馬志，郝翠芳

(1.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)部，青島 266071；2.青島大學(xué)附屬煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，煙臺(tái) 264000)

過(guò)去的幾十年，研究者對(duì)非編碼RNA(non-coding RNAs，ncRNAs)的探索未曾停歇，miRNA、長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA，lncRNA)等一系列ncRNAs相繼得以確認(rèn)，其中各種潛在的功能和機(jī)制也被一一闡述。然而，同作為ncRNA家族成員，circRNAs的研究卻顯得尤為緩慢。其實(shí)早在1976年，circRNAs就在高等植物類病毒中被發(fā)現(xiàn)；僅間隔3年，Hsu等借助電子顯微鏡也在人類細(xì)胞中首次觀察到circRNAs。隨后，在DCC(deleted in colorectal cancer)、MLL、ETS-1、Dystrophin和Cytochrome P450 2C18等基因的轉(zhuǎn)錄物中也均發(fā)現(xiàn)了circRNAs的存在[1]。由于與典型線性RNA存在較大結(jié)構(gòu)上的差異且缺乏切實(shí)有效的研究手段，circRNAs獨(dú)特的環(huán)狀結(jié)構(gòu)一度被認(rèn)為是由錯(cuò)誤剪接而來(lái)，只是轉(zhuǎn)錄過(guò)程的副產(chǎn)品或逃脫內(nèi)含子套索的中介物，因而未能引起研究者的足夠重視[2]。隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和生物信息技術(shù)的不斷成熟，人們對(duì)于circRNAs存在的困惑逐漸消除。而在卵巢顆粒細(xì)胞及輔助生殖技術(shù)植入前胚胎中檢測(cè)出大量豐富差異表達(dá)的circRNAs也提示其對(duì)卵母細(xì)胞成熟和胚胎發(fā)育或許存在重要的調(diào)節(jié)作用，本文就近年來(lái)circRNAs研究進(jìn)展及與女性生殖健康的關(guān)系作一綜述。

一、CircRNAs的形成

與典型線性RNA剪接模式不同，circRNAs以一種“反向剪接(back splicing)”的方式形成3’-5’或2’-5’相連的共價(jià)環(huán)狀結(jié)構(gòu)；其可由外顯子、內(nèi)含子或二者共同構(gòu)成，也可來(lái)源于3’和5’非翻譯區(qū)(Untranslated regions，UTRs)[3]。

1.CircRNAs的類別：a.外顯子circRNAs(Exonic cirRNAs，ecircRNAs)環(huán)形結(jié)構(gòu)中僅包含外顯子序列，是現(xiàn)階段在動(dòng)物及植物circRNAs中發(fā)現(xiàn)的占比最大的一部分[4-5]。多數(shù)ecircRNAs包含5個(gè)以內(nèi)的外顯子，長(zhǎng)度從數(shù)百至幾千個(gè)核苷酸(nucleotide，nt)不等，平均約為547 nt，主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，與miRNA和RNA結(jié)合蛋白(RNA-binding proteins，RBPs)之間密切聯(lián)系[6]。b.內(nèi)含子circRNAs(Intronic circRNAs，ciRNAs) 僅包含內(nèi)含子序列，約占已發(fā)現(xiàn)的人類circRNAs的19.2%，在植物中則鮮有表達(dá)[5，7]。ciRNAs是由2’-5’相連而成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，其在穩(wěn)定性、細(xì)胞定位、進(jìn)化保守性和生物學(xué)功能等方面均與ecircRNAs存在區(qū)別。ciRNAs在胞核中含量較豐富，且其表達(dá)與親本mRNA表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)性[8]。c.外顯子-內(nèi)含子circRNAs(Exon-intron circRNAs，EIciRNAs) 由于某種原因?qū)е录s20% ecircRNAs中存留部分內(nèi)含子而形成[9]。EIciRNAs主要分布在胞核，可與RNA 聚合酶Ⅱ(Polymerase Ⅱ，pol Ⅱ)相互作用而促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄，側(cè)翼內(nèi)含子(flanking intron)上的反向互補(bǔ)序列可能與其生物合成有關(guān)[10]。

2.EcircRNAs和EIciRNAs的形成：外顯子環(huán)化由下游的3’尾端(剪接受體)與上游的5’帽端(剪接供體)反向共價(jià)連接完成。通常外顯子序列越長(zhǎng)，越易成環(huán)，這尤其表現(xiàn)在單外顯子ecircRNAs的形成中[11-12]。值得注意的是，一個(gè)基因位點(diǎn)可通過(guò)“可變環(huán)化”(alternative circularization)的方式產(chǎn)生多種ecircRNAs及EIciRNAs[10-11]。反向剪接的機(jī)制包括兩種——直接反向剪接和外顯子跳讀(exon skipping)，其中直接反向剪接又可通過(guò)兩條途徑完成，即“內(nèi)含子配對(duì)驅(qū)動(dòng)環(huán)化”和“RBPs配對(duì)驅(qū)動(dòng)環(huán)化”，而外顯子跳讀也被稱作“套索驅(qū)動(dòng)環(huán)化”[13-15]。直接反向剪接的發(fā)生需要多種順式作用元件和(或)反式作用因子的參與，如某些剪接位點(diǎn)旁側(cè)翼內(nèi)含子上的反向互補(bǔ)序列可形成穩(wěn)定的堿基配對(duì)，對(duì)提高circRNAs的生物合成十分重要[4，16]。也有研究指出，在線蟲及人中分別有62%和91%的circRNAs并不能形成強(qiáng)的內(nèi)含子堿基配對(duì)[17]。Westholm等[18]在對(duì)果蠅的全基因組分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，某些基因位點(diǎn)缺少內(nèi)含子配對(duì)需要的核苷酸模體，卻仍能形成大量的circRNAs。由此看來(lái)，單純的內(nèi)含子配對(duì)驅(qū)動(dòng)環(huán)化或許并不能很好解釋circRNAs的廣泛存在性。除側(cè)翼內(nèi)含子外，一些特異的RBPs也在circRNAs形成中發(fā)揮重要作用，Quaking(QKI)和Muscleblind(MBL)是其中最為典型的代表。研究發(fā)現(xiàn)，在側(cè)翼內(nèi)含子上有RBPs特異的結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)敲出QKI基因或過(guò)表達(dá)MBL基因，可以觀察到circRNAs的表達(dá)會(huì)相應(yīng)地顯著下調(diào)或上調(diào)[19-20]。外顯子跳讀作為mRNA形成過(guò)程中一種常見的可變剪接的方式，也同樣影響著circRNAs的合成[15，21]。在跳讀過(guò)程中，首先會(huì)形成一個(gè)同時(shí)包含外顯子和內(nèi)含子的套索，接著在剪接體的作用下，內(nèi)含子會(huì)被全部或部分移除，從而形成成熟的ecircRNAs或EIcircRNAs[14-15]。但成環(huán)的過(guò)程是否只由套索引起，還是RBPs也參與其中，尚無(wú)定論。

3.ciRNAs的形成：不同于外顯子環(huán)化，ciRNAs的形成依賴于特定的共有模體(consensus motif)，它包含靠近5’剪接點(diǎn)7 nt長(zhǎng)富含GU的序列和分支點(diǎn)附近11 nt長(zhǎng)富含C的序列[8]。內(nèi)含子環(huán)化首先需要3’端外顯子的釋放，接著末端游離的2-OH主動(dòng)“攻擊”5’端內(nèi)含子-外顯子連接處而形成2’-5’共價(jià)環(huán)化[22]。由于共有模體的存在，該套索結(jié)構(gòu)可避免脫支酶的作用，最終被RNase剪接為成熟的ciRNA[8]。然而，目前對(duì)于共有模體如何能使套索結(jié)構(gòu)逃避脫支作用仍不明確。

二、circRNAs的顯著特性

1.較高的穩(wěn)定性：環(huán)狀RNA呈現(xiàn)特殊的閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，既無(wú)5’-3’極性，也沒有ploy A尾，不易被RNase R降解，這就使得其在細(xì)胞中具有比線性RNA更高的穩(wěn)定性：大部分circRNAs半衰期超過(guò)48 h，而線性RNA通常小于20 h[4]。有學(xué)者在健康個(gè)體的不含細(xì)胞的唾液(Cell-free saliva，CFS)中檢測(cè)出400多種circRNAs，證明circRNAs可穩(wěn)定存在于各類細(xì)胞外體液之中[23]。

2.分布廣泛，種類繁多：現(xiàn)有研究表明，circRNAs在真核生物體內(nèi)廣泛表達(dá)，其中人體細(xì)胞中存在的circRNAs占所有轉(zhuǎn)錄本的10%以上[24]，某些circRNAs的豐度甚至超過(guò)相應(yīng)的mRNA 10倍之多，但大部分還是以低水平表達(dá)為主[4]。Jeck等[4]運(yùn)用高通量測(cè)序從人纖維母細(xì)胞中檢測(cè)出超過(guò)25 000種穩(wěn)定存在的ecircRNAs；新近發(fā)現(xiàn)[25]，人心源性circRNAs的種類也多達(dá)15 300余種。Max Delbruck分子醫(yī)學(xué)中心(MDC)建立的環(huán)狀RNA數(shù)據(jù)庫(kù)circBase中的circRNAs已超過(guò)40萬(wàn)種，其中來(lái)自人類細(xì)胞的有35萬(wàn)余種。

3.進(jìn)化較為保守：在繁雜的circRNAs研究中，學(xué)者們驚訝的發(fā)現(xiàn)，其中許多circRNAs擁有大量保守序列。Salzman等[26]指出，人與小鼠的同源基因中約4%可形成circRNAs；EcircRNAs較其他circRNAs可表現(xiàn)出更為廣泛的序列保守性，尤其在第3個(gè)密碼子的位置[3]。CircRNAs在不同物種間的保守性或許暗示，其并不能被簡(jiǎn)單地看作pre-mRNA剪接過(guò)程的副產(chǎn)物，而是可能在某些基本的生命過(guò)程中起到重要作用。但也有實(shí)驗(yàn)顯示，小鼠與人同源基因circRNAs中的外顯子并不比其相鄰的線性RNA中的外顯子表現(xiàn)出更強(qiáng)的保守性[9]。不過(guò)，在許多物種間都觀察到，circRNAs側(cè)翼長(zhǎng)內(nèi)含子序列的存在，這些長(zhǎng)內(nèi)含子本身并不導(dǎo)致circRNAs的形成，但其包含的反向互補(bǔ)序列可促進(jìn)成環(huán)作用，是動(dòng)植物中的一種保守特性[4-5，24]。

4.表達(dá)的時(shí)空特異性：circRNAs的表達(dá)在不同的組織細(xì)胞及發(fā)育階段通常各不相同(tissue/developmental-stage specific expression)，即所謂的時(shí)空特異性表達(dá)(spatiotemporal specific expression)。例如，hsa_circRNA_2149可在CD19+白細(xì)胞中檢測(cè)到，但在CD34+白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞以及HEK293細(xì)胞中均無(wú)表達(dá)[27]；某些circRNAs在線蟲卵母細(xì)胞中表達(dá)，但在1或2細(xì)胞胚胎階段卻又消失了[3]；Conn等[20]在研究哺乳動(dòng)物接受TGF-β治療時(shí)發(fā)現(xiàn)，上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(Epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)的過(guò)程會(huì)影響到百余種circRNAs的表達(dá)。由此看來(lái)，與傳統(tǒng)mRNA不同，circRNAs在不同細(xì)胞、組織中表達(dá)各異，并隨著機(jī)體發(fā)育及各項(xiàng)病理生理過(guò)程的改變而發(fā)生顯著變化。

5.其他。大部分circRNAs包含外顯子序列，多定位于細(xì)胞質(zhì)，作為ncRNA的一種，其擁有miRNA反應(yīng)元件(miRNA response elements，MREs)[3-4]，可作為“miRNA海綿”來(lái)發(fā)揮作用；而定位于真核生物胞核的ciRNA和EIciRNA則可能參與基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，如敲除CircEIF3J可導(dǎo)致EIF3J水平的顯著下降[8，10]。

三、CircRNAs的獨(dú)特功能

盡管對(duì)于circRNAs發(fā)揮作用的確切機(jī)制仍不明確，但最近各類研究提示其可能通過(guò)與RNA和蛋白質(zhì)作用，或調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄及可變剪接、甚至參與翻譯等過(guò)程有關(guān)。

1.作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA(Competitive endogenous RNA，ceRNA)，即“miRNA海綿”小腦變性相關(guān)蛋白1反義轉(zhuǎn)錄物(antisense to the cerebellar degeneration-related protein 1 transcript，CDR1as)，亦稱CiRS-7(Circular RNA Sponge for miR-7)擁有63個(gè)與miRNA-7相結(jié)合的保守位點(diǎn)[3，28]。CDR1as在細(xì)胞質(zhì)中高表達(dá)，據(jù)估計(jì)在腦組織中，每個(gè)細(xì)胞最多可與20 000個(gè)miR-7分子相結(jié)合[29]。研究發(fā)現(xiàn)，抑制CDR1as的表達(dá)會(huì)導(dǎo)致miR-7靶向mRNA表達(dá)的減少，由此看來(lái)CDR1as可與mRNA競(jìng)爭(zhēng)性相結(jié)合miR-7而在多項(xiàng)生命活動(dòng)中發(fā)揮作用。此外，在小鼠體內(nèi)，人們發(fā)現(xiàn)一種睪丸特異性circRNAs——CircSry，包含與miR-138靶向結(jié)合的16個(gè)特異位點(diǎn)[28]；CircHIPK3和Circ-Foxo3甚至能與多種miRNA相結(jié)合[30-31]。Lyu等[29]認(rèn)為，盡管目前缺乏充分證據(jù)，circRNAs還可能與mRNA或lncRNA相結(jié)合來(lái)調(diào)節(jié)基因表達(dá)。

2.調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄及可變剪接：circRNAs多定位于細(xì)胞質(zhì)中，但在胞核中也發(fā)現(xiàn)有同時(shí)包含外顯子和內(nèi)含子的EIciRNA的豐富表達(dá)，其被認(rèn)為與親本基因的轉(zhuǎn)錄密切相關(guān)[10]。EIciRNA可通過(guò)特異的RNA-RNA相互作用的方式與U1小核核糖核蛋白(Small nuclear ribonucleoproteins，snRNP)結(jié)合形成EIciRNA-U1snRNP復(fù)合體，進(jìn)而與RNA pol Ⅱ轉(zhuǎn)錄復(fù)合物作用以促進(jìn)親本基因的轉(zhuǎn)錄。由于circRNAs與mRNA擁有共同的pre-mRNA起源，circRNAs的產(chǎn)生勢(shì)必會(huì)影響mRNA的剪接形成。如Ashwal-Fluss等[19]的研究發(fā)現(xiàn)，muscleblind基因可編碼剪接因子MBL，而CircMbl由能與傳統(tǒng)剪接(Canonical splicing)相競(jìng)爭(zhēng)的剪接因子MBL第二個(gè)外顯子形成，其本身及側(cè)翼內(nèi)含子序列擁有多個(gè)能與MBL緊密、特異結(jié)合的保守位點(diǎn)，因而MBL的水平會(huì)直接影響CircMbl的生物合成。

3.與某些蛋白質(zhì)相互作用:研究發(fā)現(xiàn)，circRNAs可與Argonaute、RNA Pol Ⅱ和MBL等多種RBPs相結(jié)合，其可能通過(guò)類似于“miRNA海綿”的競(jìng)爭(zhēng)模式來(lái)調(diào)節(jié)RBPs的功能以發(fā)揮重要作用。Foxo3是轉(zhuǎn)錄因子“叉頭家族”中的一員，由其來(lái)源的Circ-Foxo3可與抗衰蛋白ID1、E2F1以及抗應(yīng)激蛋白FAK、HIF1α相結(jié)合而阻斷相應(yīng)蛋白的生理作用[32]。Du等[33]的研究發(fā)現(xiàn)，Circ-Foxo3在非癌細(xì)胞中高表達(dá)，與細(xì)胞周期的進(jìn)展相關(guān)，沉默內(nèi)源性的Circ-Foxo3可促進(jìn)細(xì)胞的增殖；進(jìn)一步研究表明，異位表達(dá)的Circ-Foxo3可與細(xì)胞周期蛋白——周期依賴性激2(Cyclin-dependent kinase 2，CDK2)以及周期依賴性激酶抑制因子1(p21)相結(jié)合，形成Circ-Foxo3-p21-CDK2三體復(fù)合物而阻礙CDK2發(fā)揮作用，最終導(dǎo)致細(xì)胞周期受到抑制。但目前對(duì)于在無(wú)特定RNA結(jié)合域的情況下，Circ-Foxo3如何與這些蛋白質(zhì)直接作用仍不十分清楚[29]。

4.參與翻譯過(guò)程：傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，circRNAs作為ncRNA家族中的一員，不參與核糖體介導(dǎo)的翻譯過(guò)程。但大部分circRNAs通常含有編碼蛋白質(zhì)的外顯子和開放閱讀框[24，34](Open-reading frame，ORF)，而且多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)表明，人工改建的含有內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(Internal ribosome entry sites，IRES)或原核結(jié)合位點(diǎn)(prokaryotic binding site)的circRNAs可被有效翻譯[16，35]；最新研究甚至發(fā)現(xiàn)，在人類基因組中存在上千種不依賴5’帽端結(jié)構(gòu)的翻譯序列[36]，Abe等[37]則通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，哺乳動(dòng)物或人類細(xì)胞中的circRNAs可不依賴任何IRES、poly A尾或是帽子結(jié)構(gòu)而以滾環(huán)擴(kuò)增(Rolling circle amplification，RCA)的方式翻譯出足量的蛋白產(chǎn)物。這些結(jié)果均提示，circRNAs可能以某種潛在機(jī)制有效地參與翻譯過(guò)程。

四、circRNAs與女性生殖和妊娠相關(guān)疾病

1.circRNAs在顆粒細(xì)胞中的表達(dá)：顆粒細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞的發(fā)育、成熟起著重要的營(yíng)養(yǎng)及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，對(duì)其基因表達(dá)改變的研究可對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育微環(huán)境進(jìn)行重要評(píng)估，在輔助生殖技術(shù)中具有顯著意義。Cheng等[38]對(duì)不同年齡組IVF患者顆粒細(xì)胞circRNAs表達(dá)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)circRNA_103829、circRNA_103827和circRNA_104816在高齡組(≥38歲)表達(dá)上調(diào)，而circRNA_101889明顯下調(diào)，接受促性腺激素治療調(diào)整后，則只有circRNA_103827和circRNA_104816的水平呈現(xiàn)出年齡正相關(guān)性；同時(shí)，二者還與高質(zhì)量胚胎數(shù)存在負(fù)相關(guān)性。生物信息學(xué)分析提示，這兩種circRNAs可能通過(guò)circRNAs-miRNA-mRNA網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)共同的靶基因ANKRD20A9O、KCNQ1OT1和XIST來(lái)潛在地參與糖代謝、有絲分裂細(xì)胞周期和卵巢類固醇合成等重要過(guò)程：全基因組關(guān)聯(lián)分析顯示ANKRD20A9O位點(diǎn)與漢族人群壽命聯(lián)系密切[39]；KCNQ1OT1是父系表達(dá)的等位基因，通過(guò)調(diào)節(jié)組蛋白甲基化來(lái)參與轉(zhuǎn)錄沉默，如果發(fā)生誤調(diào)將引起嚴(yán)重生理和遺傳異常[40]；缺乏XIST會(huì)導(dǎo)致早囊胚期全基因組的轉(zhuǎn)錄水平誤調(diào)和植入后致死[41]。在卵巢衰老和胚胎異常發(fā)育的過(guò)程中，上述表觀遺傳學(xué)的調(diào)節(jié)異常起到了重要作用。

2.circRNAs與胚胎發(fā)育：哺乳動(dòng)物的發(fā)育始于精卵結(jié)合形成受精卵，此時(shí)合子的基因轉(zhuǎn)錄開始被激活，分析不同階段基因的動(dòng)態(tài)表達(dá)對(duì)于闡明早期胚胎發(fā)育的分子機(jī)制十分重要。在對(duì)輔助生殖技術(shù)植入前胚胎的研究中，Dang等[42]運(yùn)用其團(tuán)隊(duì)開發(fā)的單細(xì)胞RNA測(cè)序技術(shù)SUPeR-seq完成了單胚胎全轉(zhuǎn)錄組的分析，10 032種宿主基因來(lái)源的ecircRNAs被確認(rèn)；進(jìn)一步分析表明，2 974種circRNAs宿主基因中有1 554種是母源性基因，851種是合子基因。而不同發(fā)育階段(卵母細(xì)胞、合子、2-細(xì)胞、4-細(xì)胞、8-細(xì)胞、桑葚胚和囊胚期)的表達(dá)水平差異則顯示，circRNAs在胚胎發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)呈現(xiàn)出顯著的動(dòng)態(tài)變化：其表達(dá)總量在28 774-190 008拷貝之間，4-細(xì)胞期達(dá)到峰值，而后逐漸下降，至孵化期囊胚最低；在宿主基因轉(zhuǎn)錄物占比中，桑葚胚期最高，可達(dá)25%；環(huán)狀與線性轉(zhuǎn)錄物之比(circular to linear ratio，CLR)在母源和合子基因之間也存在差異，母源基因CLR隨胚胎發(fā)育逐漸增加，尤其在8-細(xì)胞期之后，而合子基因CLR通常會(huì)下降。這些結(jié)果表明，在母源-合子轉(zhuǎn)化(maternal zygotic transition，MZT)過(guò)程中，circRNAs比其他線性轉(zhuǎn)錄物更能耐受母源性RNA的清除。與前期研究[43]相對(duì)比，Dang等還發(fā)現(xiàn)，小鼠植入前胚胎中確認(rèn)的1 316種circRNAs宿主基因有835種(63%)也可產(chǎn)生人胚胎circRNAs；盡管確切作用機(jī)制尚未完全闡明，但基因本體論(Gene Ontology，GO)分析提示，circRNAs宿主基因在人胚胎中豐富存在，與DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞器和染色體結(jié)構(gòu)、細(xì)胞周期進(jìn)程及代謝調(diào)節(jié)等過(guò)程息息相關(guān)。

3.circRNAs與卵巢上皮性腫瘤：腫瘤的發(fā)生通常由介導(dǎo)細(xì)胞增殖與分化的信號(hào)通路的調(diào)節(jié)異常所引起，如上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT)的NFkB，TGF-β和ILK，以及增殖信號(hào)通路中的PI3k/AKT，JAK/STAT等。通過(guò)對(duì)卵巢上皮性腫瘤組織樣本進(jìn)行末端配對(duì)RNA測(cè)序，Ahmed等[44]研究證實(shí)了其中存在豐富表達(dá)的circRNAs，且相比于mRNA，circRNAs在不同腫瘤類別(原發(fā)灶、腹腔轉(zhuǎn)移部位以及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié))中的表達(dá)更具差異性，上述致瘤信號(hào)通路中高表達(dá)mRNA時(shí)均伴有相應(yīng)的circRNAs表達(dá)下調(diào)；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，具有負(fù)性調(diào)節(jié)原癌基因RAS和MYC的miRNA let-7在原發(fā)灶中的表達(dá)明顯低于腹腔轉(zhuǎn)移部位，而相應(yīng)的能夠編碼含有多個(gè)let-7結(jié)合位點(diǎn)的circRNAs的基因在卵巢腫瘤原發(fā)部位的表達(dá)是增高的，這或許可以用circRNAs作為miRNA海綿的獨(dú)特特性來(lái)合理解釋。

4.circRNAs與子癇前期：Zhang 等[45]首次嘗試檢測(cè)不同早孕(<20周)孕婦血細(xì)胞中circRNAs的表達(dá)差異，并聯(lián)合血漿蛋白因子Endoglin(ENG)來(lái)預(yù)測(cè)子癇前期(Preeclampsia，PE)的發(fā)生，結(jié)果顯示，血細(xì)胞circ_101222 表達(dá)在PE與正常孕婦間具有顯著差異。聯(lián)合血漿ENG檢測(cè)對(duì)PE的預(yù)測(cè)敏感性可達(dá)0.7073，特異性0.8049。Qian 等[46]比較了PE與早產(chǎn)產(chǎn)婦胎盤組織中circRNAs 的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)hsa_circRNA_100782、hsa_circRNA_102682、hsa_circRNA_104820在兩組間有顯著差異，三者在PE組表達(dá)明顯上調(diào)。在此之前，欒麗霞等[47]則已通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，與正常產(chǎn)婦相比，子癇前期患者胎盤組織中顯著高表達(dá)miR-30a-3p。這或許也暗示，miRNAs與circRNAs等構(gòu)成的復(fù)雜ceRNA網(wǎng)絡(luò)對(duì)于促進(jìn)PE的發(fā)生起到了重要作用。

五、總結(jié)與展望

高通量測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展以及生物信息技術(shù)的日臻完善為我們進(jìn)一步研究circRNAs提供了極大的便利，人體組織細(xì)胞內(nèi)越來(lái)越多差異表達(dá)的circRNAs被檢測(cè)出來(lái)。然而，盡管現(xiàn)階段各類研究發(fā)現(xiàn)的circRNAs數(shù)目巨大，但對(duì)于其中的大部分，我們并不十分清楚其確切的作用機(jī)制及潛在功能。未來(lái)對(duì)于顆粒細(xì)胞及輔助生殖技術(shù)植入前胚胎表達(dá)的circRNAs的深入研究，有望更加全面、準(zhǔn)確地解讀或評(píng)估生殖細(xì)胞及胚胎的發(fā)育過(guò)程，為實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育打下堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。由于具有較高的穩(wěn)定性，現(xiàn)已在人唾液、外泌體和血樣本中檢測(cè)到circRNAs的存在，因而有理由相信，circRNAs在作為診斷卵巢癌和子癇前期等女性生殖相關(guān)疾病的生物標(biāo)志物以及用以評(píng)價(jià)個(gè)體易感性等方面的應(yīng)用具有光明前景。鑒于circRNAs的獨(dú)特功能，我們甚至可以通過(guò)構(gòu)建外源人工circRNAs，利用其與miRNA和RBPs等的密切聯(lián)系來(lái)調(diào)節(jié)目的基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控配子形成和胚胎發(fā)育以及對(duì)各類疾病起到良好的治療效果?？偠灾?，circRNAs的發(fā)現(xiàn)為我們更好解讀微觀世界的基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)打開了一扇嶄新的大門，為維護(hù)女性生殖健康提供了更為廣闊的思路。

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