袁曉娟,樊章梅

（1.黔東南州動(dòng)物預(yù)防控制中心 556000；2.黔東南州飼草飼料站 556000）

牛支原體是牛支原體肺炎的病原，我國(guó)在2008年首次在患肺炎的犢牛肺臟中分離到該病原，之后又相繼在中國(guó)各個(gè)省、自治區(qū)引進(jìn)犢牛中分離出該病原。本文就對(duì)牛支原體研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，為牛支原體病的相關(guān)研究及防治提供參考依據(jù)。

1 病原學(xué)特征

支原體是最小的微生物，繁殖方式主要為二分裂繁殖，無細(xì)胞壁，具有高度多形性。細(xì)胞膜中膽固醇的作用是為了保持細(xì)胞膜的完整性，兩性霉素B、皂素等能作用于膽固醇，引起支原體死亡。一般說來，決定肺炎支原體是否致病的是一種特殊的末端結(jié)構(gòu)，鼻腔和乳腺是牛支原體常在的部位。

該病原在pH7.6～8.0生長(zhǎng)，需要在培養(yǎng)基中加入10%～20%的馬血清以滿足膽固醇，并穩(wěn)定細(xì)胞膜。支原體在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的生長(zhǎng)曲線，也會(huì)經(jīng)過4個(gè)時(shí)期，與細(xì)菌的區(qū)別是其繁殖速度較細(xì)菌慢，生長(zhǎng)的量也較少，且液體培養(yǎng)基不渾濁。大多數(shù)兼性厭氧，在含瓊脂較少的固體培養(yǎng)基上要孵育48～72h后，出現(xiàn)典型的“荷包蛋樣”菌落。牛支原體在避免陽(yáng)光直射條件下可存活數(shù)周，在牛乳、海綿、水、糞、棉、秸桿、木和不銹鋼等均能存活。

2 流行病學(xué)

牛支原體自然感染的潛伏期比較難確定。有的牛在接觸感染牛2周后發(fā)病。特別是1周齡的犢牛最易感染支原體肺炎，而且病情急劇，癥狀明顯，發(fā)病急，病情重，死亡率較高。感染牛支原體肺炎的牛有可能成為一個(gè)潛在的傳染源，因?yàn)樗诳祻?fù)后的幾個(gè)月或幾年仍可攜帶病原體。該病的傳播方式包括呼吸道傳播、接觸感染、垂直傳播等，公牛配種或人工授精（使用其凍精）都會(huì)導(dǎo)致牛支原體的感染[1]。由于牛支原體引起的奶牛支原體肺炎所導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)損失非常巨大，而目前我國(guó)尚無較詳細(xì)的奶牛牛支原體病流行病學(xué)資料。2008～2016年，張建華等[2]對(duì)國(guó)內(nèi)12個(gè)地區(qū)30個(gè)規(guī)模化奶牛場(chǎng)進(jìn)行了牛支原體感染情況調(diào)查及分析得出，國(guó)內(nèi)大部分奶牛場(chǎng)存在牛支原體感染，牛支原體感染可能成為危害國(guó)內(nèi)規(guī)?；膛?chǎng)奶牛健康的主要疫病之一。牛支原體肺炎的誘發(fā)因素多與應(yīng)激因素的刺激有關(guān)，如運(yùn)輸刺激、飼養(yǎng)管理、環(huán)境改變等。目前，在我國(guó)牛支原體肺炎一般伴隨著其他病原體的繼發(fā)感染或混合感染，使機(jī)體抵抗力下降更為迅速。

3 診斷方法概況

目前，確診方法主要為病原體的分離鑒定、血清學(xué)試驗(yàn)和基因診斷。通過PCR方法來診斷牛支原體肺炎是基因診斷最常用的方法。牛支原體和牛無乳支原體兩者的同源性很高，需要使用RT-PCR、雜交探針等才可以快速靈敏地將兩者區(qū)分。侯軒等[3]利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)技術(shù)建立了的方法能檢測(cè)出20 pg牛支原體DNA，較PCR方法高100倍。此外，秦明明[4]利用牛支原體uvrC基因建立了一種特異性、敏感性良好的LAMP檢測(cè)方法，此法只需要在61℃保溫1h即可完成反應(yīng)，反應(yīng)完成后加入SYBR GreenⅠ顯色液就能直接根據(jù)顏色變化用肉眼判斷檢測(cè)結(jié)果。以上兩種LAMP法均適合在基層推廣應(yīng)用的快速檢測(cè)牛支原體的檢測(cè)方法。血清學(xué)反應(yīng)牛支原體的高血清陽(yáng)性率，并不能作為常規(guī)的診斷方法，而且血清中牛支原體的抗體滴度的高低跟牛群支原體患病率并沒有直接的關(guān)系。

4 疫苗的研究

目前，除美國(guó)有商業(yè)化的疫苗可以預(yù)防牛支原體肺炎外，其他國(guó)家均未見報(bào)道。目前所使用的支原體疫苗包括滅活疫苗或弱毒苗，兩者只能提供暫時(shí)或部分保護(hù)，而且在某些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的副作用較為嚴(yán)重。目前已鑒定了7種（VspA-C、E-F、O、L）等牛支原體Vsp蛋白[5]，為疫苗的研究開拓了一條新的路徑。已有研究者用抗血清從文庫(kù)中篩選免疫原性基因，以作為新型DNA疫苗的侯選基因。通過比較牛支原體臨床分離株和參考株，篩選出1株牛支原體滅活疫苗研究侯選菌株，同時(shí)為牛支原體毒力研究和疫苗效力評(píng)價(jià)提供了牛體感染模型。2012年，高航飛[6]等研究?jī)?nèi)蒙地區(qū)分離到一株牛支原體 (NM2012)，該株病原體第6代、第12代、第20代菌株具有的免疫原性，該成果可作為今后牛支原體病的基礎(chǔ)研究和疫苗研究奠定基礎(chǔ)。

5 小結(jié)

牛支原體肺炎對(duì)養(yǎng)殖戶造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失，已經(jīng)嚴(yán)重阻礙到養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)于該病的研究還存在許多空白，所以現(xiàn)階段只能在飼養(yǎng)管理、減少應(yīng)激因素、嚴(yán)格控制傳染源等方面下功夫。另外，國(guó)家政府和相關(guān)部門應(yīng)投入更多的人力、物力、財(cái)力等對(duì)該病進(jìn)行深入研究，研發(fā)有效的診斷試劑及高效疫苗，積極控制牛支原體肺炎，保障畜牧業(yè)的健康發(fā)展。