鄭　蘇,胥　婧,彭　力

(十堰市太和醫(yī)院 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北 十堰 442000)

腸易激綜合征(Irritable Bowel SyIldmIIle，IBS)是一種慢性腸道功能紊亂性疾病，以感覺動(dòng)力失調(diào)及以對(duì)機(jī)械性或化學(xué)性刺激的高敏感性為特征，臨床表現(xiàn)主要為腹部不適或腹部疼痛同時(shí)伴有排便習(xí)慣及糞便性狀的改變[1]。IBS因?yàn)榘l(fā)病率高、治療遷延難愈、嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量而逐漸被越來越多的學(xué)者重視?，F(xiàn)今，西醫(yī)主要以調(diào)節(jié)腸道功能、內(nèi)臟敏感性和中樞神經(jīng)為主，治療上雖能使癥狀暫時(shí)得到控制，但療效不佳，患者依從性差且易于復(fù)發(fā)的缺點(diǎn)使患者備受困擾[2]。研究顯示，針灸防治IBS具有較好的臨床療效，特別是針灸對(duì)胃腸動(dòng)力的調(diào)整作用更是近年來關(guān)注的焦點(diǎn)之一。針刺治療是目前臨床上用于治療IBS較多的中醫(yī)外治療法之一，尤以體針治療為主,在臨床上發(fā)揮著較大的優(yōu)勢[3]。近年來的臨床研究顯示，針灸治療IBS療效確切[4]，配穴及方法多樣[5-6]，且療效優(yōu)于常規(guī)藥物[7]。因此，如何積極有效挖掘中醫(yī)理論防治功能性胃腸疾病，提高并闡明針刺對(duì)IBS的療效和作用機(jī)制具有重要的科學(xué)價(jià)值。本研究選擇電針足三里治療腸易激綜合征，觀察電針足三里對(duì)腸易激綜合征模型大鼠腸系膜微循環(huán)、內(nèi)臟敏感性、胃腸功能及CGRP、SP、VIP等的影響，探討電針治療腸易激綜合征可能的作用機(jī)制。

1　材料

1.1　動(dòng)物

選取3個(gè)月清潔級(jí)健康Wistar雄性大鼠90只，體質(zhì)量(300±20)g，由湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào): 滬動(dòng)合證字152號(hào)，飼養(yǎng)于湖北醫(yī)藥學(xué)院清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房，恒定溫度濕度，溫度保持在(23±1)℃，濕度50%左右。普通飼料正常飼養(yǎng)，自由攝食飲水，光照12 h/日。

1.2　主要試劑和儀器

韓式電針儀G6805-Ⅱ型(北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)公司)，毫針(0.35 mm×25 mm,蘇州環(huán)球針灸醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品)，大鼠自主行為裝置(7420/7445型，意大利)，中心靜脈導(dǎo)管(單腔，MEDEX普通型)、2F雙腔導(dǎo)尿管和乙酸(北京化學(xué)試劑公司)，電子天平(上海梅特勃一托利多儀器有限公生產(chǎn),規(guī)格：萬分之一)，安爾碘(上海利康消毒高科技有限公司)，超低溫三洋冰箱(日本),乙酸(北京化學(xué)試劑公司)，液體石蠟(北京化學(xué)試劑公司)，10%中性甲醛(北京百諾威生物科技有限公司)，Elisa 試劑盒(北京環(huán)宇金科生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司進(jìn)口分裝，批號(hào)：20120419)。

2　方法

2.1　模型建立及分組

3月齡SPF級(jí)雄性Wistar大鼠90只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組、模型組和電針組，每組各30只。以高乳糖飼料喂飼與束縛應(yīng)激相結(jié)合的方法制備IBS-D大鼠模型，加工高乳糖飼料[8]，略作改進(jìn)進(jìn)行束縛應(yīng)激，實(shí)驗(yàn)采用醫(yī)用橡皮膏捆綁大鼠固定于高鐵架上并傾斜60°放置，使大鼠雙后肢完全制動(dòng)，1 h后解除束縛，造模共14天，此造模方法采用相對(duì)溫和的應(yīng)激刺激結(jié)合外周致敏法同時(shí)使用，大大提高了造模的成功率。正常對(duì)照組常規(guī)喂養(yǎng)，束縛應(yīng)激同模型組，其余各組于造模的同時(shí)給予相應(yīng)的處理。

2.2　治療方法

取穴：參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》中標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜進(jìn)行定位[9]。足三里穴:位于大鼠膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨小頭下約5 mm。

電針治療：束縛大鼠后，用0.30 mm×13 mm華佗牌毫針直刺入，膠布固定，接G6805-Ⅱ型電針治療儀，兩側(cè)足三里連接電極，連續(xù)波，頻率110次/min，刺激強(qiáng)度1～1.5 mA，然后留針25 min，1次/天，共14天。模型組只捆綁束縛20 min,不治療。正常對(duì)照組不做任何處理。

2.3　觀察指標(biāo)

2.3.1內(nèi)臟敏感性的影響采用腹部回撤反射(Abdominal Withdrawal Reflex,AWR)評(píng)分檢測[10]。在乙醚麻醉下，絡(luò)合碘消毒肛門，將石蠟潤滑的導(dǎo)尿管(2F雙腔)插入大鼠肛門，氣囊末端約距肛門1 cm,后固定。大鼠蘇醒后，被放在特制的20 cm×5 cm×8 cm的塑料籠內(nèi)(塑料籠透明便于觀察)，待大鼠安靜后向氣囊內(nèi)逐漸注水，觀察大鼠腹部抬起及背部拱起時(shí)分別所需注水量，每個(gè)閾值重復(fù)3次，每次持續(xù)20 s，間隔5 s，數(shù)據(jù)取3次均值。

2.3.2胃腸道動(dòng)力檢測和結(jié)腸蠕動(dòng)波測定胃腸道動(dòng)力檢測[11]：以min計(jì)算單位，觀察各組首次排出活性炭黑便所需要的時(shí)間。結(jié)腸蠕動(dòng)波測定[12]：以個(gè)位計(jì)算單位，觀察單位時(shí)間(5 min)內(nèi)結(jié)腸蠕動(dòng)波個(gè)數(shù)。

2.3.3腸系膜微循環(huán)檢測生理鹽水維持37℃恒溫環(huán)境，在內(nèi)鏡下(×40)觀察10、20和30 min大鼠腸系膜同一微血管的管徑和血流狀態(tài)，并記錄10、20和30 min圖像變化。血流狀態(tài)分為4級(jí)：0級(jí)，無或有微顆粒感，血流快呈光滑的索條狀；Ⅰ級(jí)，有明顯的顆粒感，血流較快；Ⅱ級(jí)，血流流動(dòng)緩慢或前后擺動(dòng)慢，成泥沙狀；Ⅲ級(jí)，血流停滯不動(dòng)或不可見血流[13]。

2.3.4血漿SP、CGRP和VIP測定以10%水合氯醛溶液(350 mg/kg)腹腔麻醉大鼠，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血3 mL，肝素鈉抗凝，離心15 min(3 000轉(zhuǎn)/min)后取上清，置-80℃凍存。用放免法測定血漿SP、CGRPT和VIP含量。

2.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3　結(jié)果

3.1　3組大鼠內(nèi)臟敏感性的比較

由表1可知，治療后與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠的腹部抬起肌背部拱起值均降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；與模型組比較，電針組腹部抬起與背部拱起均有所改善，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表1　治療后3組IBS內(nèi)臟敏感性比較

注：與正常對(duì)照組比較,1)P<0.05；與模型組比較,2)P<0.05

3.2　3組大鼠SP、CGRP、VIP含量比較

由表2可知，治療后與正常對(duì)照組相比，模型組SP和VIP升高、CGRP降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；與模型組比較，電針組VIP、SP和CGRP均有所改善，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。

表2　治療后3大鼠血漿SP、CGRP和VIP含量比較　(pg/L)

注：與正常對(duì)照組比較,1)P<0.05；與模型組比較,2)P<0.05

3.3　3組大鼠腸系膜微循環(huán)比較

由表3可知，治療后與正常對(duì)照組比較，模型組微血管管徑在10 min、20 min和30 min均有所收縮，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；與模型組比較，電針組微血管管徑在10 min、20 min和30 min均有所改善，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。各組不同時(shí)間點(diǎn)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表3　治療后3組大鼠微血管直徑比較

注：與正常對(duì)照組比較,1)P<0.05；與模型組比較,2)P<0.05；與10 min時(shí)間點(diǎn)比較,3)P>0.05

由表4可知，治療后與正常對(duì)照組比較，模型組血流緩慢或停止，在Ⅰ～Ⅱ級(jí)者較多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，電針組血流明顯加快，全部恢復(fù)到0～Ⅰ級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組不同時(shí)間點(diǎn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3.4　3組大鼠胃腸道動(dòng)力及結(jié)腸蠕動(dòng)波比較

由表5可知，治療后與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠首次排出活性炭黑便所需時(shí)間明顯延長，收縮波個(gè)數(shù)有所增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，電針組大鼠首次排出活性炭黑便所需時(shí)間明顯縮短，收縮波個(gè)數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表4　治療后3組大鼠腸系膜微循環(huán)血流狀態(tài)變化　(例)

4　討論

腸易激綜合征(IBS)是一種以腹痛、腹脹、排便習(xí)慣及性狀改變等為主要癥狀的感覺動(dòng)力失調(diào)，以對(duì)機(jī)械性或化學(xué)性刺激的高敏感性為特征的慢性腸道功能紊亂性疾病。因其發(fā)病率高、治療困難、嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量而被逐漸引起重視。

表5　治療后3組胃腸道動(dòng)力和結(jié)腸蠕動(dòng)波比較

注：與正常對(duì)照組比較,1)P<0.05；與模型組比較,2)P<0.05

目前IBS的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，可能與患者腸道感覺和動(dòng)力異常、神經(jīng)-內(nèi)分泌、感染和飲食等因素密切相關(guān)[14]。研究證實(shí)[15-16]，腸易激綜合征模型大鼠的發(fā)病與P物質(zhì)(substance P,SP)、降鈣基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)、血管活性腸肽(vasoactine intrestinal peptide，VIP)、內(nèi)皮素(endothelin，ET)、白細(xì)胞介素等生物活性物質(zhì)分泌失調(diào)相關(guān)。P物質(zhì)(substance P, SP)具有刺激小腸、結(jié)腸黏膜分泌水和電解質(zhì)的作用, 可以導(dǎo)致血漿外滲、中性粒細(xì)胞浸潤，從而影響腸易激綜合征的嚴(yán)重程度[17]。降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)是一種內(nèi)源性舒血管物質(zhì)，可以通過細(xì)胞內(nèi)CGRP的介導(dǎo)作用，起到調(diào)節(jié)血流、胃腸分泌和運(yùn)動(dòng)的功能[18]。VIP可以抑制腸道蠕動(dòng)，其機(jī)制可能是通過松弛胃腸平滑肌，從而抑制結(jié)腸和直腸緊張性，此外還調(diào)節(jié)腸道對(duì)Na+和水的攝入，促進(jìn)Cl-分泌，導(dǎo)致腹瀉,總而言之，VIP與腸易激綜合征的發(fā)病過程密切相關(guān)[19]。

現(xiàn)今，西醫(yī)治療腸易激綜合征尚無特殊的治療方法。多以調(diào)節(jié)腸道功能和內(nèi)臟敏感性及中樞神經(jīng)為主，雖能使癥狀得到暫時(shí)緩解，但因療效不確定，患者依從性差，且易于復(fù)發(fā)的缺點(diǎn)而使患者備受困擾[20]。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，中醫(yī)學(xué)無IBS之病名，根據(jù)其腹痛、腹脹、排便習(xí)慣及性狀改變等癥狀，隸屬于中醫(yī)學(xué)“腹痛”“泄瀉”“便秘”和“飧泄”等范疇。其病機(jī)多為素體陰虛或陽虛、飲食不節(jié)、情志失調(diào)和外邪內(nèi)侵等，造成臟腑氣血陰陽失調(diào)、脾胃功能失常。足三里經(jīng)脈循行“屬胃絡(luò)脾，循腹里”，刺之，調(diào)節(jié)胃腸蠕動(dòng)[21]。近年來的臨床研究已逐漸表明，針灸治療IBS療效確切[4]，配穴及方法多樣[5]，并且療效優(yōu)于常規(guī)藥物[6]。

本研究顯示，腸易激綜合征模型組大鼠內(nèi)臟敏感性明顯降低，腸道微循環(huán)管徑明顯變窄，血流緩慢或停止，血漿中的SP和VIP含量升高，CGRP含量降低，次排出活性炭黑便所需時(shí)間明顯延長，收縮波個(gè)數(shù)明顯增多。而電針組大鼠內(nèi)臟敏感性有所提升，腸道微循環(huán)管徑擴(kuò)張，血流明顯加快，血漿中的SP和VIP含量有降低趨勢，CGRP含量有所升高，次排出活性炭黑便所需時(shí)間縮短，收縮波個(gè)數(shù)明顯減少。通過分析上述研究結(jié)果證明,電針可以調(diào)節(jié)腸易激綜合征大鼠血漿中CGRP、SP、VIP水平的變化，夠改善腸系膜微循環(huán)障礙，擴(kuò)張管徑,降低內(nèi)臟敏感性，促進(jìn)胃腸道動(dòng)力,緩解腸易激癥狀，從而達(dá)到治療的目的。

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