段富家 張延平 李麗娜 蔣興旺 劉金偉 肖林

噪聲性聽(tīng)力損失(noise-induced hearing loss, NIHL)是人們?cè)陂L(zhǎng)期接受噪聲刺激后而發(fā)生的漸進(jìn)性感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失?？拥拦な虏还苁窃诤推侥甏€是戰(zhàn)爭(zhēng)時(shí)期的戰(zhàn)略地位都極其重要，由于坑道處于密閉環(huán)境中，施工時(shí)設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)都會(huì)產(chǎn)生較大的噪聲，而且坑道對(duì)于噪聲吸收差，使其形成了持續(xù)性、來(lái)回反射的混合性噪聲，長(zhǎng)期暴露于此環(huán)境中，可造成漸進(jìn)性聽(tīng)力損失。研究發(fā)現(xiàn)NIHL的發(fā)生存在個(gè)體易感性，遺傳因素可能使某些個(gè)體對(duì)噪聲的易感性更高[1]，目前NIHL易感的機(jī)制還不完全清楚，尚未見(jiàn)到有關(guān)血清分子標(biāo)志物報(bào)道。

蛋白組學(xué)研究方法已經(jīng)廣泛用于疾病特異性標(biāo)記物的篩選工作，可以避免單個(gè)基因、多個(gè)基因簡(jiǎn)單疊加產(chǎn)生的敏感度、特異度矛盾，對(duì)臨床診斷和疾病預(yù)后判斷具有重要的價(jià)值。本研究在前期研究[2]基礎(chǔ)上，通過(guò)雙向電泳及基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spetrometry，MALDI-TOF-MS)對(duì)坑道作業(yè)官兵NIHL易感個(gè)體和非易感個(gè)體血清差異表達(dá)蛋白進(jìn)行分離和鑒定，為進(jìn)一步研究坑道作業(yè)官兵NIHL易感性發(fā)生原因、篩選易感個(gè)體的血清分子標(biāo)志物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1材料與儀器 冷凍離心機(jī)(北京離心機(jī)廠)、IPGhor等電聚焦儀(美國(guó)GE Healthcare)、DALT-SIX SDS-PAGE電泳儀(美國(guó)GE Healthcare)、ImageScanner掃描儀(美國(guó)GE Healthcare)、ABI 5800 MALDI-TOF/TOF串聯(lián)質(zhì)譜儀(德國(guó)Bruker公司)、真空冷凍干燥機(jī)(德國(guó)Christ公司)、血清高豐度蛋白去除試劑盒(美國(guó)Merck公司)、PDquest分析軟件(美國(guó)Bio-Rad公司)等。

1.2研究對(duì)象 前期研究[2]在某兩個(gè)施工坑道作業(yè)工齡1年以上的官兵中隨機(jī)抽取296名士兵，均為男性，年齡18～39歲,平均24.20±7.56歲，用Madsen ITERA(丹麥，爾聽(tīng)美)聽(tīng)力計(jì)按GB7583-1987檢測(cè)官兵脫離噪聲作業(yè)16～24小時(shí)后左、右耳0.125～8 kHz純音氣導(dǎo)聽(tīng)閾，按照《工作場(chǎng)所物理因素測(cè)量噪聲》(GBZ/T 1 89.8—2007)規(guī)定的抽樣方法進(jìn)行抽樣，使用個(gè)人聲暴露計(jì)(AWA一5610E型，杭州愛(ài)華儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn))測(cè)量坑道作業(yè)時(shí)不同工種的個(gè)體噪聲暴露強(qiáng)度和時(shí)間，并按等能量原理計(jì)算每個(gè)人的累積噪聲暴露量(cumulative noiseexposure,CNE)；根據(jù)上述結(jié)果,使用線性函數(shù)模型建立噪聲暴露與聽(tīng)力損失之間的線性關(guān)系，分析自變量CNE(X)與因變量預(yù)測(cè)平均高頻聽(tīng)閾(Y) (3 000、4 000、6 000 Hz三個(gè)頻率純音氣導(dǎo)聽(tīng)閾均值)之間的關(guān)系；根據(jù)296名官兵實(shí)測(cè)的平均高頻聽(tīng)閾與線性模型中的預(yù)測(cè)聽(tīng)閾值繪制了人群易感分布圖，根據(jù)NIHL易感人群分布,將這296名士兵分為易感組和非易感組。本研究從上述易感組和非易感組中各選取20例作為研究對(duì)象，其中，易感組平均年齡24.79±2.03歲，高頻平均聽(tīng)閾48.55±11.54 dB HL，語(yǔ)頻平均聽(tīng)閾22.43±8.31 dB HL；非易感組平均年齡23.67±3.56歲，高頻平均聽(tīng)閾9.40±2.54 dB HL，語(yǔ)頻平均聽(tīng)閾13.40±4.13 dB HL，兩組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。所有受試對(duì)象均簽署知情同意書，實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)解放軍第309醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.3血清樣品處理 每例研究對(duì)象抽取空腹靜脈血5毫升，進(jìn)行雙向電泳研究。新鮮的血清樣品立即去除高豐度蛋白，轉(zhuǎn)移至超濾管中,4 000×g離心1 h進(jìn)行除鹽濃縮，得到血清樣品,分裝,置- 80 ℃ 冰箱保存?zhèn)溆?用BCA 法測(cè)血清樣品濃度。

1.4雙向凝膠電泳 先進(jìn)行第一向等電點(diǎn)聚焦，取-20 ℃冷凍保存的 IPG預(yù)制膠條(17 cm,pH4～7),室溫中放置10 min。沿著聚焦盤中槽的邊緣線性加入樣品,分清膠條的正負(fù)極,將IPG 膠條膠面朝下置于聚焦盤中樣品溶液上,在每根膠條上覆蓋2 ～ 3 ml 礦物油,對(duì)好正、負(fù)極,蓋上蓋子,設(shè)置等電聚焦程序。然后進(jìn)行第二項(xiàng)SDS-PAGE電泳，等點(diǎn)聚焦完畢,將IPG 膠條轉(zhuǎn)移至水化盤中,加入膠條平衡緩沖液Ⅰ (6 mol/L尿素,2% SDS,0.375 mol/L pH 8.8 Tris-HCl,20%甘油,0.02 g/ml DTT),在水平搖床上緩慢搖晃15 min,吸掉平衡緩沖液I,再加入膠條平衡緩沖液II(6 mol/L 尿素,2% SDS,0.375 mol/L pH 8.8 Tris-HCl,20% 甘油,0.025 g/ml碘乙酰胺),搖晃15 min；配置10%丙烯酰胺凝膠,電泳參數(shù):40 V/gel 30 min,150 V/gel 4 h,直至溴酚藍(lán)線達(dá)膠底線。電泳結(jié)束后，銀染著色；凝膠圖像分析用掃描儀獲取圖片,用PDquest 8.0對(duì)2 組凝膠圖像分別進(jìn)行背景消減,剪裁,匹配生成一致的凝膠圖像,2組間差異蛋白采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析,以變化倍數(shù)大于2.0倍或小于0.5倍且t檢驗(yàn)滿足P<0.05為標(biāo)準(zhǔn)選擇差異蛋白點(diǎn)用于質(zhì)譜分析[3]。

1.5蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定 將需鑒定的差異蛋白點(diǎn)從膠圖上切下,經(jīng)脫色、酶解等步驟后進(jìn)行MALDI-TOF-MS 分析。將一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)整合并使用GPS 3.6(Applied Biosystems)和Mascot 2.1(Matrix Science)對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和蛋白鑒定；搜索參數(shù)如下：數(shù)據(jù)庫(kù)為NCBInr；檢索物種為：human；酶為Trypsin；允許最大漏切位點(diǎn)為1；固定修飾為Carbamidomethyl(C)；可變修飾為Oxidation(M)和Acetyl (N-term)；MS tolerance 為100 ppm, MS/MS tolerance為：0.3Da.Protein score CI%大于95為鑒定成功。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用STATA 12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，符合正態(tài)分布的定量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1血清蛋白雙向電泳圖譜分析結(jié)果 通過(guò)PDquest分析軟件對(duì)易感組和非易感組2-DE電泳圖譜進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)和匹配對(duì)分析，共檢獲蛋白斑點(diǎn)1 120個(gè)，經(jīng)蛋白斑點(diǎn)的匹配和對(duì)比分析，可以發(fā)現(xiàn)兩組間蛋白表達(dá)圖譜明顯不同，主要表現(xiàn)為蛋白斑點(diǎn)灰度值的差異。易感組和非易感組差異表達(dá)(增高2倍或降低小于0.5倍且P<0.05)的蛋白斑點(diǎn)總數(shù)為37個(gè)(圖1),絕大多數(shù)集中于pH5～9 的偏酸性區(qū)域,相對(duì)分子量介于14.4～66.2 ku(圖2)。易感組這37個(gè)差異蛋白斑點(diǎn)灰度值均值為13 804.27±14 510.62，非易感組為79 820.32±139 333.2，易感組灰度值低于非易感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-2.758，P=0.009 1)。

圖1 坑道噪聲易感組與非易感組血清蛋白雙向電泳圖譜 a～c為易感組三次電泳結(jié)果,d～f為非易感組三次電泳結(jié)果

圖2 兩組坑道噪聲個(gè)體血清蛋白雙向電泳圖譜差異表達(dá)標(biāo)注圖 a為易感組,b為非易感組

2.2差異蛋白斑點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定結(jié)果 對(duì)37個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析鑒定，獲得28個(gè)蛋白斑點(diǎn)的肽指紋圖譜(圖3)。采用Mascot軟件與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中已知蛋白的標(biāo)準(zhǔn)肽指紋圖譜相比較,獲得各蛋白斑點(diǎn)的鑒定結(jié)果，其中易感組表達(dá)量比非易感組增加2倍以上的蛋白斑點(diǎn)22個(gè)，經(jīng)質(zhì)譜鑒定得到16個(gè)多肽；易感組比非易感組表達(dá)量減少0.5以上的蛋白斑點(diǎn)共15個(gè)，經(jīng)質(zhì)譜鑒定獲得12個(gè)多肽。排除高豐度蛋白，相同多肽選擇得匹配分值(mowse score)分大于66者，如：相同多肽匹配分值均大于66選擇得分高者，共獲得10個(gè)差異表達(dá)多肽(表1)，其中蛋白酶體亞基α-5、補(bǔ)體C4A、結(jié)合珠蛋白、載脂蛋白A-I和玻璃體結(jié)合蛋白在易感個(gè)體表達(dá)上調(diào)，而溶菌酶C、β-2糖蛋白- 1、色素上皮衍生因子、胰蛋白酶抑制劑重鏈H和甲狀腺素運(yùn)載蛋白表達(dá)下調(diào)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖3 差異蛋白斑點(diǎn)肽質(zhì)量指紋圖譜 經(jīng)4700型質(zhì)譜儀鑒定,以其中含量最高的多肽(1437.6)峰值強(qiáng)度13019為100%

3 討論

為了從分子水平探討NIHL的預(yù)防方法，目前研究者主要是對(duì)基因與NIHL易感性的關(guān)系進(jìn)行探討，其中單核苷酸檢測(cè)是篩選易感基因的主要方法[4]。由于研究對(duì)象的種族不同、研究方法不同、樣本量大小不同以及研究對(duì)象的職業(yè)不同、接觸的噪聲不同，不同的研究結(jié)果不完全一致，這也從一個(gè)方面反映了NIHL易感基因具有弱效性、異樣性或重疊效應(yīng)，增加了易感基因研究的難度。

差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究重在找出有意義的差異蛋白，可以同時(shí)發(fā)現(xiàn)多個(gè)疾病特異性標(biāo)記物，避免了用單一基因或數(shù)個(gè)基因的簡(jiǎn)單疊加檢測(cè)產(chǎn)生的敏感度和特異性的矛盾，對(duì)疾病診斷標(biāo)志物的篩選和診斷標(biāo)準(zhǔn)的制定具有重要意義。雙向電泳技術(shù)(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中分離蛋白質(zhì)樣品的關(guān)鍵技術(shù)，能夠在一塊凝膠上分離出上萬(wàn)個(gè)蛋白質(zhì)且所得蛋白質(zhì)組分純度>90%。在前期研究[2]基礎(chǔ)上，本研究利用2-DE加MODI-TOF-MS技術(shù)對(duì)我軍某部坑道作業(yè)官兵噪聲性聽(tīng)力損失易感個(gè)體和非易感個(gè)體各20例血清進(jìn)行雙向電泳研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)易感組差異表達(dá)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)灰度值較非易感組低(P<0.05)，進(jìn)一步對(duì)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行MALDL-TOF-MS和生物信息學(xué)分析鑒定,結(jié)合肽指紋圖譜在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中準(zhǔn)確匹配鑒定出差異表達(dá)的10種蛋白質(zhì)，這10種蛋白中，蛋白酶體表達(dá)上調(diào)最明顯。蛋白酶體(proteasome)廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，與泛素一起構(gòu)成主要降解細(xì)胞內(nèi)蛋白的泛素-蛋白酶體通路(ubiquitin-proteasome path, UPP)；蛋白酶體是由1個(gè)20S核心蛋白酶體和2個(gè)19S調(diào)控組成，20S蛋白酶體由α環(huán)和β環(huán)組成圓筒狀結(jié)構(gòu)，β環(huán)是蛋白酶體的活性位點(diǎn)，是水解反應(yīng)發(fā)生的場(chǎng)所，而α環(huán)通過(guò)阻止蛋白進(jìn)入水解空間控制底物與β環(huán)的接觸，從而調(diào)控β環(huán)的活性，因此α環(huán)對(duì)于蛋白酶體的功能發(fā)揮起重要作用。研究表明UPP存在于細(xì)胞代謝各個(gè)方面，此途徑調(diào)節(jié)異常或活性下降與許多疾病發(fā)生密切相關(guān)[5]。

表1 10個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)電泳圖譜分析鑒定結(jié)果

注：數(shù)據(jù)庫(kù)源自NCBI BLAST，評(píng)分大于66為蛋白質(zhì)匹配評(píng)價(jià)有顯著性意義(P<0.05)

蛋白酶體抑制劑可以抑制蛋白酶體活性，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和死亡過(guò)程，目前硼酸肽類蛋白酶抑制劑bortezomib已經(jīng)應(yīng)用于臨床腫瘤治療中，成為治療多發(fā)性骨髓瘤或惡性淋巴瘤的強(qiáng)效化療藥物[6]。最近發(fā)現(xiàn)有些患者使用蛋白酶體抑制劑后出現(xiàn)了感音神經(jīng)性聾，Lee等[7]對(duì)該副作用發(fā)生的原因進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，發(fā)現(xiàn)bortezomib可以抑制PST1(perxisome signal transmission)信號(hào)途徑，導(dǎo)致自由基在細(xì)胞內(nèi)大量聚集，最終可能與耳蝸毛細(xì)胞損傷和聽(tīng)力下降有關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了蛋白酶體參與氧化應(yīng)激反應(yīng)過(guò)程。UPP的一個(gè)重要生理功能就是參與細(xì)胞氧化應(yīng)激過(guò)程的調(diào)節(jié)，有研究發(fā)現(xiàn)在過(guò)氧化氫處理后，視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞系A(chǔ)RPE.19細(xì)胞內(nèi)蛋白酶體的表達(dá)明顯增加，表達(dá)部位主要位于細(xì)胞核內(nèi)和核膜周圍，這種細(xì)胞核內(nèi)蛋白酶體的過(guò)表達(dá)可能對(duì)保護(hù)細(xì)胞核免受氧化應(yīng)激的損傷有重要的作用[8]。以上研究說(shuō)明UPP可以通過(guò)選擇性降解錯(cuò)誤折疊或受損的蛋白質(zhì)，應(yīng)對(duì)不同環(huán)境的應(yīng)激所引起的細(xì)胞內(nèi)異常。

目前研究認(rèn)為強(qiáng)噪聲引起的氧化應(yīng)激是導(dǎo)致NIHL發(fā)生的主要原因，強(qiáng)噪聲可能引起大量自由基產(chǎn)生、誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡導(dǎo)致耳蝸組織損傷[9，10]。本研究結(jié)果顯示坑道噪聲易感個(gè)體與非易感者相比，血清中蛋白酶體α5亞單位表達(dá)顯著增加，提示其可能與NIHL的易感性有關(guān)，推測(cè)該蛋白可能通過(guò)以下途徑參與了NIHL的發(fā)生：①NIHL易感個(gè)體在坑道內(nèi)長(zhǎng)期慢性噪聲刺激作用下，可能更容易引起耳蝸內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生大量的過(guò)氧化氫等有害物質(zhì)，細(xì)胞內(nèi)代償機(jī)制引起蛋白酶體合成增加以應(yīng)對(duì)環(huán)境的變化，保護(hù)細(xì)胞核等重要結(jié)構(gòu)免受損傷；②在坑道噪聲的刺激下，蛋白酶體α5亞單位合成增加，使圓筒結(jié)構(gòu)兩端封閉更加嚴(yán)密，導(dǎo)致泛素化底物無(wú)法與β環(huán)的催化酶接觸，激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，或通過(guò)抑制過(guò)氧化物酶表達(dá)下降，使噪聲導(dǎo)致的氧化應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的自由基清除受阻，引起自由基堆積，通過(guò)損傷細(xì)胞DNA、使脂質(zhì)過(guò)氧化等反應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或死亡。但這些推測(cè)還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

此外，據(jù)報(bào)道，甲狀腺素運(yùn)載蛋白(transthyretin，TTR)、補(bǔ)體C4A、β-2糖蛋白-1(β-2GPI)、人類色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)、胰蛋白酶抑制劑五種蛋白與耳聾相關(guān)。TTR基因突變是導(dǎo)致常染色體顯性遺傳性系統(tǒng)性淀粉樣變性的主要原因，提示TTR與耳蝸的結(jié)構(gòu)和功能可能存在密切的關(guān)系[11]；本研究發(fā)現(xiàn)NIHL易感個(gè)體外周靜脈血中TTR蛋白表達(dá)比非易感個(gè)體明顯下調(diào)，說(shuō)明該基因與坑道NIHL易感性發(fā)生可能存在一定相關(guān)性。C4A等補(bǔ)體片段又被稱為過(guò)敏毒素，可以引起很強(qiáng)的炎癥反應(yīng)[12]，Harada[13]發(fā)現(xiàn)過(guò)敏毒素可導(dǎo)致豚鼠耳蝸血管紋囊性變、Reissner's膜塌陷、血管紋萎縮、迷路積水和耳蝸神經(jīng)變性，說(shuō)明過(guò)敏毒素可以導(dǎo)致耳蝸出現(xiàn)病理改變，這些改變與人類一些內(nèi)耳疾病的病理變化相同，提示包括過(guò)敏毒素在內(nèi)的炎性介質(zhì)與內(nèi)耳疾病發(fā)生密切相關(guān)；本研究結(jié)果顯示NIHL易感個(gè)體血清中補(bǔ)體C4A表達(dá)明顯升高，提示炎癥反應(yīng)在坑道噪聲NIHL易感性發(fā)生中可能也起一定的作用。雙向電泳研究結(jié)果顯示梅尼埃病患者血清中β2-GPI表達(dá)下調(diào)，提示β-2GPI與其他蛋白有可能成為梅尼埃病早期診斷的分子標(biāo)記物[14]；此外，研究者發(fā)現(xiàn)抗β-2GPI抗體可能與突發(fā)性聾患者的急性期狀況和預(yù)后有一定的相關(guān)性[15]；本研究結(jié)果顯示β-2GPI在坑道NIHL易感個(gè)體血清中表達(dá)降低，提示β2-GPI與坑道作業(yè)個(gè)體NIHL易感性可能相關(guān)。Ziff等[16]發(fā)現(xiàn)PEDF可能是耳硬化癥發(fā)病的共同致病基因，此外，PEDF在梅尼埃病患者血清中表達(dá)上調(diào)，提示PEDF與其他蛋白有可能成為梅尼埃病早期診斷的分子標(biāo)記物[14]；從本研究結(jié)果看PEDF在坑道NIHL易感個(gè)體血清中表達(dá)降低，提示PEDF與坑道作業(yè)個(gè)體NIHL易感性可能相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)絲氨酸和金屬蛋白家族蛋白酶抑制劑在分泌性中耳炎的發(fā)生中起重要作用，α1抗胰蛋白酶制劑直接注射入南美洲栗鼠聽(tīng)泡內(nèi)對(duì)其內(nèi)耳結(jié)構(gòu)及功能均未造成明顯影響，提示胰蛋白酶抑制劑作為分泌性中耳炎治療藥物安全性較高[17]；本研究發(fā)現(xiàn)胰蛋白酶抑制劑在坑道NIHL易感個(gè)體血清中表達(dá)降低，其與坑道作業(yè)個(gè)體NIHL易感性也可能相關(guān)。

蛋白酶體[8]、結(jié)合珠蛋白[18]、TTR[11]、ApoA-I[19]、β-2糖蛋白-1[20]、PEDF[21]、胰蛋白酶抑制劑[22]和補(bǔ)體C4A[23]均與氧化應(yīng)激的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，其中蛋白酶體、結(jié)合珠蛋白、ApoA-I表達(dá)上調(diào)可能是NIHL易感個(gè)體產(chǎn)生了應(yīng)對(duì)較強(qiáng)的氧化應(yīng)激反應(yīng)措施、試圖維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的表現(xiàn)，補(bǔ)體C4在氧化應(yīng)激時(shí)可能進(jìn)一步被激活，產(chǎn)生大量的C4A加重了聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)的損傷[23]，而TTR可能是在氧化應(yīng)激產(chǎn)生的炎癥作用下出現(xiàn)表達(dá)下調(diào)，β-2糖蛋白-1和PEDF在NIHL易感個(gè)體中保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷的作用可能被過(guò)強(qiáng)的氧化應(yīng)激反應(yīng)削弱，從而導(dǎo)致這兩種蛋白表達(dá)下調(diào)，胰蛋白酶抑制劑抑制炎癥反應(yīng)的作用也可能被NIHL易感個(gè)體中的氧化應(yīng)激反應(yīng)所損壞引起表達(dá)下調(diào)。因此，上述蛋白表達(dá)的增加或減少，可能通過(guò)不同程度加重NIHL易感個(gè)體氧化應(yīng)激反應(yīng)，使自由基生成增多，促進(jìn)NIHL的發(fā)生，從而可能成為坑道作業(yè)官兵NIHL易感個(gè)體血清特異性候選分子標(biāo)志物。

綜上所述，本研究結(jié)果為進(jìn)一步研究坑道作業(yè)人員NIHL易感性發(fā)生原因提供了線索，也為探討血清篩選NIHL易感個(gè)體的方法提供了參考。本研究的結(jié)果還需要使用ELISA等方法在坑道施工作業(yè)者中進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。

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