涂玉蓉 李美娣 陳素珍 武 力＊

（1.廣州華農(nóng)大實(shí)驗(yàn)獸藥有限公司 廣州 510642；2.廣東省現(xiàn)代養(yǎng)豬數(shù)據(jù)化工程技術(shù)研究中心 廣州 510642）

近年來，舌尖上的安全受到了嚴(yán)峻的威脅以及關(guān)注，將畜禽養(yǎng)殖過程中抗生素使用的規(guī)范性推到風(fēng)口浪尖上，一些國家已經(jīng)或正在研究禁止在畜禽養(yǎng)殖過程中使用抗生素，我國也出臺了各種政策以加大抗生素使用規(guī)范性的監(jiān)管力度。隨著環(huán)保要求越來越嚴(yán)及2016年“禁抗令”的出臺[1]，預(yù)示著尋找開發(fā)新型、綠色、安全抗生素，杜絕抗生素濫用已經(jīng)是不可回避的事實(shí)，尋找抗生素的替代物已成為研究的熱點(diǎn)。

植物精油屬于天然、綠色、無殘留物質(zhì)，具有來源廣泛、抗菌譜廣、作用迅速、不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)。牛至油已被我國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)作為一種可長期添加的藥物飼料添加劑[2]，從而說明天然植物提取物有望替代抗生物，具有較大的市場潛力。本研究選取香芹酚、肉桂醛和麝香草酚對大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株44102、大腸桿菌野毒株O78、雞白痢沙門氏菌進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，并且對精油之間復(fù)配的協(xié)同作用進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 供試菌種與培養(yǎng)基 大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株44102、大腸桿菌野毒株O78、雞白痢沙門氏菌為廣州華農(nóng)大實(shí)驗(yàn)獸藥有限公司研發(fā)中心保存菌種。麥康凱營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基、MH肉湯為廣東環(huán)凱生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 主要儀器 超凈工作臺：蘇州凈化設(shè)備有限公司；立式壓力蒸汽滅菌器：江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱：上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠；生化培養(yǎng)箱：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；8道F3移液器：美國熱電；酶標(biāo)儀：賽默飛世爾（上海）儀器有限公司；微型振蕩器：上海滬西分析儀器廠有限公司。

1.3 菌懸液制備 將4℃斜面保存的大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株44102、大腸桿菌野毒株O78、雞白痢沙門氏菌活化，劃線接種于新鮮的麥康凱培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24 h，挑取單個菌落接種于MH肉湯中，37℃培養(yǎng)24 h，以MH肉湯校正菌液濃度為106CFU/mL，備用。

1.4 藥液制備 以乙醇：水溶液（1:1）為溶劑，將香芹酚、肉桂醛和麝香草酚配制成濃度為5 000 ug/mL 的母液[3]。

1.5 植物精油單成分的最小抑菌濃度 采用96孔板微量肉湯稀釋法[4]，測定香芹酚、肉桂醛和麝香草酚單成分對大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株44102、大腸桿菌野毒株O78、雞白痢沙門氏菌的最小抑菌濃度（MIC）。

1.6 復(fù)配植物精油聯(lián)合抑菌效果測定 植物精油的復(fù)配試驗(yàn)選擇棋盤稀釋法[5]，將香芹酚、肉桂醛和麝香草酚兩兩之間按1:1配比混合，母液中2種成分的濃度均為2 500 ug/mL。用96孔板微量肉湯稀釋法測定復(fù)配精油對3種菌的抑菌濃度（MIC）。以分級抑菌濃度指數(shù)(FIC)作為聯(lián)合抗菌試驗(yàn)效果的判定依據(jù)[5]，F(xiàn)IC的計算公式：FIC=MICA組分聯(lián)合/MICA組分單用+MICB組分聯(lián)合/MICB組分單用。

FIC指數(shù)的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：FIC≤0.5時為協(xié)同作用（S）；0.5＜FIC≤1 時為相加作用（A）；1＜FIC＜4 時為無關(guān)作用（I）；FIC≥4 時為拮抗作用（AN）。

2 結(jié)果與分析

2.1 植物精油單成分的最小抑菌濃度 采用96孔板微量肉湯稀釋法測定香芹酚、肉桂醛和麝香草酚單成分對大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株44102、大腸桿菌野毒株O78、雞白痢沙門氏菌的最小抑菌濃度（MIC），結(jié)果見表1。

表1 植物精油單成分的最小抑菌濃度

3種植物精油對3種菌都表現(xiàn)出了抑菌作用，最小抑菌濃度在156.25 ug/mL～312.5 ug/mL。3種精油對雞白痢沙門氏菌的抑菌效果都較好，最小抑菌濃度為156.25 ug/mL，對大腸桿菌野毒O78的抑菌效果稍差，最小抑菌濃度都為312.5 ug/mL。

2.2 復(fù)配植物精油聯(lián)合抑菌效果測定 采用棋盤稀釋法將香芹酚、肉桂醛和麝香草酚兩兩之間按1:1配比混合，測定復(fù)配精油對3種菌的最小抑菌濃度（MIC）。以分級抑菌濃度指數(shù)(FIC)作為聯(lián)合抗菌試驗(yàn)效果的判定依據(jù)。復(fù)配植物精油聯(lián)合抑菌結(jié)果見表2。

表2 復(fù)配植物精油對供試菌的FIC指數(shù)

香芹酚與肉桂醛復(fù)配對3種菌都表現(xiàn)出相加作用（0.5＜FIC≤1）；香芹酚與麝香草酚復(fù)配對大腸桿菌44102、雞白痢沙門氏菌表現(xiàn)出相加作用 （0.5＜FIC≤1），而對大腸桿菌野毒O78表現(xiàn)出協(xié)同作用（FIC≤0.5）；肉桂醛與麝香草酚復(fù)配對大腸桿菌44102、大腸桿菌野毒O78表現(xiàn)出相加作用 （0.5＜FIC≤1），而對雞白痢沙門氏菌為無關(guān)作用 （1＜FIC＜4）。

3 討論與結(jié)論

本文研究了香芹酚、肉桂醛和麝香草酚對大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株44102、大腸桿菌野毒株O78、雞白痢沙門氏菌的抑菌作用。采用微量稀釋法測定各成分對3種菌的最小抑菌濃度，各成分都對大腸桿菌、沙門氏菌有抑制效果。對植物精油之間的相互作用也進(jìn)行了研究，香芹酚、肉桂醛和麝香草酚兩兩復(fù)配后各成分的最小抑制濃度有所降低，表明它們之間存在協(xié)同增效的作用。

[1]吳志剛,羅敏婷,魏浩.8種植物精油對腸道常見微生物體外抑菌效果的研究[J].現(xiàn)代食品科技,2017,33(6):133-141.

[2]韓飛,李瑾,潘悄悄,等.新型天然植物抗生素牛至油的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志,2015,24(3):303-308.

[3]王帆,楊靜東,王春梅,等.復(fù)配植物源殺菌劑的開發(fā)研究[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報,2015,22(2):87-89.

[4]Cosention S,Tuberoso C I G,Pisano B,et al.In-vitro antimicrobial activity and chemical composition of Sardnian Thymus essential oils [J].Letters in Applied Microbiology,1999,29:130-135.

[5]趙豐麗,李潔榮,楊健秀.黃皮葉不同溶劑提取物抗過敏活性研究[J].食品工業(yè)科技,2009,30(1):110-112.