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)魚體的穿孔素、顆粒酶、Fas配體和caspase-9表達(dá)量在感染8 d時(shí)都呈顯著上調(diào)，而凋亡抑制因子1(IAP1)僅在感染第1天和第4天時(shí)呈高表達(dá)，第8天和第10天的表達(dá)量與對(duì)照組沒有明顯差別。而在低致病組，試驗(yàn)魚體內(nèi)穿孔素、顆粒酶和Fas配體的表達(dá)量直到感染30 d后仍顯著高于對(duì)照組，F(xiàn)as和caspase-8，9，3表達(dá)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。低致病組試驗(yàn)魚體內(nèi)IAP1的表達(dá)量也比對(duì)照組的要高(第10天、第20天和第22天)。IAP1的上調(diào)抑制了RBIV感染后的凋亡反應(yīng)，但目前仍不清楚這種抑制效應(yīng)對(duì)魚類生存是否有利。另外，F(xiàn)as及其配體和caspase-8等雖短時(shí)間內(nèi)維持高表達(dá)，但不足以激活下游的凋亡分子。后續(xù)更深入地從分子水平研究病毒蛋白和宿主凋亡調(diào)節(jié)因子可為揭示RBIV的侵染機(jī)制提供更多信息。

2 水生動(dòng)物病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞非典型凋亡研究

新加坡石斑魚虹彩病毒株SGIV感染石斑魚宿主細(xì)胞EAGS后并未呈現(xiàn)典型的細(xì)胞凋亡特征，僅表現(xiàn)一種稱為類凋亡的細(xì)胞死亡方式，表現(xiàn)為胞質(zhì)空泡化、線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹、caspases酶活缺陷等，但無(wú)經(jīng)典的凋亡小體形成和DNA片段化等特征出現(xiàn)[26]。當(dāng)用SGIV感染非宿主細(xì)胞——胖頭鱥肌肉細(xì)胞系FHM后，細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡特征。此外還發(fā)現(xiàn)，SGIV感染EAGS細(xì)胞早期，細(xì)胞ERK1/2磷酸化，病毒可以利用激活的ERK信號(hào)途徑逃避宿主IFN誘導(dǎo)的抗病毒免疫反應(yīng)，進(jìn)而利于自身的復(fù)制和傳播。用抑制劑U0126抑制ERK信號(hào)通路延遲了細(xì)胞病變的發(fā)生，降低了SGIV誘導(dǎo)的非凋亡型細(xì)胞死亡和病毒復(fù)制量。上述這些數(shù)據(jù)表明，ERK信號(hào)途徑參與了SGIV病毒的感染和細(xì)胞非凋亡型死亡過程。

3 魚類病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬研究

在水生動(dòng)物病毒學(xué)領(lǐng)域有關(guān)病毒感染細(xì)胞引起自噬及后續(xù)效應(yīng)的研究盡管不多，但最近幾年還是有了一定的發(fā)展[28]，學(xué)者們對(duì)幾株魚類病毒誘導(dǎo)的自噬對(duì)細(xì)胞的生存和病毒的復(fù)制以及二者之間的相互關(guān)系進(jìn)行了深入地探索。

3.1 魚類彈狀病毒SVCV誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬

目前對(duì)魚類彈狀病毒誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的研究相對(duì)于其他科病毒的研究要深入得多，主要是基于對(duì)哺乳動(dòng)物彈狀病毒的前期理解基礎(chǔ)上開展的工作。哺乳動(dòng)物彈狀病毒，如水皰性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus，VSV)，感染果蠅后首先能誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)抗病毒自噬免疫反應(yīng)[29]，自噬小體數(shù)量增多，自噬相關(guān)基因(如LC3-II、Atg8等)表達(dá)上調(diào)，自噬蛋白的表達(dá)會(huì)提高子代病毒的復(fù)制量。滅活的病毒粒子或單獨(dú)的病毒糖蛋白(glycoprotein)也能激活自噬反應(yīng)，已經(jīng)確認(rèn)VSV G蛋白可作為一種病原相關(guān)分子模式被果蠅細(xì)胞受體Toll-7識(shí)別并啟動(dòng)抗病毒自噬保護(hù)反應(yīng)[30]，表明VSV誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬對(duì)病毒的復(fù)制不是必須的。

近年來(lái)，對(duì)魚類彈狀病毒的代表株——鯉春彈狀病毒SVCV的研究顯示，其G蛋白啟動(dòng)細(xì)胞的自噬效應(yīng)對(duì)病毒自身的基因組RNA復(fù)制和子代復(fù)制卻是必須的[10]，且在病毒感染過程中有助于清除受損的線粒體DNA從而維持細(xì)胞生存。由于自噬具有細(xì)胞特異性，不同細(xì)胞自噬的分子機(jī)制不同，且即使是同一種細(xì)胞，自噬的調(diào)控機(jī)制也可能不同[31]。上述不同研究組使用的細(xì)胞系不同，可能是導(dǎo)致彈狀病毒感染不同細(xì)胞后自噬效應(yīng)不一的原因。Wang等[32]對(duì)鱧魚水皰病毒(Snakehead fish vesiculovirus,SHVV)感染鱧魚細(xì)胞系SSN-1的研究也檢測(cè)到明顯的自噬性信號(hào)，而且發(fā)現(xiàn)誘發(fā)的細(xì)胞自噬能抑制病毒的復(fù)制。這些結(jié)果都為未來(lái)開展更深入的魚類病毒與宿主細(xì)胞相互作用關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。

3.2 傳染性鮭魚貧血病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬

傳染性鮭魚貧血病毒(ISAV)作為正黏病毒科的一員，近年發(fā)現(xiàn)其感染魚類細(xì)胞后細(xì)胞出現(xiàn)典型的自噬特征，包括雙層膜樣自噬小體和LC3蛋白的點(diǎn)狀聚集(熒光顯微鏡觀察)等[33]。自噬抑制劑3-MA處理能減少重組表達(dá)質(zhì)粒LC3-GFP在胞內(nèi)的聚集，且能降低病毒載量，顯示自噬過程可能在子代病毒復(fù)制循環(huán)中發(fā)揮一定的作用。

3.3 魚類虹彩病毒(Fish iridovirus)誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬

虹彩病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬近年有了新的進(jìn)展，Qi H等[34]對(duì)5株不同脊椎動(dòng)物虹彩病毒感染鱖魚魚苗細(xì)胞系MFF-1誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的狀況進(jìn)行分析的結(jié)果表明，石斑魚虹彩病毒(Grouper iridovirus,GIV)和大口鱸魚虹彩病毒LMBV感染后能誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)自噬小體，但在傳染性脾腎壞死病毒(ISKNV)、中國(guó)大鯢虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus,CGSIV)和虎紋蛙病毒(Tiger frog virus,TFV)感染的細(xì)胞內(nèi)未顯現(xiàn)類似現(xiàn)象。免疫印跡分析能檢測(cè)到LC3蛋白的轉(zhuǎn)換，熒光顯微鏡觀察能檢測(cè)到LC3蛋白的點(diǎn)狀聚集，后續(xù)藥物測(cè)試顯示自噬主要在GIV和LMBV的感染細(xì)胞內(nèi)起抗病毒作用，提示未來(lái)可能開發(fā)基于自噬調(diào)節(jié)的抗虹彩病毒感染新措施。

有趣的是，Li C等[11]利用ISKNV在鮭魚腦細(xì)胞系CPB的感染試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，ISKNV能誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)完整的自噬流，呈現(xiàn)典型的LC3蛋白轉(zhuǎn)換及點(diǎn)狀聚集和大量自噬小泡等特征。藥物處理細(xì)胞后分析發(fā)現(xiàn)，雷帕霉素誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬有助于ISKNV復(fù)制和蛋白合成，但不利于胞外病毒產(chǎn)量的增加。相反，自噬抑制劑氯喹(CQ)處理能提高ISKNV感染細(xì)胞上清液的病毒滴度。這些結(jié)果與Qi H等[34]利用ISKNV感染MFF-1細(xì)胞的狀況完全不同，這可能與使用不同的細(xì)胞系有關(guān)，進(jìn)而導(dǎo)致是否誘導(dǎo)自噬存在差異。

4 展望

在過去的幾十年間，人們已從人工養(yǎng)殖或野生魚體中分離出諸如虹彩病毒、彈狀病毒、呼腸病毒和水生雙RNA病毒等多科病毒的大量代表株。在對(duì)它們感染特性鑒定、病毒蛋白分析和基因組結(jié)構(gòu)解析的基礎(chǔ)上，病毒感染后引起的病毒與水產(chǎn)動(dòng)物宿主細(xì)胞之間的關(guān)系問題越來(lái)越成為學(xué)者們研究的焦點(diǎn)，并有可能成為厘清病毒致病機(jī)制的主要切入點(diǎn)。

很多病毒感染細(xì)胞后細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象，這種凋亡過程可能是細(xì)胞為應(yīng)對(duì)病毒侵染而采取的自保措施，從而避免更多的鄰近細(xì)胞死亡。但就病毒而言，一方面可能與宿主細(xì)胞Bcl-2等抗凋亡蛋白家族成員相互作用，阻止細(xì)胞更早死亡從而延長(zhǎng)自身的持續(xù)性感染時(shí)間，擴(kuò)增更多的子代病毒粒子；另一方面病毒也可能推動(dòng)細(xì)胞更快的凋亡裂解從而利于自身的釋放和擴(kuò)散。不同病毒株感染后誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡功能不一，需要依據(jù)具體的感染模型來(lái)分析。魚類病毒感染引起的細(xì)胞凋亡的功能研究目前已有一些進(jìn)展，但需要更多深入研究實(shí)例來(lái)支撐細(xì)胞凋亡在病毒感染中扮演的角色。

相對(duì)于凋亡，魚類病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬是最近幾年新興的研究領(lǐng)域，相關(guān)方面的研究進(jìn)展也較少，僅在幾株病毒上有初步的研究嘗試。尤其是自噬作為一種具有復(fù)雜調(diào)控機(jī)制的細(xì)胞程序性自主行為，在不同的細(xì)胞里差別很大，同一魚類病毒株在侵染不同宿主細(xì)胞后其胞內(nèi)自噬的發(fā)生及差異機(jī)制研究等尚未涉及，急需在未來(lái)有更多這方面的報(bào)道。此外，目前已有較多病原體同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和自噬的報(bào)告，對(duì)兩者之間的“串話”(Crosstalk)關(guān)系也進(jìn)行了較深入地探討[35]。但水產(chǎn)動(dòng)物病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬與凋亡之間的調(diào)控關(guān)系尚未見報(bào)道。更深入地探討魚類病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞程序性死亡機(jī)制有助于這些問題的解決，并可以為闡明這些病毒的致病機(jī)理和開發(fā)相應(yīng)的防控技術(shù)提供理論基礎(chǔ)。