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(1.浙江農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，浙江農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物健康檢測(cè)中心，浙江杭州 311300；2.浙江省野生動(dòng)植物保護(hù)管理總站；3.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院)

牛結(jié)核病(TB)是重要的人獸共患慢性消耗性傳染病，被國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)定為B類(lèi)動(dòng)物疫病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部定為二類(lèi)動(dòng)物疫病。牛分枝桿菌為結(jié)核病主要病原之一，宿主譜廣泛，包括牛、人、鹿等多種溫血?jiǎng)游铮覄?dòng)物之間可相互交叉?zhèn)魅?。養(yǎng)殖梅花鹿為我國(guó)重要的特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，其主要產(chǎn)品為鹿茸。梅花鹿感染牛結(jié)核病后可引起產(chǎn)茸量明顯下降，患鹿還可導(dǎo)致健康鹿和人感染，嚴(yán)重威脅梅花鹿場(chǎng)生存，影響?zhàn)B殖經(jīng)濟(jì)效益，且威脅公共衛(wèi)生安全。

為探清浙江省養(yǎng)殖梅花鹿是否患有牛結(jié)核病，評(píng)估梅花鹿鹿茸及相關(guān)產(chǎn)品傳播牛結(jié)核病風(fēng)險(xiǎn)，本研究抽樣調(diào)查浙江省梅花鹿場(chǎng)和梅花鹿，采集割茸梅花鹿血清和全血，檢測(cè)并統(tǒng)計(jì)分析牛結(jié)核分枝桿菌抗體和核酸檢測(cè)陽(yáng)性率。

1 調(diào)研方法

1.1調(diào)查對(duì)象 綜合考慮梅花鹿養(yǎng)殖場(chǎng)所在地區(qū)、養(yǎng)殖量、養(yǎng)殖環(huán)境等，采用多層抽樣策略抽取寧波市、溫州市、湖州市、金華市等4個(gè)地區(qū)10家梅花鹿養(yǎng)殖場(chǎng)作為抽樣調(diào)查鹿場(chǎng)，采集成年雄鹿血清和全血163份。

1.2樣本采集 根據(jù)浙江省2016年梅花鹿總數(shù)，兼顧考慮梅花鹿場(chǎng)規(guī)模，計(jì)算采樣梅花鹿數(shù)量。當(dāng)被檢梅花鹿被麻醉并割取鹿茸時(shí)，接取鹿茸血1～2 mL制備血清，接取1～2 mL放入備有抗凝劑的試管中。同一梅花鹿同時(shí)采集全血和血清分別用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。樣本采集后，立即低溫保存送實(shí)驗(yàn)室備用檢測(cè)。

1.3血清牛結(jié)核桿菌抗體鑒定 采用浙江農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物健康檢測(cè)中心研制的免疫膠體金牛結(jié)核桿菌抗體速測(cè)卡檢測(cè)梅花鹿血清抗體，具體操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4全血牛結(jié)核分枝桿菌核酸鑒定 參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核病病原菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法(GBT 27639-2011)檢測(cè)梅花鹿全血牛結(jié)核分枝桿菌核酸。

1.5數(shù)據(jù)分析 整理數(shù)據(jù)，利用二項(xiàng)式分布分別計(jì)算梅花鹿牛結(jié)核桿菌核酸檢測(cè)陽(yáng)性率。

2 結(jié)果與分析

2.1樣本采集情況 從2016年浙江省200余家梅花鹿養(yǎng)殖場(chǎng)中，抽取寧波、溫州、湖州、金華4個(gè)地區(qū)8縣市區(qū)10家梅花鹿場(chǎng)(A-J)，采集170頭成年雄鹿血清和全血(全血中缺失7份，故后續(xù)實(shí)驗(yàn)為163份)。參加該項(xiàng)調(diào)查的梅花鹿場(chǎng)分布和各場(chǎng)隨機(jī)抽取梅花鹿數(shù)量見(jiàn)圖1。

圖1 調(diào)查鹿場(chǎng)分布和采集樣本數(shù)量

2.2成年雄性梅花鹿牛結(jié)核桿菌抗體陽(yáng)性率 免疫膠體金試紙條鑒定雄性成年鹿血液中牛結(jié)核桿菌抗體，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可見(jiàn)，浙江省梅花鹿的170份血清中，有8份牛結(jié)核抗體陽(yáng)性，檢測(cè)陽(yáng)性率為4.7%(95%CI=2.1%-9.1%)。50%(5/10)參加調(diào)查的梅花鹿場(chǎng)牛結(jié)核桿菌抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，5家陽(yáng)性鹿場(chǎng)來(lái)自寧波的B場(chǎng)、金華的G、H、I和J場(chǎng)，牛結(jié)核抗體陽(yáng)性率分別為7.1%(95%CI=0.2%-33.9%)、4.4%(0.1%-21.9%)、14.3%(95%CI=1.8%-42.8%)、12.5%(95%CI=1.6%-38.3%)和12.5%(95%CI=1.6%-38.3%)。其余5場(chǎng)抽檢結(jié)果均為陰性。

表1 2016年浙江省不同地區(qū)和養(yǎng)殖場(chǎng)成年雄鹿牛結(jié)核抗體陽(yáng)性率

2.3成年雄性梅花鹿牛結(jié)核桿菌核酸陽(yáng)性率 根據(jù)熒光定量測(cè)定梅花鹿全血牛結(jié)核分枝桿菌核酸結(jié)果，統(tǒng)計(jì)分析獲得梅花鹿牛結(jié)核桿菌核酸檢測(cè)陽(yáng)性率，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可見(jiàn)，金華地區(qū)J場(chǎng)出現(xiàn)1例牛結(jié)核桿菌核酸陽(yáng)性鹿，陽(yáng)性率為6.3%(0.2%-30.2%)，金華地區(qū)檢測(cè)陽(yáng)性流行率為1.47%(1/68，95%CI 為0.4%-7.9%)；寧波、溫州、湖州和金華其他鹿場(chǎng)牛結(jié)核桿菌核酸均為陰性。

2016年浙江省成年雄性梅花鹿牛結(jié)核桿菌核酸整體檢測(cè)陽(yáng)性流行率為0.6%(1/163)，95%CI為0.0%-3.4%。結(jié)果表明，浙江地區(qū)成年雄性梅花鹿未見(jiàn)攜帶牛結(jié)核桿菌(95%CI=0.0%-3.4%)，但不排除個(gè)別梅花鹿患有牛結(jié)核。

表2 2016年浙江省不同梅花鹿養(yǎng)殖場(chǎng)成年雄鹿牛結(jié)核核酸檢測(cè)陽(yáng)性率

3 小結(jié)與討論

牛結(jié)核病一度是極具破壞力和危害性的人獸共患傳染病，雖然國(guó)內(nèi)外積極采取防控措施，但該病仍未得到完全凈化。野生動(dòng)物(包括養(yǎng)殖野生動(dòng)物)與人類(lèi)的密切接觸，是導(dǎo)致該疾病相互傳播的主要途徑之一。目前，我國(guó)梅花鹿抗體和病原流行病學(xué)調(diào)查相關(guān)數(shù)據(jù)較少。本研究首次對(duì)浙江省梅花鹿牛結(jié)核病進(jìn)行了血清學(xué)和病原核酸流行率調(diào)查，為探清浙江省養(yǎng)殖梅花鹿是否患有牛結(jié)核病提供了參考依據(jù)。

調(diào)查結(jié)果顯示，2016年浙江省梅花鹿牛結(jié)核血清抗體檢測(cè)陽(yáng)性率為4.7%(8/170，95%CI=2.1%-9.1%)，低于Kang等(2016)[1]采用ELISA方法檢測(cè)韓國(guó)馴養(yǎng)加拿大馬鹿血清獲得的結(jié)核桿菌抗體水平。Kang等報(bào)道馬鹿群結(jié)核流行率達(dá)50%-80%，平均流行率為67.7%(21/31)。本研究顯示浙江省梅花鹿牛結(jié)核病原核酸整體陽(yáng)性率為0.6%(1/163，95%CI=0.0%-3.4%)，該流行率低于Madeira等(2017)[2]對(duì)2011-2014年葡萄牙狩獵期間31個(gè)高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)進(jìn)行野生馬鹿等動(dòng)物的牛結(jié)核病原檢測(cè)流行率5.95%(222/3733，95% CI=5.21%-6.75%)，且浙江省數(shù)據(jù)表明無(wú)證據(jù)證實(shí)浙江省梅花鹿場(chǎng)攜帶牛結(jié)核桿菌。

根據(jù)以上檢測(cè)結(jié)果，表明浙江省梅花鹿牛結(jié)核桿菌抗體和病原核酸檢測(cè)流行率均低于已有國(guó)外同類(lèi)流行率報(bào)道，這可能是因地域差異，也可能是動(dòng)物品種或檢測(cè)方法不同所致[3-6]。

綜上所述，2016年筆者對(duì)浙江省梅花鹿進(jìn)行牛結(jié)核流行病學(xué)所作調(diào)查結(jié)果表明，割茸期間成年雄性梅花鹿不攜帶牛結(jié)核桿菌，該調(diào)查階段鹿茸及其相關(guān)產(chǎn)品攜帶和傳播牛結(jié)核桿菌的風(fēng)險(xiǎn)極低。但是，該地區(qū)曾經(jīng)有梅花鹿感染過(guò)牛結(jié)核病，甚至不排除個(gè)別梅花鹿仍然患有牛結(jié)核病的可能。因此，今后仍需加強(qiáng)梅花鹿日常疫病監(jiān)測(cè)工作，及時(shí)發(fā)現(xiàn)患病個(gè)體、迅速處置，建立健全梅花鹿檢疫規(guī)程和綜合防控措施[7-9]。

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