徐文玲 王淑芬 劉辰 劉賢嫻

摘要：針對(duì)我國(guó)耐抽薹種質(zhì)缺乏現(xiàn)狀，從日、韓引進(jìn)了12份春蘿卜種質(zhì)。為合理利用這些種質(zhì)，進(jìn)行了春季大田田間性狀鑒定、人工春化耐抽薹鑒定、春季分期播種耐抽薹性鑒定、花期性狀調(diào)查及不育種質(zhì)胞質(zhì)類型的分子鑒定。結(jié)果表明，除了從日本引進(jìn)的1份種質(zhì)不耐抽薹，其余11個(gè)種質(zhì)耐抽薹性、早熟性等性狀均適合春季播種。該鑒定結(jié)果，對(duì)合理、有效利用這些引進(jìn)種質(zhì)提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：春蘿卜；性狀；鑒定；耐抽薹

中圖分類號(hào)：S631.102.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2018）02-0024-05

Abstract In view of lack of anti-bolting germplasms status in China，twelve spring radish germplasms were introduced from Japan and South Korea. To make better use of them， we carried out the identification and evaluation through agronomic traits in field in spring，anti-bolting after artificial vernalization and sowing at different stages in spring，flowering trait investigation， and cytoplasmic type of male sterile germplasms by molecular marker. The results showed that eleven germplasms which had anti-bolting and earliness trait were suitable for planting in spring expect one germplasm from Japan.The results provided theory basis for scientific and effective utilization of these germplasms.

Keywords Spring radish； Traits； Identification； Anti-bolting

耐抽薹、肉質(zhì)根膨大快（早熟性好）是篩選春蘿卜種質(zhì)最重要的兩個(gè)指標(biāo)。日、韓兩個(gè)國(guó)家一直致力于耐抽薹大白菜、蘿卜育種研究，研究歷史長(zhǎng)，種質(zhì)資源豐富，目前在春大白菜、蘿卜研究方面處于國(guó)際領(lǐng)先地位。我國(guó)一方面缺乏耐抽薹蘿卜種質(zhì)資源，另一方面耐抽薹蘿卜育種研究起步較晚，因此與日、韓相比，我國(guó)在蘿卜耐抽薹育種方面仍然有較大差距。近十年來(lái)我國(guó)陸續(xù)引進(jìn)了部分日、韓春蘿卜品種在生產(chǎn)中推廣使用，但類型較少。為防止生產(chǎn)用種類型單一化導(dǎo)致病蟲(chóng)害爆發(fā)，急需豐富春蘿卜種質(zhì)資源。

日本、韓國(guó)為提高蘿卜品種的雜交率并防止親本流失，育種中多采用不育系進(jìn)行雜交育種，因此引進(jìn)的蘿卜材料中有不少種質(zhì)為雄性不育系。目前，能夠利用分子標(biāo)記鑒定的蘿卜不育胞質(zhì)類型有Ogura、DBRMF 1和DBRMF 2、DCGMS及NWB等幾種類型[1-4]。

為擴(kuò)大耐抽薹春蘿卜種質(zhì)資源基因類型，選育出更多類型的春蘿卜新品種，本研究引進(jìn)了一批耐抽薹的日、韓春蘿卜種質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行室內(nèi)及田間抽薹性、地上葉部及地下肉質(zhì)根、胞質(zhì)不育類型等性狀的綜合鑒定與評(píng)價(jià)，以期為科學(xué)利用耐抽薹與不育材料、加快我國(guó)耐抽薹蘿卜育種提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試品種為引進(jìn)的日本、韓國(guó)春蘿卜種質(zhì)12份和目前春季生產(chǎn)上常用的韓國(guó)白玉春蘿卜（CK）。供試種質(zhì)的基本信息見(jiàn)表1。

1.2 春蘿卜種質(zhì)性狀鑒定方法

1.2.1 田間農(nóng)藝性狀調(diào)查方法 2015年于泰安市岱岳區(qū)、2016年于濟(jì)南市唐王鎮(zhèn)三園種苗基地進(jìn)行了兩次測(cè)產(chǎn)試驗(yàn)，并進(jìn)行生物學(xué)性狀及抽薹率調(diào)查。兩次試驗(yàn)播種日期均為3月26日，收獲日期為5月31日，均采用地膜覆蓋、寬壟雙行栽培，株行距30 cm×70 cm。小區(qū)面積為3.6 m2，各供試春蘿卜種質(zhì)設(shè)置3次重復(fù)，每小區(qū)為1次重復(fù)。

收獲時(shí)統(tǒng)計(jì)各重復(fù)的總株數(shù)及抽薹株數(shù)（以肉眼看到現(xiàn)蕾為抽薹），在3次重復(fù)相同栽培位置連續(xù)取10株，測(cè)葉片重、肉質(zhì)根重、葉片數(shù)、葉色、根長(zhǎng)、根粗、入土長(zhǎng)等性狀，計(jì)算抽薹率、666.7m2產(chǎn)量，縮值系數(shù)0.9。

666.7m2產(chǎn)量（kg）=小區(qū)產(chǎn)量（kg）×666.7m2/小區(qū)面積×縮值系數(shù)（0.9）

抽薹率（%）=抽薹株數(shù)/總株數(shù)×100[5]

1.2.2 室內(nèi)人工春化、春季分期播種抽薹鑒定及冬暖棚花期性狀鑒定方法 室內(nèi)人工春化耐抽薹鑒定：蘿卜種子于28℃條件下催芽1 d，至90%以上種子萌芽后，放入4℃冰箱處理21 d[6]。然后播于營(yíng)養(yǎng)缽中，在溫度15～25℃、夜間補(bǔ)光至光周期16 h、光強(qiáng)6 000～8 000 lx條件下培養(yǎng)。播種35 d后，逐株調(diào)查現(xiàn)蕾期，調(diào)查時(shí)間為30 d[7]。

春季分期播種抽薹鑒定：為更加精確檢測(cè)抽薹特性，2017年于山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所試驗(yàn)基地進(jìn)行分期播種，播種時(shí)間分別為3月16日、3月26日，分別于5月20日、5月30日進(jìn)行抽薹調(diào)查。小區(qū)面積2 m2，3次重復(fù)，每小區(qū)為1次重復(fù)。

冬暖棚花期性狀鑒定：秋季11月上旬種株收獲后栽到冬暖棚中，觀察抽薹開(kāi)花情況，包括育性、花藥低溫下發(fā)育情況。

1.2.3 不育胞質(zhì)類型的分子鑒定 鑒定引進(jìn)蘿卜種質(zhì)雄性不育細(xì)胞質(zhì)類型的引物主要包括 3 對(duì)（見(jiàn)表2），為目前常用的鑒定胞質(zhì)類型的引物[8-11]。

2 結(jié)果與分析

2.1 2015、2016年引進(jìn)春蘿卜種質(zhì)資源的田間農(nóng)藝性狀

由表3可知，所有種質(zhì)生長(zhǎng)期在60 d左右，屬于早熟類型，均為白皮白肉蘿卜，L-10、L-12有淡綠肩。除L-11葉色為黃綠外，其它種質(zhì)均為深綠。L-1、L-2、L-7的葉型為淺裂葉，其余均為深裂葉。各種肉質(zhì)根長(zhǎng)在28.8～41.8 cm，根形為長(zhǎng)圓筒形，單根重在1.22～1.70 kg之間，其中L-1、L-2、L-7根皮全白，無(wú)綠肩，根型漂亮，商品性最好，另外這3份種質(zhì)早熟性最好，肉質(zhì)根膨大迅速，55 d即可開(kāi)始收獲，可以比其它品種提前上市，搶占市場(chǎng)。

由表4可知，除L-1、L-2、L-7、L-11有少量單株抽薹外，其余品種均未抽薹。L-1、L-2、L-7、L-11雖然抽薹，但抽薹率很低，不影響商品率。

對(duì)所有引進(jìn)種質(zhì)進(jìn)行產(chǎn)量調(diào)查，由表5可知，除L-6、L-8、L-9外，其余種質(zhì)的666.7m2產(chǎn)量均超過(guò) 5 000 kg，其中L-1、L-2、L-3、L-5、L-7、L-10、L-12均超過(guò)CK。L-1、L-2、L-7 666.7m2產(chǎn)量超過(guò)5 400 kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照。

2.2 室內(nèi)人工春化、春季分期播種的抽薹鑒定及冬暖棚花期性狀鑒定

因2015、2016年春季種植著重于肉質(zhì)根及葉部生物學(xué)性狀的綜合鑒定，對(duì)抽薹性狀是否因易受年份氣溫的影響而表現(xiàn)不穩(wěn)定等因素未進(jìn)行分析。為更加精確地對(duì)引進(jìn)種質(zhì)的抽薹特性進(jìn)行鑒定，本試驗(yàn)又進(jìn)行了室內(nèi)人工春化及春季分期播種抽薹調(diào)查。由表6可知，在人工春化條件下，L-3、L-5、L-6、L-8、L-10、L-12均未抽薹，CK、L-1、L-2、L-7、L-9、L-11的抽薹率均超過(guò)10%。大田3月16日播種， L-1、L-2、L-7、L-11的抽薹率超過(guò)10%，CK、L-4的抽薹率在5%以下，其余未抽薹；3月28日播種，只有L-7、L-11超過(guò)10%。結(jié)合2015、2016兩年田間種質(zhì)抽薹率結(jié)果，可以將L-3、L-5、L-6、L-8、L-10、L-12歸類為極耐抽薹類型，CK、L-4、L-9為耐抽薹類型，L-1、L-2、L-7為較耐抽薹類型，L-11為不耐抽薹類型。

因?yàn)橐匀?、韓蘿卜材料存在對(duì)我國(guó)環(huán)境不適應(yīng)情況，表現(xiàn)低溫條件下花蕾黃化脫落、只抽薹不開(kāi)花的情況，所以調(diào)查了冬季冬暖棚繁育條件下，引進(jìn)材料在前期低溫下的花蕾發(fā)育情況及花藥的育性。由表6可知，L-1、L-2、L-7、L-11是雄性不育材料。L-3、L-6的花蕾黃化嚴(yán)重，在春季前后氣溫回升前，花蕾發(fā)育到2 mm左右就不再發(fā)育，慢慢黃化，最后脫落，無(wú)法進(jìn)行正常的授粉留種；L-8、L-9的花蕾發(fā)育也不良，花蕾較癟，花粉沒(méi)有活性，也很難進(jìn)行正常的授粉留種，在2月底3月初氣溫逐漸回升后，花蕾發(fā)育才逐漸正常，但由于前期花蕾脫落較多，此時(shí)開(kāi)花盛期已過(guò)，能夠結(jié)籽的花蕾不多，因此該性狀需要改良。其它種質(zhì)花蕾發(fā)育良好，結(jié)籽也正常。

2.3 引進(jìn)春蘿卜種質(zhì)的不育胞質(zhì)類型鑒定

用3對(duì)通用引物對(duì)L-1、L-2、L-7、L-11進(jìn)行PCR鑒定以確定其胞質(zhì)不育類型。由表7可知，在L-11中擴(kuò)增出Orf138的特征條帶，因此可以確定L-11為Ogura不育胞質(zhì)類型。在L-1、L-2、L-7中擴(kuò)增出1 777 bp大小的NWB的特征條帶，因此這3份種質(zhì)為NWB不育胞質(zhì)類型。

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)中選用的對(duì)照為目前市場(chǎng)常見(jiàn)并且播種面積較廣的白玉春蘿卜，其抽薹特性、產(chǎn)量等性狀非常有代表性。根據(jù)2015、2016兩年春季大田種植的調(diào)查結(jié)果，引進(jìn)的12份種質(zhì)的抽薹特性、生長(zhǎng)期、根型、產(chǎn)量均適合春季種植，由于不同種質(zhì)間抽薹特性有差異，為防止先期抽薹，在春季播種期選擇上，不同種質(zhì)間也有差異。結(jié)合室內(nèi)人工春化及分期播種的鑒定結(jié)果，引進(jìn)種質(zhì)L-3、L-5、L-6、L-8、L-10、L-12極耐抽薹，可以在3月中旬到3月底之間分期播種，只需進(jìn)行簡(jiǎn)單的地膜覆蓋保溫即可，另外也可以利用小拱棚覆蓋提前到3月初播種。L-4、L-9為耐抽薹類型，可以在3月下旬播種，如果進(jìn)行小拱棚覆蓋，可以提前到3月中旬播種。L-1、L-2、L-7為較耐抽薹類型，3月20日之前不適合播種，可根據(jù)當(dāng)年的氣溫情況，選擇3月下旬播種；這3份種質(zhì)雖然屬于較耐抽薹類型，但是根型漂亮，商品性好，另一方面肉質(zhì)根膨大速度快，可以快速上市，特別適合早春種植。為降低特殊年份抽薹風(fēng)險(xiǎn)，這些種質(zhì)可以選擇優(yōu)異株系進(jìn)行提純，作為育種材料，與其它耐抽薹種質(zhì)進(jìn)行測(cè)配組合，提高耐抽薹性，選育出更加耐抽薹的新種質(zhì)。L-11為不耐抽薹類型，在春季種植有先期抽薹的危險(xiǎn)，因此不適宜春季種植。另外該品種雖然不適合春季種植，但春性仍然優(yōu)于普通秋季蘿卜，并且蘿卜肉質(zhì)根性狀優(yōu)良，可以通過(guò)抽薹性狀的轉(zhuǎn)育，改良抽薹特性。

通過(guò)花蕾低溫敏感性調(diào)查，引進(jìn)的種質(zhì)中4份低溫下花蕾發(fā)育不良，只抽薹不開(kāi)花，早期不易授粉成功，導(dǎo)致繁種率很低，因此在選育提純過(guò)程中應(yīng)有目的地選擇低溫下發(fā)育較好的單株，或進(jìn)行一次雜交改良該性狀。引進(jìn)的種質(zhì)中有4個(gè)雄性不育材料，通過(guò)PCR鑒定，確定了其胞質(zhì)不育類型，可為將來(lái)進(jìn)行不育性的轉(zhuǎn)育提供理論依據(jù)。

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