張美娟

摘 要 基于超高效液相色譜四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜（UPLCQTOF MS/MS）技術(shù)，建立了高分辨質(zhì)譜非信息依賴數(shù)據(jù)采集后靶向篩查策略（HRMSDIAPost targeted screening strategy），并成功應(yīng)用于不明原因食物中毒患者嘔吐物及糞便樣本中的有毒化合物篩查鑒定。樣品經(jīng)溶劑提取與凈化后，采用5 mmol/L甲酸銨水（A）和0.1 %甲酸乙腈（B）作為流動(dòng)相，在反相色譜柱上進(jìn)行梯度洗脫。采用MSE模式對(duì)樣品進(jìn)行質(zhì)譜（ESI+）全信息采集，經(jīng)UNIFI篩查軟件進(jìn)行譜峰識(shí)別、譜庫檢索等數(shù)據(jù)分析，初篩出疑似有毒化合物α茄堿，隨后結(jié)合其化合物特征及體內(nèi)代謝行為，采用后靶向篩查策略在兩種樣品中均鑒定出相關(guān)化合物（包括水解產(chǎn)物及代謝產(chǎn)物等），如α卡茄堿與其水解產(chǎn)物β卡茄堿、γ茄堿/卡茄堿以及共同代謝產(chǎn)物茄啶。采用單點(diǎn)校正法測(cè)得兩種樣品中α茄堿含量均約為0.1 mg/kg，采用峰面積歸一化法得到兩種樣品中龍葵素類似物總量分別約為0.5 mg/kg與0.6 mg/kg。本研究建立的高分辨質(zhì)譜快速篩查策略可為不明原因食物中毒的未知毒物快速篩查鑒定提供有效的技術(shù)手段。

關(guān)鍵詞 后靶向篩查； 未知有毒化合物； 高效液相色譜四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜； 生物醫(yī)學(xué)樣品； 龍葵素

1 引 言

近年來，我國食物中毒事件時(shí)有發(fā)生，嚴(yán)重危害著廣大民眾的身心健康[1，2]。按照致病因子計(jì)，常見食物中毒可分為微生物性（包括細(xì)菌、真菌和病毒等）、化學(xué)性、有毒動(dòng)植物及不明原因中毒四類。 2015年我國食物中毒事件共發(fā)生169 起，中毒5926人、死亡121人； 其中化學(xué)性毒物中毒事件23起。中毒597人、死亡22人， 化學(xué)性毒物中毒死亡人數(shù)占全年毒物中毒死亡數(shù)的18.2%[2]。因此，發(fā)展快速高效的未知有毒化合物篩查鑒定技術(shù)與策略，有助于食物中毒相關(guān)的法醫(yī)學(xué)鑒定以及臨床快速診斷和救治。

色譜質(zhì)譜技術(shù)是目前有毒有害化合物篩查鑒定以及定量分析的主要技術(shù)手段之一，在與氣相色譜（GC）、液相色譜（LC）等快速分離技術(shù)聯(lián)用時(shí)，以飛行時(shí)間質(zhì)譜（Time of flightmass spectrometry，TOFMS）為代表的高分辨質(zhì)譜，具有較高的質(zhì)量分辨率及較快的掃描速度，使每個(gè)色譜峰均能采集到足夠的數(shù)據(jù)點(diǎn)和化合物信息量，為快速樣品篩查鑒定提供了有效的技術(shù)手段，目前已被成功應(yīng)用于食品及生物樣品中目標(biāo)化合物分析及未知物篩查。例如，López等[3]運(yùn)用UPLCQTOFMS/MS開發(fā)了11種水果蔬菜中的農(nóng)藥殘留篩查方法，Ojanper等[4]運(yùn)用LCQTOFMS/MS建立了尿液中藥物的篩查方法。

質(zhì)譜篩查鑒定技術(shù)包括信息依賴型數(shù)據(jù)采集模式與非信息依賴型數(shù)據(jù)采集模式（Data independent acquisition，DIA）等，其中DIA模式是指不需對(duì)樣品中的化合物進(jìn)行預(yù)選擇，而是采集所有從色譜中分離出的化合物質(zhì)譜信息[5]?；赒TOF MS/MS技術(shù)的MSE全信息串聯(lián)質(zhì)譜采集模式，僅需運(yùn)行一次LCMS/MS分析，便可同時(shí)獲得高質(zhì)量精度的母離子及其碎片離子信息，從而極大地提高了篩查效率和準(zhǔn)確度，目前成功應(yīng)用于水樣中的藥物及其代謝產(chǎn)物、舊檔案紙張中真菌毒素、廢水中的有機(jī)污染物等未知化合物的篩查鑒定中 [6～8]。但是，低豐度含量或低質(zhì)譜響應(yīng)的化合物的信號(hào)在上述MSE模式中的貢獻(xiàn)較低，常易產(chǎn)生漏判。因此，后靶向篩查策略（Posttarget screening method或postrun target screening）[9，10]便成為其很好的補(bǔ)充。該策略是指在采集DIA全信息之后，依據(jù)質(zhì)荷比，從總離子流中手動(dòng)靶向提取某種或某類化合物的色譜及質(zhì)譜峰； 或經(jīng)合適算法及參數(shù)設(shè)定后進(jìn)行譜峰的自動(dòng)識(shí)別與提取，再行通過譜庫檢索，篩選并鎖定疑似化合物，在無化合物對(duì)照品參考確證時(shí)，亦稱可疑性篩查（Suspect screening）[11]。

本研究采用高分辨質(zhì)譜非信息依賴數(shù)據(jù)采集后靶向篩查策略（HRMSDIAPost targeted screening strategy），在有效提高疑似待測(cè)化合物篩查鑒定辨識(shí)度的同時(shí)，結(jié)合臨床中毒癥狀和疑似化合物的體內(nèi)代謝及轉(zhuǎn)化性質(zhì)等，通過手動(dòng)靶向提取了疑似待測(cè)化合物及其相關(guān)化合物（如水解產(chǎn)物及代謝產(chǎn)物）的質(zhì)譜信息，再經(jīng)綜合分析、對(duì)照參考品的質(zhì)譜比對(duì)確證，成功應(yīng)用于一起不明原因食物中毒案例的篩查鑒定。鑒定的龍葵素類有毒化合物，是一類常見于馬鈴薯植株及其塊莖中的有毒糖苷生物堿。當(dāng)馬鈴薯由于貯存不當(dāng)而變綠或發(fā)芽時(shí)，會(huì)產(chǎn)生大量的龍葵素，當(dāng)龍葵素的含量超過200 mg/kg時(shí)，人服用后則可能導(dǎo)致中毒甚至死亡[12]，已報(bào)道的人口服最低中毒劑量（TDLo）為2.8 mg/kg[13]。龍葵素主要引起溶血作用、抗膽堿酯酶抑制作用、消化道中毒癥狀和神經(jīng)癥狀，毒物檢測(cè)結(jié)果與中毒患者所出現(xiàn)臨床癥狀相吻合，故推斷本例食物中毒事件是由一系列龍葵素有毒生物堿引起的。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

超高效液相色譜儀ACQUITY UPLC、四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀Xevo G2 QTOF MS/MS（美國Waters公司）； Dionex UltiMate 3000液相色譜儀、Q Exactive四極桿靜電場(chǎng)軌道阱串聯(lián)質(zhì)譜儀QOrbitrap MS/MS（美國ThermoFisher公司）； RVC 233離心濃縮儀（德國Christ公司）； R200D電子天平（德國Sartorius公司）； Sigma 3k30型高速冷凍離心機(jī)（美國SigmaAldrich公司）； MilliQ A10型超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

α茄堿（αSolanine，純度99%，北京百靈威科技有限公司）； 亮氨酸腦啡肽乙酸鹽水合物（Leucine Enkephalin acetate salt hydrate，美國SigmaAldrich公司）； 甲醇、乙腈（色譜純，韓國Duksan公司）； 甲酸（分析純，北京百靈威科技有限公司）； 甲酸銨（分析純，美國Acros Organics公司）； 實(shí)驗(yàn)用水為MillQ系統(tǒng)制備的超純水（電阻率為18.2 MΩ·cm）； 濾膜（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）。endprint

樣品來源： 3名中毒人員在外就餐后當(dāng)晚便出現(xiàn)明顯身體不適，隨即入院就醫(yī)，其中一名兒童死亡，另外兩名成人患者表現(xiàn)為頭暈、惡心、嘔吐、腹瀉等疑似食物中毒癥狀，中毒原因不明、待查。取其中一名患者的嘔吐物及糞便進(jìn)行毒物篩查分析。

2.2 實(shí)驗(yàn)條件

2.2.1 UPLCQTOF MS/MS條件 色譜柱Waters ACQUITY UPLC HSS C18（150 mm × 2.1 mm，1.8 μm）； 柱溫50℃； 流動(dòng)相A為5 mmol/L甲酸銨溶液（pH 3），流動(dòng)相B為含0.1%甲酸的乙腈。洗脫程序： 0～0.5 min，13% B； 0.5～10 min，13%～50% B； 10～10.75 min，50%～95% B； 10.75～12.25 min，95% B。流速為0.4 mL/min； 樣品進(jìn)樣量為5 μL。

離子源溫度： 150℃； 脫溶劑氣溫度： 400℃； 脫溶劑氣流速： 800 L/h； 錐孔氣流速： 20 L/h； 毛細(xì)管電壓： 0.8 kV； 錐孔電壓： 25 eV； 電離模式： ESI正離子模式； 掃描模式： 分辨率模式，一級(jí)質(zhì)譜分辨率為10000 FWHM； 采集模式： MSE模式； 掃描范圍： m/z 50～1000； 掃描時(shí)間： 0.1 s； 碰撞能量： 低碰撞能量為6 eV，高碰撞能量為10～40 eV； 校正液： 亮氨酸腦啡肽（m/z 556.2771）。

UNIFI軟件參數(shù)設(shè)置： 高能量下響應(yīng)閾值： 5，低能量下響應(yīng)閾值： 250； 背景噪音過濾強(qiáng)度： 中； 保留時(shí)間最大偏差： 0.3 min； 精確質(zhì)量偏差閾值： 10 ppm； 可識(shí)別的化合物加合峰形式包括+H、+Na、+K、+NH4峰。實(shí)時(shí)校正液亮氨酸腦啡肽控制值為m/z 556.2771。

2.2.2 LCQOrbitrap MS/MS條件 色譜柱Waters ACQUITY UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）； 柱溫40℃； 流動(dòng)相A為5 mmol/L甲酸銨0.1%甲酸溶液，流動(dòng)相B為乙腈溶液； 洗脫程序： 0～0.5 min，1% B； 0.5～10 min，1%～90% B； 10～12 min，90% B。流速為0.25 mL/min； 進(jìn)樣量為5 μL。

離子源溫度： 320℃； 毛細(xì)管電壓： 3.5 kV； 輔助氣溫度： 320℃； 鞘氣流速： 10 L/h； 輔助氣流速： 30 L/h。采集模式： 平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Parallel reaction monitoring，PRM）； 碰撞能量CE 45 eV； 采集范圍為50～1000 Da； 電離模式： ESI正離子模式； 一級(jí)質(zhì)譜分辨率為35000 FWHM。

2.3 實(shí)驗(yàn)步驟

2.3.1 樣品前處理 嘔吐物： 取已干燥的嘔吐物樣品10 g，加入50 mL水，振蕩混勻，取4 mL于離心管中，14000 r/min高速離心10 min后取上清液， 過0.22 μm濾膜，離心濃縮至干，進(jìn)樣前加入200 μL 5%（V/V）甲醇復(fù)溶。

糞便： 取糞便樣品2 g于離心管中，加入5 mL水，振蕩混勻，14000 r/min高速離心10 min后取上清液，加入2 mL甲醇與10 mL乙腈，渦旋混勻，14000 r/min高速離心10 min后取上清液，離心濃縮至干，進(jìn)樣前加入200 μL 5%（V/V）甲醇復(fù)溶。

2.3.2 有毒化合物質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫的建立 數(shù)據(jù)采集在UPLCQTOF MS上進(jìn)行，使用MassLynx軟件（ver.4.1，美國Waters公司），篩查則使用質(zhì)譜定性分析處理軟件UNIFI（ver.1.8，美國Waters公司），其中配置了商業(yè)化的法醫(yī)毒物數(shù)據(jù)庫，涵蓋麻醉藥品、精神藥品、生物毒素（包括動(dòng)植物毒素及微生物毒素）及獸藥等1200余種常見法醫(yī)毒物。在該商業(yè)化數(shù)據(jù)庫的基礎(chǔ)上，本課題組添加了有毒生物堿、海洋生物毒素、常見非法添加化合物（降壓藥、糖皮質(zhì)激素）等300余種化合物。

2.3.3 未知有毒化合物的UPLCQTOF MS/MS篩查分析 對(duì)兩種處理后的樣品參考通用的UPLC全梯度洗脫條件進(jìn)行分離分析[14]，同時(shí)在MSE模式下采集質(zhì)譜全信息，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入到UNIFI 1.8（美國Waters公司）中進(jìn)行自動(dòng)譜峰識(shí)別、譜庫檢索等數(shù)據(jù)分析，篩選出疑似候選化合物后手動(dòng)提取其相關(guān)水解產(chǎn)物及代謝產(chǎn)物的譜峰。

2.3.4 LCQOrbitrap MS/MS數(shù)據(jù)采集 毒生物堿α茄堿參考品的1μg/mL 乙腈溶液，在LCQOrbitrap MS平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Parallel reaction monitoring，PRM）模式下，將嘔吐物及糞便提取樣品中的疑似色譜峰與參考品的色譜保留時(shí)間及二級(jí)質(zhì)譜譜圖進(jìn)行比較，并根據(jù)兩者的色譜峰面積，按照單點(diǎn)校正法，對(duì)樣品中化合物濃度進(jìn)行半定量分析。

3 結(jié)果與討論

3.1 樣品前處理方法選擇

有毒化合物種類繁多、理化性質(zhì)差異較大，不明原因食物中毒篩查鑒定的難點(diǎn)及特點(diǎn)在于： 需要獲得全面、準(zhǔn)確、可靠的信息，且無遺漏、無丟失地快速提取、判定目標(biāo)化合物。因此，在未知有毒化合物的篩查工作中，需要開發(fā)多組分、低損失、快速簡(jiǎn)單的前處理方法[15]。目前針對(duì)復(fù)雜生物基質(zhì)樣品，常見的前處理方法包括液液萃取（Liquidliquid extraction， LLE）、固相萃?。⊿olid phase extraction， SPE）以及QuEChERS（Quick， easy， cheap， effective， rugged， safe）等。其中，SPE對(duì)化合物的選擇性較強(qiáng)，較適用于靶向化合物的篩查； QuEChERS則常用于食品[16]及環(huán)境基質(zhì)樣品[17]的前處理中，所需樣品量較高，達(dá)到滿意的回收率時(shí)往往需要優(yōu)化提取條件，故存在遺漏疑似化合物的可能，在生物樣品中的應(yīng)用有限。本研究則采用操作簡(jiǎn)單、普適性高的LLE方法[18]，采用水、甲醇、乙腈等作提取溶劑，可在較寬的范圍內(nèi)保留極性和弱極性化合物，并獲得較高的回收率； 另外，甲醇、乙腈可沉淀生物樣本中的蛋白質(zhì)等大分子，從而降低基質(zhì)干擾，有利于后續(xù)的LCMS篩查分析。endprint

3.2 MSE數(shù)據(jù)采集

本研究首先采用MSE全信息串聯(lián)質(zhì)譜模式，在預(yù)設(shè)定的低碰撞能掃描和高碰撞能掃描之間快速切換，從而同時(shí)完成兩個(gè)掃描功能的DIA數(shù)據(jù)采集。在低能量掃描下，易得到相關(guān)的分子離子峰及其加合峰信息，在高能量掃描中，得到相關(guān)碎片峰的信息，并通過母離子與其碎片離子具有相同色譜行為的特性，進(jìn)行母子離子的關(guān)聯(lián)歸屬，將所有保留時(shí)間和峰形相同的色譜峰的離子組合成一張質(zhì)譜圖，其中包含了豐富的化合物結(jié)構(gòu)信息[19]。

針對(duì)嘔吐物及糞便提取樣品的總離子流色譜圖如圖1所示，可獲得全部化合物的質(zhì)譜信息[18]，但有效的化合物信息提取較為困難。如在嘔吐物樣品的總離子流圖（圖1A和B）中， 未觀察到信噪比高的色譜峰； 在糞便樣品的總離子流圖（圖1C和D）中，雖然呈現(xiàn)具有一定信噪比的峰，但經(jīng)與空白樣品比對(duì)及譜圖解析，為膽紅素、膽汁酸和增塑劑等，系內(nèi)源性化合物與背景干擾。這也反映了生物基質(zhì)復(fù)雜、毒性化合物濃度一般較低、其信號(hào)經(jīng)常被噪音掩蓋的特點(diǎn)。

3.3 自動(dòng)譜峰識(shí)別與譜庫檢索

針對(duì)DIA模式下的總離子流色譜圖，可以通過選擇合適算法及參數(shù)，進(jìn)行譜峰的自動(dòng)識(shí)別及處理。目前，已開發(fā)應(yīng)用的HRMS商業(yè)化檢索軟件及譜庫有MassHunter（Agilent）[20，21]、 PeakView（AB SCIEX）[22，23]、 TargetAnalysis（Bruker）[24]等。本研究采用UNIFI軟件篩查平臺(tái)，通過峰提取、母子離子峰精確質(zhì)量對(duì)比、保留時(shí)間、化合物加合方式等內(nèi)置算法，將化合物的相關(guān)質(zhì)譜信息從海量的質(zhì)譜數(shù)據(jù)中提取出來，并進(jìn)行譜庫檢索。將MassLynx采集的MSE數(shù)據(jù)導(dǎo)入到UNIFI軟件中，按照2.3.2項(xiàng)建立的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行搜索、匹配，結(jié)果見表1。

由表1可知，在兩份樣品中除分別檢出色氨酸、酪氨酸及色胺等蛋白質(zhì)水解及代謝產(chǎn)物外，均檢出了有毒生物堿α茄堿，其精確質(zhì)量及保留時(shí)間與參考品及數(shù)據(jù)庫信息均符合（±5 ppm）。考慮到茄堿中毒特征為嘔吐、腹瀉以及劇烈的腹痛等[25]，與患者癥狀較為相似，從而初步確定α茄堿可能是導(dǎo)致死亡的疑似毒物，并進(jìn)一步對(duì)α茄堿所屬的龍葵素類有毒化合物開展后靶向篩查鑒定。

3.4 龍葵素類有毒化合物的后靶向篩查鑒定

α茄堿系常存在于馬鈴薯等茄科植株及其塊莖中的有毒糖苷類龍葵素生物堿之一，主要分為茄堿和卡茄堿兩種，均以茄啶為糖苷配基而構(gòu)成，具體包括α茄堿與其部分水解產(chǎn)物β茄堿和γ茄堿，α卡茄堿及其部分水解產(chǎn)物β卡茄堿和γ卡茄堿等[25]。α卡茄堿是龍葵素中主要的致毒成分，其毒效為α茄堿的3～10倍[26]，考慮到兩者的體內(nèi)水解代謝途徑，推測(cè)嘔吐物及糞便樣品中可能同時(shí)存在α茄堿及其水解產(chǎn)物、α卡茄堿及其水解產(chǎn)物及共同水解產(chǎn)物茄啶。因此，進(jìn)一步針對(duì)龍葵素類化合物進(jìn)行了后靶向篩查。在原始譜圖中針對(duì)性地提取了下述化合物的分子離子峰： α茄堿m/z 868.5058、 β茄堿m/z 722.4479、 γ茄堿m/z 560.3951、 α卡茄堿m/z 852.5109、 β卡茄堿m/z 706.4530、 γ卡茄堿m/z 560.3951、 茄啶m/z 398.3423，其提取離子流色譜圖如圖2所示。結(jié)果顯示，嘔吐物中檢出α茄堿、 α卡茄堿、 β卡茄堿、 γ茄堿/卡茄堿和茄啶； 在糞便中檢出α茄堿、 α卡茄堿、 β卡茄堿和茄啶。其中，γ茄堿與γ卡茄堿互為同分異構(gòu)體，且裂解行為相似，本文未對(duì)其做區(qū)分鑒定。根據(jù)化合物的體內(nèi)代謝途徑，樣品中測(cè)得各化合物的合理相關(guān)性分析將有助于中毒原因的確證。在糞便樣品中并未檢測(cè)到γ茄堿/卡茄堿，可能原因是γ茄堿/卡茄堿不穩(wěn)定，在腸道內(nèi)全部轉(zhuǎn)化成茄啶。Nishie等[27]在大鼠口服茄堿毒性實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，茄堿可通過尿液和糞便快速排泄，且茄堿在胃腸道中被水解成毒性較弱的茄啶。

3.5 驗(yàn)證與半定量分析

在LCQOrbitrap MS/MS PRM模式下，選擇5種化合物的母離子質(zhì)荷比（α茄堿m/z 868.5058、 α卡茄堿m/z 852.5109、 β卡茄堿m/z 706.4530、 γ茄堿/卡茄堿m/z 560.3951和m/z 398.3423）作為母離子獲取二級(jí)質(zhì)譜圖及碎片離子信息，結(jié)果表明，在兩個(gè)樣品中均檢出疑似化合物，與QTOF結(jié)果相符，驗(yàn)證了這些化合物存在。通過對(duì)上述化合物的二級(jí)質(zhì)譜碎片離子進(jìn)行歸屬，上述化合物的結(jié)構(gòu)及二級(jí)質(zhì)譜圖、 裂解途徑見圖3。同時(shí)，采集α茄堿參考品的高分辨質(zhì)譜圖，與樣品中測(cè)得的α茄堿的二級(jí)子離子圖譜進(jìn)行相似度比對(duì)（圖4），經(jīng)NIST軟件的計(jì)算相似度結(jié)果為93.5%。

采用單點(diǎn)校正法，通過PRM模式對(duì)嘔吐物與糞便中測(cè)得的α茄堿進(jìn)行定量，以m/z 868.5058離子峰的峰面積進(jìn)行半定量，計(jì)算出兩個(gè)樣品的濃度均約為0.1 mg/kg。Wang等[28]針對(duì)熒光基團(tuán)標(biāo)記的N糖基化修飾蛋白，研究其PNGase F酶酶解片段的相關(guān)質(zhì)譜行為，發(fā)現(xiàn)在反相C18色譜柱酸性流動(dòng)相條件下分析N糖基化肽段時(shí)，其質(zhì)譜響應(yīng)僅與標(biāo)簽上的熒光基團(tuán)相關(guān)，而與糖基的糖型和鏈長(zhǎng)無關(guān)，即糖基對(duì)質(zhì)譜響應(yīng)的貢獻(xiàn)可以忽略。因此，考慮到系列龍葵素化合物僅存在糖基數(shù)目或類型的差異，主要結(jié)構(gòu)單元基團(tuán)均為茄啶（m/z 398.3423），故可以假設(shè)龍葵素類化合物的質(zhì)譜響應(yīng)貢獻(xiàn)主要來自茄啶基團(tuán)。因此，以茄堿為外標(biāo)，通過歸一化法對(duì)茄堿及其水解產(chǎn)物進(jìn)行半定量測(cè)定，測(cè)得嘔吐物與糞便樣本中龍葵素總量分別約為0.5和0.6 mg/kg。

4 結(jié) 論

采用高分辨質(zhì)譜非信息依賴數(shù)據(jù)采集后靶向篩查策略，成功地將本方法應(yīng)用于不明原因食物中毒致死案件的毒物鑒定。高分辨質(zhì)譜的非信息依賴型數(shù)據(jù)采集可提供盡可能多的化合物海量數(shù)據(jù)信息，多模式內(nèi)置算法使大容量譜庫檢索轉(zhuǎn)換為有效的譜峰識(shí)別，從而實(shí)現(xiàn)快速鎖定疑似毒物； 基于代謝途徑的毒性相關(guān)化合物后靶向篩查策略，成功實(shí)現(xiàn)了不明原因食物中毒的毒物鑒定。鑒定的龍葵素類有毒化合物，是一類常見于馬鈴薯植株及其塊莖中的有毒糖苷生物堿，毒物檢測(cè)結(jié)果與中毒患者所出現(xiàn)臨床癥狀相吻合，故推斷本例食物中毒事件是由一系列龍葵素有毒生物堿引起的。本實(shí)驗(yàn)所建立的基于高分辨質(zhì)譜快速篩查策略可為不明原因食物中毒的未知毒物快速篩查鑒定提供有效的技術(shù)支持。endprint

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Abstract Based on ultrahighperformance liquid chromatographyquadrupole/time of flight mass spectrometry （UPLCQTOF MS/MS）， a post targeted screening strategy using high resolution mass spectrometry under data independent acquisition was established， and successfully applied to screen and identify unknown toxicants in food poisoning patients′ vomit and feces. After solvent extraction， the samples were separated and analyzed on a reversedphase C18 column using a gradient elution program of 5 mmol/L ammonium formate and 0.1% formic acid aqueous solution （A） and 0.1% formic acid in acetonitrile solution （B）. Allions MS/MS information of samples was obtained using QTOF MS （ESI+） in MSE mode， followed by peak recognition and library searching using the UNIFI Scientific Information System， as a result， suspected toxic compound αsolanine was primarily detected. Furthermore， the related chemicals including hydrolysates and metabolites were identified in both samples based on posttargeted screening strategy， such as αchaconine， βchaconine， γsolanine/chaconine and solanidine. The concentration of αsolanine in both samples was approximately 0.1 mg/kg by onepoint calibration method， the total amount of solanine analogues in two samples was about 0.5 mg/kg and 0.6 mg/kg respectively through normalization of peak area. The high resolution mass spectrometry screening strategy established here could provide efficient screening method for rapid detection and identification of toxicants in unknown food poisoning.

Keywords Post targeted screening； Unknown toxicants； Biomedical samples； Solanine； Ultrahighperformance liquid chromatographyquadrupoletime of flight mass spectrometry

（Received 3 August 2017； accepted 26 September 2017）endprint