潘慧青，張炎達(dá)*，李珠金，施少華，趙軍

(1.福建貝迪藥業(yè)有限公司，福建寧德 355300；2.福建寧德貝迪生物科技有限公司，福建寧德 355300；3.鄭州貝迪生物科技有限公司，鄭州 450000；4. 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福州 350013)

隨著國(guó)內(nèi)規(guī)模集約化畜禽養(yǎng)殖模式的發(fā)展，動(dòng)物飼養(yǎng)密度在增加，養(yǎng)殖環(huán)節(jié)技術(shù)水平逐步提高，社會(huì)對(duì)飼用動(dòng)物的免疫保健與食品安全的認(rèn)識(shí)也進(jìn)一步深化。畜禽養(yǎng)殖業(yè)是動(dòng)物源性食品安全的源頭，不提倡使用高殘留、毒性大和易產(chǎn)生耐藥性的化藥[1]，推行具有免疫保健作用的中藥是畜禽健康養(yǎng)殖的重要措施之一。中草藥制劑在養(yǎng)殖中對(duì)動(dòng)物機(jī)體免疫機(jī)能的調(diào)節(jié)是其防疫保健功能的一個(gè)重要作用機(jī)理，中藥對(duì)免疫器官的發(fā)育、免疫細(xì)胞活性等方面均有積極促進(jìn)作用，進(jìn)而提高機(jī)體的非特異性免疫力[2,3]。目前在動(dòng)物養(yǎng)殖中起免疫保健應(yīng)用的中草藥主要集中在黃芪、靈芝等中藥[4]，鮮有補(bǔ)益中藥太子參的研究報(bào)道，僅有少量太子參莖葉多糖在仔豬免疫指標(biāo)試驗(yàn)的報(bào)道[5,6]。

太子參為石竹科植物孩兒參的干燥塊根，始載于清代，以柘榮太子參較優(yōu)，其藥性平和，生津潤(rùn)肺、益氣健脾、保健增免，類似人參之效，太子參藥用成分富含氨基酸、多糖、皂苷、環(huán)肽、黃酮和揮發(fā)物等組分[7]，現(xiàn)代藥理結(jié)果表明太子參還具有降血糖、抗氧化、抗皮炎、增強(qiáng)免疫力及改善肺功能等作用[8-10]，因此太子參在未來動(dòng)物養(yǎng)殖保健類產(chǎn)品的開發(fā)具有較大潛力，本課題組已相繼開展了太子參的新獸藥與新型功能飼料添加劑的開發(fā)工作。

薈萃分析[11]又稱Meta分析（Meta-analysis），是以同一目的的多項(xiàng)既往研究為對(duì)象，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)多個(gè)研究結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)、定量和客觀的綜合分析，對(duì)效應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行準(zhǔn)確和科學(xué)的評(píng)估，并能解釋不同研究結(jié)果間的異質(zhì)性，以達(dá)到增大樣本量、提高檢驗(yàn)效能的效果，被認(rèn)為是當(dāng)前最高級(jí)的證據(jù)，為支持臨床決策提供有力依據(jù)。近年來該方法在畜牧領(lǐng)域中已有報(bào)道[12]，但經(jīng)文獻(xiàn)檢索還未發(fā)現(xiàn)太子參在免疫損傷保護(hù)藥理方面的薈萃分析論文。筆者擬利用薈萃分析方法循證評(píng)價(jià)太子參用于免疫損傷動(dòng)物機(jī)體免疫保護(hù)作用的有效性，為中藥太子參在動(dòng)物免疫保健方面的藥理研究及應(yīng)用提供更有價(jià)值的參考依據(jù)。

1. 材料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索策略、篩選與資料提取

計(jì)算機(jī)檢索采用國(guó)內(nèi)數(shù)據(jù)庫（CNKI、萬方、維普）和國(guó)外數(shù)據(jù)庫（Web of Science、PubMed、Elsevier），同時(shí)配合檢索百度學(xué)術(shù)、谷歌學(xué)術(shù)。按照“PICOS”策略檢索[13]，中文檢索詞為“太子參”、“孩兒參”、“免疫”、“免疫功能”、“免疫損傷”、“小鼠”，英文檢索詞為“Pseudostellaria Heterophylla”、“Pseudostellaria Heterophylla(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm.”、“Taizishen”、“Immune”，所有檢索采取主題檢索和自由檢索相結(jié)合的方式，并手工檢索納入研究的參考文獻(xiàn)。主動(dòng)與本搜索到文獻(xiàn)的通訊作者咨詢未發(fā)表或疑惑性的數(shù)據(jù)。檢索時(shí)限均為從建庫起至2018年9月20日。

利用EndNote X6軟件管理初步篩選到的文獻(xiàn)進(jìn)行歸類、整理和去重。由2名研究者篩選文獻(xiàn)并提取資料，通過閱讀標(biāo)題和摘要進(jìn)行初篩，再通過閱讀全文進(jìn)行復(fù)篩，根據(jù)設(shè)計(jì)的“文獻(xiàn)資料提取表”納入文獻(xiàn)中的基本信息，包括第一作者、發(fā)表年份、免疫損傷模型對(duì)照組信息、干預(yù)試驗(yàn)組信息、總例數(shù)、小鼠品種、指標(biāo)等，對(duì)產(chǎn)生分歧時(shí)則由第三名研究者介入討論協(xié)調(diào)解決。

1.2 文獻(xiàn)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)

①原始材料為已公開發(fā)表的論文文獻(xiàn)；②研究對(duì)象為免疫損傷的試驗(yàn)小鼠；③研究對(duì)象中人為制造的免疫損傷小鼠模型，并分別設(shè)立健康對(duì)照組與太子參干預(yù)試驗(yàn)組；④太子參還包括“太子參提取物”、“粗提物”、“多糖”、“（總）皂苷”等；⑤原始文獻(xiàn)內(nèi)容中必須含有至少一個(gè)的表達(dá)免疫力的指標(biāo)，且指標(biāo)數(shù)值表達(dá)方式為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”，單位一致或可換算一致；⑥各文獻(xiàn)研究方法相似，文獻(xiàn)中模型藥劑為環(huán)磷酰胺、氫化可的松等化藥。

1.2.2 文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn)

①研究對(duì)象非試驗(yàn)小鼠或是正常健康小鼠；②文章資料交代不全，數(shù)據(jù)信息不全或會(huì)議記錄、商業(yè)評(píng)價(jià)性文獻(xiàn)以及綜述類文獻(xiàn)；③重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)；④文獻(xiàn)數(shù)據(jù)僅用平均數(shù)或直接讀數(shù)標(biāo)示的；⑤文獻(xiàn)中干預(yù)物質(zhì)使用了太子參植株其他部位的藥材或其提取物；⑥原始文獻(xiàn)內(nèi)容中未設(shè)置對(duì)照組；⑦原始文獻(xiàn)中未有體現(xiàn)免疫力指標(biāo)的；⑧原始文獻(xiàn)內(nèi)容中試驗(yàn)組干預(yù)措施為太子參聯(lián)同其他藥劑的；⑧專利類文獻(xiàn)數(shù)據(jù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

1.3.1 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Cochrane協(xié)作網(wǎng)提供的RevMan 5.3軟件進(jìn)行已錄入數(shù)據(jù)的Meta分析，效應(yīng)量為連續(xù)性變量資料，計(jì)算各效應(yīng)量的95%可信區(qū) 間 (confidence interval，CI)，以P＜0. 05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。若納入研究之間無異質(zhì)性，即P≥0. 05，I2＜50%時(shí)，采用固定效應(yīng)（Fixed effect model，F(xiàn)EM）模型分析，反之存在異質(zhì)性（P＜0. 05，I2＞50%），分析其異質(zhì)性來源，采用隨機(jī)效應(yīng)（Random effect model，REM）模型進(jìn)行分析。并分析其異質(zhì)性來源及納入研究的資料分布形態(tài)，當(dāng)結(jié)果以縱坐標(biāo)呈倒置的漏斗狀對(duì)稱分布時(shí)，提示沒有發(fā)表偏倚，而呈非對(duì)稱性分布，說明存在發(fā)表偏倚。Meta分析數(shù)據(jù)數(shù)值表達(dá)方式均為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”，單位一致。

1.3.2 敏感性分析

文章在采用RevMan 5.3軟件進(jìn)行薈萃分析后通過變換分析模型再次進(jìn)行分析比較，考察所得結(jié)果是否與原模型分析結(jié)果的一致性進(jìn)而來判斷試驗(yàn)分析中的Meta分析結(jié)果的穩(wěn)定性[14]。

1.3.3 安全性分析

文章中選擇已納入薈萃分析的文獻(xiàn)進(jìn)行文獻(xiàn)內(nèi)容詳細(xì)閱讀，匯總太子參干預(yù)試驗(yàn)組中是否有其不良反應(yīng)的記錄，數(shù)據(jù)匯總計(jì)量評(píng)價(jià)。

2. 結(jié)果與分析

2.1 文獻(xiàn)檢索與篩選結(jié)果

按照檢索策略共得到文獻(xiàn)21篇，中文16篇，英文5篇，去除相同發(fā)表的文獻(xiàn)9篇，閱讀文獻(xiàn)題目及摘要而排除非臨床研究、非對(duì)照試驗(yàn)、會(huì)議記錄、綜述的文獻(xiàn)5篇，進(jìn)一步閱讀全文排除不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)2篇，最終納入5篇文獻(xiàn)，且全為國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)，發(fā)表時(shí)間為1996—2017年，文獻(xiàn)類型包括期刊和學(xué)位論文，所納入文獻(xiàn)的基本信息情況見表1。

2.2 對(duì)免疫損傷小鼠免疫器官胸腺重量的Meta分析結(jié)果

有5篇文獻(xiàn)報(bào)道了太子參對(duì)免疫損傷小鼠免疫器官胸腺重量的影響結(jié)果，各研究間異質(zhì)性I2=92%＞50%，存在明顯異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)（REM）模型進(jìn)行合并分析。Meta分析結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，置信區(qū)間落在無效線的右側(cè)，表明太子參干預(yù)試驗(yàn)組的效應(yīng)量大于對(duì)照組，且試驗(yàn)組可顯著增加免疫損傷小鼠的胸腺重量 [MD=6.23，95% CI（3.28，9.18），P ＜0.01]，改善胸腺重量向正常值恢復(fù)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如圖1所示。

2.3 對(duì)免疫損傷小鼠免疫器官脾臟重量的Meta分析結(jié)果

有5篇文獻(xiàn)報(bào)道了太子參對(duì)免疫損傷小鼠免疫器官脾臟重量的影響結(jié)果，各研究間異質(zhì)性I2=97%＞50%，存在明顯異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)（REM）模型進(jìn)行合并分析。Meta分析結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，置信區(qū)間落在無效線的右側(cè)，干預(yù)試驗(yàn)組的效應(yīng)量大于對(duì)照組，表明試驗(yàn)組可顯著增加小鼠脾臟重量 [MD=8.50，95% CI（1.70，15.29），P＜0.01]，利于脾臟重量向正常值恢復(fù)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如圖2所示。

表1 納入文獻(xiàn)的基本特征信息表

圖1 太子參對(duì)免疫損傷小鼠免疫器官胸腺重量的Meta分析結(jié)果

圖2 太子參對(duì)免疫損傷小鼠免疫器官脾臟重量的Meta分析結(jié)果

圖3 太子參對(duì)免疫損傷小鼠免疫細(xì)胞吞噬活性指數(shù)的Meta分析結(jié)果

2.4 對(duì)免疫損傷小鼠免疫細(xì)胞吞噬活性指數(shù)的Meta分析結(jié)果

有4篇文獻(xiàn)報(bào)道了太子參對(duì)免疫損傷小鼠免疫細(xì)胞吞噬活性指數(shù)的影響結(jié)果，各研究間異質(zhì)性I2=75%＞50%，存在異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)（REM）模型進(jìn)行合并分析。Meta分析結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，置信區(qū)間落在無效線的右側(cè)，表明太子參提取物干預(yù)試驗(yàn)組的效應(yīng)量大于對(duì)照組，能夠顯著提高小鼠免疫細(xì)胞的吞噬活性指數(shù) [MD=1.55，95% CI（0.89，2.22），P＜0.01]，積極提高了免疫細(xì)胞的吞噬活性，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如圖3所示。

2.6 敏感性分析結(jié)果

薈萃分析結(jié)果處理后，通過變換分析模型再次進(jìn)行分析比較，所得統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表2）與原模型分析結(jié)果一致，表明本論文中上述Meta分析結(jié)果比較穩(wěn)定，在一定程度上能反映文章中合并結(jié)果的可靠性，本結(jié)論相對(duì)可信。

2.7 太子參提取物安全性分析結(jié)果

文中薈萃分析共納入文獻(xiàn)5篇，發(fā)表時(shí)間為1996—2017年，所有試驗(yàn)研究中均未見太子參對(duì)免疫損傷小鼠干預(yù)后造成不良反應(yīng)的記錄，提示太子參在免疫損傷小鼠的機(jī)體免疫功能保護(hù)恢復(fù)作用過程中具有相對(duì)較好的安全性。

表2 敏感性分析結(jié)果

圖4 干預(yù)試驗(yàn)組與對(duì)照組指標(biāo)比較的倒漏斗圖分析

2.8 發(fā)表偏倚分析結(jié)果

倒置漏斗圖在薈萃分析中可以判斷所納入的文獻(xiàn)是否存在發(fā)表偏倚性，漏斗圖結(jié)構(gòu)對(duì)稱表明文獻(xiàn)的發(fā)表偏倚性較小或無偏倚性，圖形不對(duì)稱則存在一定的偏倚性。

本文研究中，免疫損傷小鼠分析指標(biāo)免疫器官胸腺重量（圖4-A）、免疫細(xì)胞吞噬活性指數(shù)（圖4-C）文獻(xiàn)大體在漏斗圖內(nèi)，但免疫器官脾臟重量（圖5-B）有4篇文獻(xiàn)在漏斗圖外。其中，圖4-A、B對(duì)稱性相對(duì)較差，表明此研究有一定的發(fā)表偏倚性；圖4-C圖形相對(duì)對(duì)稱，表明此研究的發(fā)表偏倚性相對(duì)不明顯。

3. 討論

文章中，作者利用薈萃分析方法循證評(píng)價(jià)太子參用于免疫損傷動(dòng)物機(jī)體免疫保護(hù)作用的有效性，以期為中藥太子參在動(dòng)物免疫保健方面的藥理研究及應(yīng)用提供更有價(jià)值的參考依據(jù)。然而，薈萃分析是以已有文獻(xiàn)為基礎(chǔ)，結(jié)論可靠性和文獻(xiàn)偏倚性受納入文獻(xiàn)質(zhì)量的影響較大[20]，本文雖然進(jìn)行了關(guān)鍵詞與自由詞對(duì)國(guó)內(nèi)外數(shù)據(jù)庫進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，但納入薈萃分析的5篇文獻(xiàn)皆來于國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)，文獻(xiàn)量小，且部分文獻(xiàn)存在RCT樣本量較小的情況，另外本文納入文獻(xiàn)中的太子參的組分類別、濃度不是完全一致，免疫抑制劑的造模方法、時(shí)間與劑量不完全一致，小鼠的品種、飼喂環(huán)境、日齡、體重和試驗(yàn)時(shí)間也不是完全一樣，上述因素均能導(dǎo)致本文分析結(jié)果的異質(zhì)性和偏倚性。最后造成文中文獻(xiàn)發(fā)表偏倚的還包括納入分析的文獻(xiàn)結(jié)果均為陽性，缺少陰性研究，這與目前國(guó)內(nèi)學(xué)者不愿發(fā)表陰性結(jié)果的論文有關(guān)。本研究中偏倚分析結(jié)果顯示所納入文獻(xiàn)存在一定的發(fā)表偏倚性，但敏感分析結(jié)果顯示Meta分析結(jié)果較為穩(wěn)定，具有一定的可靠性和參考價(jià)值，未來仍需有待大規(guī)模RCT試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。日后建議國(guó)內(nèi)專家學(xué)者能夠規(guī)范統(tǒng)一畜牧領(lǐng)域內(nèi)RCT實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格按照RCT試驗(yàn)方案執(zhí)行，為薈萃分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和科學(xué)有效性提供支持。

本文系統(tǒng)評(píng)價(jià)了太子參用于免疫損傷動(dòng)物（小鼠）機(jī)體免疫保護(hù)作用的有效性，結(jié)果表明太子參可顯著促進(jìn)免疫損傷小鼠的免疫功能改善與恢復(fù)，促進(jìn)受損免疫器官胸腺、脾臟的正常趨勢(shì)發(fā)育和增強(qiáng)免疫細(xì)胞免疫活性，起到一定的免疫保護(hù)作用。免疫器官的發(fā)育情況與免疫能力呈正相關(guān)，與模型對(duì)照組相比，太子參試驗(yàn)組能夠顯著增加胸腺和脾臟指數(shù)增加，王家葵等[15]報(bào)道太子參還能促進(jìn)免疫損傷小鼠的免疫器官核酸合成；嚴(yán)勝澤[17]報(bào)道太子參劑量組之間胸腺、脾臟指數(shù)含量隨太子參劑量的增加而增加，這些作用與人參卻有一定的相似之處。同時(shí)，嚴(yán)勝澤[17]報(bào)道太子參可顯著提高免疫損傷小鼠的吞噬活性指數(shù)，且隨太子參劑量的增加有升高的趨勢(shì)，并能顯著增加免疫損傷小鼠血清中IL-2、IL-6、IFN-γ含量。另外，動(dòng)物腸道除了具有消化和營(yíng)養(yǎng)吸收功能外還被現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)定為機(jī)體最大“免疫器官”，研究發(fā)現(xiàn)免疫抑制劑能夠破壞機(jī)體正常腸道生理結(jié)構(gòu)，如粘膜損傷[21]，還能改變正常的腸道菌群[22]，嚴(yán)勝澤等[21]研究發(fā)現(xiàn)太子參多糖能夠在一定程度上頡頏CY所致的腸道黏膜免疫損傷，并可提高SIgA等免疫效應(yīng)因子的含量，這也為太子參制劑在新養(yǎng)殖時(shí)代下的免疫保健臨床應(yīng)用提供了一種新思路。上述提示太子參可用于動(dòng)物免疫功能的增強(qiáng)與保護(hù)作用，也提示太子參在開發(fā)新型免疫保健類獸藥或功能型飼料添加劑方向存在較大潛力。

4. 結(jié)論

本系統(tǒng)評(píng)價(jià)通過對(duì)5篇文獻(xiàn)14項(xiàng)臨床對(duì)照試驗(yàn)的薈萃分析，Meta分析結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定可靠，結(jié)果表明太子參可顯著利于免疫損傷小鼠的機(jī)體免疫功能的恢復(fù)，促進(jìn)動(dòng)物免疫器官發(fā)育和免疫活性的增強(qiáng)，免疫保護(hù)作用安全有效。為中藥太子參在動(dòng)物免疫保健方面的藥理研究及應(yīng)用提供更有價(jià)值的參考依據(jù)，也提示太子參在開發(fā)新型免疫保健類獸藥或功能型飼料添加劑方向存在較大潛力。█