馬春艷,路愜楠,段 瓊,胡偉杰,封淑華，劉雪莉

(河北省藥品檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050011)

酞酸酯類化合物(Phthalate esters, PAEs，即鄰苯二甲酸酯)，又被稱為塑化劑、增塑劑，是一種增加材料柔軟性或使材料液化的添加劑，這類塑化劑不得添加在食品里[1]. PAEs及其代謝產(chǎn)物和降解產(chǎn)物不但會損傷人體肝腎等器官，還會影響體內(nèi)荷爾蒙含量，長期在體內(nèi)積累還可能會導(dǎo)致畸形、癌變和細(xì)胞突變[2-4].

保健酒是以白酒或黃酒為主要原料，加入各種中藥材(海馬、鹿茸、人參、海參、瑪咖等)，長時間浸泡、提取、過濾制得. 酞酸酯類化合物具有脂溶性,易溶于乙醇,在保健酒的儲、運(yùn)、銷過程中與塑料制品(塑料接酒桶、塑料輸酒管、酒泵進(jìn)出處的乳膠管、塑料內(nèi)蓋等)接觸，不可避免地產(chǎn)生塑化劑的遷移. 由于酞酸酯類化合物在乙醇中的遷移率與時間有關(guān)，隨著時間的推移，產(chǎn)品中的酞酸酯類化合物含量會逐漸增高，對人身體健康造成的危害風(fēng)險上升. 目前對食品中酞酸酯類化合物的檢測方法大都采用國家標(biāo)準(zhǔn)[5-7]. 而針對保健酒類樣品，由于乙醇的濃度及中藥長時間浸泡產(chǎn)生的各種成分基質(zhì)都會影響到提取的效果，目前還沒有針對檢測保健酒中塑化劑的相關(guān)研究報道. 本文建立了保健酒中酞酸酯的氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜測定方法，為保健酒中酞酸酯污染物的風(fēng)險監(jiān)測提供技術(shù)支撐.

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

TSQ8000evo三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(Thermo，美國)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(BUCHI，瑞士)；加熱板(Thermo，美國)；恒溫水浴鍋(Memmert，德國).

正己烷(色譜純)、乙酸乙酯(色譜純)、二氯甲烷(色譜純)； 16種鄰苯二甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(MANHAGE，1 000 μg/mL)，純度均高于或等于98.0%. 樣品：6批保健酒，購于市場.

1.2 儀器條件

1.2.1 氣相色譜條件

色譜柱：TR-5 MS (30 m× 0.25 mm×0.25 μm)毛細(xì)管色譜柱；柱溫箱：60 ℃，保持1 min，以20 ℃/min升至220 ℃，保持1 min，再以5 ℃/min的速率升至280 ℃，保持4 min；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；載氣：氦氣，純度大于99.999%；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL.

1.2.2 質(zhì)譜條件

電離方式：電子轟擊電離源(EI)；電離能量：70 eV；傳輸線溫度：280 ℃；離子源溫度：300 ℃，監(jiān)測方式：采用時間選擇反應(yīng)掃描模式(T-SRM)，具體檢測離子對及其參數(shù)如表1所列.

表1 定量分析的具體參數(shù)Table 1 Parameters of quantitative analysis by GC-MS

1.3 樣品前處理方法

精密稱取5 g保健酒樣品于具塞比色管中，在沸水浴中加熱除去樣品中的乙醇，冷卻至室溫，精密加入2 mL正己烷，劇烈振搖2 min，靜置分層，取上清液進(jìn)行GC-MS/MS檢測.

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品提取條件的選擇

2.1.1 提取方式的考察

由于保健酒中含有20%～50%的乙醇，而酞酸酯類化合物溶于乙醇，所以乙醇濃度對鄰苯二甲酸酯的提取效率會造成一定的影響，因此本試驗(yàn)考察了0%、20%、30%、40%、50%不同乙醇濃度對提取效率的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明，不含乙醇的加標(biāo)樣品提取效果最好. 對保健酒類樣品去除乙醇的方式進(jìn)行了考察，分別采用沸水浴加熱、減壓旋蒸、氮吹和電熱板直接加熱4種方式進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，沸水浴加熱去除乙醇效果較好.

2.1.2 提取溶劑的考察

因酞酸酯難溶于水，較易溶于有機(jī)溶劑，國家標(biāo)準(zhǔn)[5-7]中的提取溶劑均為正己烷，而多數(shù)文獻(xiàn)中對酞酸酯類化合物均采用有機(jī)溶劑提取[8-10]. 由于保健酒中含有中藥類成分，含糖量較高，不同基質(zhì)干擾不同，本試驗(yàn)在文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，采用加標(biāo)回收的方法用正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷不同有機(jī)溶劑對保健酒樣品進(jìn)行了提取效果的考察. 通過對比回收率結(jié)果發(fā)現(xiàn)，正己烷提取效果顯著. 結(jié)果如圖1所示.

圖1 不同溶劑提取效果圖Fig.1 Extraction effect of different solvents

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

國家標(biāo)準(zhǔn)[5-7]中監(jiān)測方式均采用選擇離子掃描(SIM). 本文利用時間選擇反應(yīng)掃描模式(T-SRM)，確立了母離子和子離子，更好的屏蔽了假陽性的干擾，并且針對性地優(yōu)化采集，只在出峰時間為1.0 min時，窗口進(jìn)行采集，減少了駐留時間，避免了對質(zhì)譜檢測器的污染. 試驗(yàn)結(jié)果如圖2所示.

圖2 時間選擇反應(yīng)掃描模式下的色譜圖Fig.2 TIC chromatogram of PAEs in T-SRM

2.3 線性關(guān)系、檢出限、回收率和精密度考察

用正己烷配制系列質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程，如表2所列. 對于溶劑中存在干擾的化合物，需要將本底減去再計算標(biāo)準(zhǔn)曲線，以使標(biāo)準(zhǔn)曲線更加準(zhǔn)確. 結(jié)果表明，在0.5～8.0 mg/L范圍內(nèi)，16種酞酸酯類物質(zhì)顯良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.995. 采用樣品加標(biāo)的方法，依據(jù)色譜峰信噪比S/N=3 計算方法檢出限，結(jié)果如表2所列.

取適量的保健酒陰性樣品，添加 0.5 、2.0、8.0 mg/L 3個濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)品，平行測定 6 次. 結(jié)果表明，平均回收率為84.0% ～112.8% ，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD，n= 6 ) 均低于7% . 平均回收率和精密度數(shù)據(jù)如表2所列.

表2 PAEs的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、回收率及精密度Table 2 Linear equations, correlation coefficients, recoveries and precisions of PAEs

2.5 樣品測定

應(yīng)用所建立的方法, 對6批市售保健酒樣品(具體信息如表3所列)進(jìn)行了16種酞酸酯測定, 結(jié)果6批樣品中有3批檢出，檢出率達(dá)到了50%. 其中編號4的保健酒檢出DBP，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 mg/kg；編號5檢出DBP、DEEP和DPhP，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.4、1.7、1.1 mg/kg；編號6檢出DIBP、DBP和DPP，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2.2、2.4、0.8 mg/kg. 編號為5和6的保健酒中，DBP殘留量已超過了GB 9685-2008[11]規(guī)定的0.3 mg/kg限量值.

表3 市售6批保健酒樣品信息Table 3 Information of 6 health care wines samples

3 結(jié)論

本文建立了沸水浴加熱去除乙醇，用正己烷提取，氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜測定保健酒中16種酞酸酯的方法. 方法簡單、快速、靈敏度高、檢出限低、回收率和精密度好，可滿足保健酒中鄰苯二甲酸酯含量測定的要求. 該方法的建立對于保健酒中鄰苯二甲酸酯的風(fēng)險監(jiān)測和評估具有重要的意義.

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