馬 科，張婭娟，李 潔，馮 博，詹明華

(河北北方學(xué)院 a.附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科； b.附屬第一醫(yī)院醫(yī)務(wù)處， 河北 張家口 075000)

新生兒細(xì)菌性感染是臨床常見疾病，新生兒受細(xì)菌微生物感染引起炎癥反應(yīng)，患兒可表現(xiàn)出發(fā)熱、腹瀉、肺炎、尿路感染等多種病癥，病情嚴(yán)重極易引發(fā)早期膿毒癥(early-onset sepsis，EOS)，導(dǎo)致新生兒發(fā)病率、死亡率升高[1-4]。目前膿毒癥(sepsis)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)為血培養(yǎng)，但血培養(yǎng)方法受諸多因素限制臨床診斷陽(yáng)性率低，檢驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)不能快速發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告。研究表明，低出生體重的膿毒癥患兒血培養(yǎng)陽(yáng)性率僅為1.9%，早產(chǎn)或經(jīng)抗生素治療后的患兒血培養(yǎng)常出現(xiàn)錯(cuò)誤的陰性結(jié)果[5-6]。同時(shí)新生兒自身血容量少，多次進(jìn)行血培養(yǎng)檢驗(yàn)會(huì)造成患兒失血過多，加重病情發(fā)展并引發(fā)其他病癥。雖然臨床已開展中性桿狀核粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(Band)、血漿降鈣素原(PCT)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、C反應(yīng)蛋白(CRP)等多種檢測(cè)項(xiàng)目，對(duì)于膿毒癥的早期診斷和監(jiān)測(cè)依然缺乏有效的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)。

白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類檢測(cè)為新生兒常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，在新生兒感染、膿毒癥疾病診斷中發(fā)揮著重要作用。白細(xì)胞通過調(diào)理吞噬作用清除體內(nèi)外來入侵的病原微生物，感染、膿毒癥可引起人體多個(gè)器官機(jī)能障礙并影響白細(xì)胞的吞噬作用，致使白細(xì)胞吞噬作用表現(xiàn)為增強(qiáng)、無變化或耐受，導(dǎo)致外周血中白細(xì)胞數(shù)量為升高、正常、甚至減低多種變化，使膿毒癥早期診斷治療面臨巨大挑戰(zhàn)[7-8]。近期研究發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)血液中未成熟粒細(xì)胞(immature granulocyte，IG)在炎癥、感染疾病的診斷中具有預(yù)示作用。正常健康人外周血中未成熟粒細(xì)胞(早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞、晚幼粒細(xì)胞)含量極低，人體受到病原微生物入侵時(shí)機(jī)體反應(yīng)性釋放未成熟粒細(xì)胞進(jìn)入外周血中。Emily L.Wiland等研究表明，成人和兒童靜脈血中未成熟粒細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)比通常小于1%，在以往研究中發(fā)現(xiàn)，成人未成熟粒細(xì)胞(IG#、IG%)的正常參考值范圍分別為：0～0.06(109/L)，0～0.8%，新生兒未成熟粒細(xì)胞正常參考值范圍未見報(bào)道[9-11]。本研究應(yīng)用Sysmex XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)新生兒外周血未成熟粒細(xì)胞含量(IG#)及百分比(IG%)，通過研究探討成人未成熟粒細(xì)胞正常參考值是否適用于新生兒，并分析未成熟粒細(xì)胞在新生兒細(xì)菌性感染疾病診斷中的作用，豐富實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法，為進(jìn)一步深入研究膿毒癥早期診斷提供檢驗(yàn)依據(jù)。

1 檢測(cè)方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2017年6月間在河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院出生的新生兒93例，所有新生兒胎齡≥37周，其中非感染新生兒50例為非感染組，非感染新生兒為超過預(yù)產(chǎn)期出生的嬰兒或低出生體重兒，其中男26例，女24例；根據(jù)臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室檢查并由臨床醫(yī)生確診的細(xì)菌性感染新生兒43例為感染組，其中男21例，女22例。新生兒家屬對(duì)研究檢測(cè)的項(xiàng)目知情同意，符合本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 儀器和試劑

檢測(cè)白細(xì)胞(WBC)、未成熟粒細(xì)胞(IG#、IG%)選用Sysmex XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析及原廠配套生產(chǎn)試劑、質(zhì)控品；檢測(cè)血漿降鈣素原(PCT)選用北京熱景生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的UPT上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑、質(zhì)控品；檢測(cè)C反應(yīng)蛋白(CRP)含量選用上海奧普生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的Ottoman C反應(yīng)蛋白檢測(cè)分析儀及配套試劑、質(zhì)控品。

1.3 標(biāo)本采集與檢測(cè)

新生兒出生48 h內(nèi)采集血液標(biāo)本，抽取2 mL靜脈血液標(biāo)本置于EDTA-K2抗凝管中檢測(cè)白細(xì)胞(WBC)、未成熟粒細(xì)胞(IG#、IG%)和C反應(yīng)蛋白(CRP)含量，抽取2ml靜脈血液標(biāo)本置于肝素鋰抗凝管中檢測(cè)血漿降鈣素原(PCT)，標(biāo)本采集后2 h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.4 檢測(cè)未成熟粒細(xì)胞在新生兒細(xì)菌性感染疾病診斷中的作用

選取非感染新生兒和細(xì)菌性感染新生兒檢測(cè)的白細(xì)胞(WBC)、未成熟粒細(xì)胞(IG#、IG%)、血漿降鈣素原(PCT)和C反應(yīng)蛋白(CRP)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，WBC、PCT、CRP參數(shù)數(shù)據(jù)使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析，IG#和IG%參數(shù)數(shù)據(jù)使用非參數(shù)檢驗(yàn)(kruskal-wallis H檢驗(yàn))分析，比較非感染新生兒和細(xì)菌性感染新生兒之間檢測(cè)指標(biāo)差異。運(yùn)用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC曲線)，計(jì)算IG#和IG%參數(shù)的曲線下面積(AUC),并分析檢測(cè)IG#和IG%診斷新生兒細(xì)菌性感染的靈敏度、特異性、約登指數(shù)等指標(biāo)，探討檢測(cè)未成熟粒細(xì)胞在新生兒細(xì)菌性感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值，分析成人未成熟粒細(xì)胞正常參考值是否適用于新生兒，為進(jìn)一步深入研究提供依據(jù)。

1.5 數(shù)據(jù)整理與統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 檢測(cè)結(jié)果

感染組和非感染組新生兒血液IG#、IG%、WBC、PCT和CRP水平比較：細(xì)菌性感染新生兒血液中WBC、PCT含量均顯著高于非感染新生兒(P<0.01)，IG#、IG%和CRP含量亦高于非感染新生兒(P<0.05)，如表1所示。感染組43例血液標(biāo)本檢測(cè)的IG#、IG%范圍分別為0.01～0.90(109/L)和0.2%～5.7%，四分位數(shù)為0.20[0.08,0.50](109/L)和1.3[0.7,3.2]%，非感染組50例血液標(biāo)本檢測(cè)的IG#、IG%范圍分別為0.00～0.23(109/L)和 0.0%～1.9%，四分位數(shù)為0.05[0.02,0.11](109/L)和0.5[0.3,1.0]%，如圖1所示。非感染組新生兒血液標(biāo)本IG#含量超過0.06(109/L)的比值為44%，IG%超過0.8%的比值為40%。

對(duì)感染組和非感染組新生兒血液IG#、IG%進(jìn)行受試者工作特征曲線分析，得出曲線下面積(area under the curve，AUC)分別為0.746、0.738，當(dāng)IG#和IG%參數(shù)cut-off值為0.12、1.15時(shí)，敏感度為0.70、0.63，特異性為0.78、0.84，約登指數(shù)為0.48、0.47，陽(yáng)性似然比為3.18、3.94，陰性似然比為0.38、0.44，如表2、圖2所示。

表1 非感染新生兒和細(xì)菌性感染新生兒檢測(cè)指標(biāo)

a) 與非感染組比較，P<0.01; b)與非感染組比較，P<0.05

表2 未成熟粒細(xì)胞IG#及IG%參數(shù)值

3 分析

細(xì)菌感染已成為新生兒重癥監(jiān)護(hù)室患兒發(fā)病率和死亡率升高的重要原因，尤其是對(duì)早期膿毒癥(EOS)的診斷，由于現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)存在診斷陽(yáng)性率低、特異性不高、檢驗(yàn)耗時(shí)較長(zhǎng)等因素限制，為臨床膿毒癥的診斷及后期治療帶來了不便。本研究選用Sysmex XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)新生兒外周血未成熟粒細(xì)胞含量(IG#)及百分比(IG%)，同時(shí)檢測(cè)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、C反應(yīng)蛋白(CRP)和血漿降鈣素原(PCT)炎癥檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行比較，對(duì)未成熟粒細(xì)胞(IG#、IG%)作為新的炎癥檢測(cè)指標(biāo)在新生兒細(xì)菌性感染診斷中發(fā)揮的作用進(jìn)行分析。未成熟粒細(xì)胞(immature granulocytes，IG)包含早幼粒細(xì)胞(promyelocytes)、中幼粒細(xì)胞(myelocytes)和晚幼粒細(xì)胞(metamyelocytes)，Sysmex XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀依據(jù)幼稚細(xì)胞膜表面含有的脂質(zhì)成分較少，同時(shí)細(xì)胞核內(nèi)核酸含量高的特性，可選擇性的區(qū)分未成熟粒細(xì)胞和成熟細(xì)胞，通過檢測(cè)血液中細(xì)胞的前向散射光(FSC)、側(cè)向散射光(SSC)、側(cè)向熒光(SFL)等參數(shù)來準(zhǔn)確計(jì)數(shù)未成熟粒細(xì)胞含量[12-15]。

感染組43例血液標(biāo)本檢測(cè)的IG#、IG%范圍分別為0.01～0.90(109/L)和 0.2%～5.7%，四分位數(shù)為0.20[0.08,0.50](109/L)和1.3[0.7,3.2]%，非感染組50例血液標(biāo)本檢測(cè)的IG#、IG%范圍分別為0.00～0.23(109/L)和 0.0%～1.9%，四分位數(shù)為0.05[0.02,0.11](109/L)和0.5[0.3,1.0]%。應(yīng)用ROC曲線評(píng)價(jià)檢測(cè)未成熟粒細(xì)胞(IG#、IG%)在新生兒細(xì)菌性感染疾病診斷中的作用，曲線下面積(AUC)分別為0.746、0.738，敏感度為0.70、0.63，特異性為0.78、0.84，約登指數(shù)為0.48、0.47，陽(yáng)性似然比為3.18、3.94，陰性似然比為0.38、0.44，表明未成熟粒細(xì)胞(IG#、IG%)作為炎癥指標(biāo)診斷新生兒細(xì)菌性感染疾病的敏感性、特異性較高。從非感染新生兒和細(xì)菌性感染新生兒血液中IG含量分布比較可知，非感染組新生兒血液標(biāo)本IG#含量超過0.06(109/L)的比值為44%，IG%超過0.8%的比值為40%，推測(cè)成人未成熟粒細(xì)胞(IG#、IG%)的正常參考值范圍[IG#:0～0.06(109/L),IG%:0～0.8%]不適用于新生兒。由于受研究中檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量的限制，還需要今后增加檢測(cè)病例數(shù)量，確立新生兒未成熟粒細(xì)胞的正常參考值。

4 結(jié)論

細(xì)菌性感染新生兒血液中未成熟粒細(xì)胞含量顯著高于未感染新生兒，成人未成熟粒細(xì)胞的正常參考值不適用于新生兒，檢測(cè)未成熟粒細(xì)胞可用于新生兒細(xì)菌性感染疾病的診斷。

：

[1] HEDEGAARD S S,WISBORG K,HVAS A M.Diagnostic utility of biomarkers for neonatal sepsis——a systematic review [J].Infect Dis (Lond),2015,47(3):117-124.

[2] SIMONSEN KA,ANDERSON-BERRY A L,DELAIR S F,et al.Early-onset neonatal sepsis[J].ClinMicrobiol Rev.,2014,27(1):21-47.

[3] EYESUS G T,MOGES F,ESHETIE S,et al.Bacterial etiologic agents causing neonatal sepsis and associated risk factors in Gondar,Northwest Ethiopia[J].BMC Pediatr,2017,17(1):137.

[4] ROEHRL M H,LANTZ D,SYLVESTER C,et al.Age-dependent reference ranges for automated assessment of immature granulocytes and clinical significance in an outpatient setting[J].Arch Pathol Lab Med.,2011,135(4):471-477.

[5] HORNIK C P,BENJAMIN D K,BECKER K C,et al.Use of the complete blood cell count in early-onset neonatal sepsis[J].Pediatr Infect Dis J.,2012,31(8):799-802.

[6] NEWMAN T B,PUOPOLO K M,WI S,et al.Interpreting complete blood counts soon after birth in newborns at risk for sepsis[J].Pediatrics,2010,126(5):903-909.

[7] WIRBELAUER J,THOMAS W,RIEGER L,et al.Intrauterine growth retardation in preterm infants ≤32 weeks of gestation is associated with low white blood cell counts[J].Am J Perinatol,2010,27(10):819-824.

[8] BERNSTEIN L H,RUCINSKI J.Measurement of granulocyte maturation may improve the early diagnosis of the septic state[J].ClinChem Lab Med.,2011,49(12):2089-2095.

[9] WILAND E L,SANDHAUS L M,GEORGIEVSKAYA Z,et al.Adult and child automated immature granulocyte norms are inappropriate for evaluating early-onset sepsis in newborns[J].ActaPaediatr,2014,103(5):494-497.

[10]JYOTHI P,BASAVARAJ M C,BASAVARAJ P V.Bacteriological profile of neonatal septicemia and antibiotic susceptibility pattern of the isolates[J].J Nat SciBiol Med.,2013,4(2):306-309.

[11]馬科,左路廣,馮博,等.成人外周血未成熟粒細(xì)胞正常參考值的建立與臨床應(yīng)用[J].廣東醫(yī)學(xué),2017,38(21):3280-3282.

[12]HA S O,PARK S H,PARK S H,et al.Fraction of immature granulocytes reflects severity but not mortality in sepsis[J].Scand J Clin Lab Invest,2015,75(1):36-43.

[13]PRO C I,YEALY D M,KELLUM J A,et al.A randomized trial of protocol-based care for early septic shock[J].N Engl J Med.,2014,370(18):1683-1693.

[14]KIM H,HUR M,CHOI S G,et al.Performance evaluation of Sysmex XN hematology analyzer in umbilical cord blood:a comparison study with Sysmex XE-2100[J].ClinChem Lab Med.,2014,52(12):1771-1779.

[15]OEHADIAN A,MICHELS M,DE MAST Q,et al.New parameters available on Sysmex XE-5000 hematology analyzers contribute to differentiating dengue from leptospirosis and enteric fever[J].Int J Lab Hematol,2015,37(6):861-868.