張思新 湯新明 李 超 劉賢勇 呂艷麗 索 勛

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100193)

雞球蟲病是一種由艾美耳球蟲引起的寄生性原蟲病(Shirleyetal.,2004)，該病以出血性腸炎、血痢、雛雞發(fā)病率高和死亡率高為特征，給養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的危害(Dallouletal., 2006;李仁良等, 2010)，據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界養(yǎng)殖業(yè)每年因球蟲病造成的損失大約30億美元(Williams., 1999; Blakeetal., 2014)。當(dāng)前國(guó)內(nèi)外主要使用藥物來控制球蟲病，但由于耐藥蟲株的出現(xiàn)、藥物殘留以及新藥研發(fā)成本高且周期長(zhǎng)等問題嚴(yán)重制約了藥物的應(yīng)用(錢根林等, 2013;Clarkeetal., 2014)。目前實(shí)際生產(chǎn)中，球蟲病疫苗是唯一替代藥物有效防治球蟲病的舉措(Chapmanetal., 2002)。在球蟲病疫苗的研制方面我國(guó)學(xué)者做了大量的工作，進(jìn)行了廣泛而深入的研究，本文主要就我國(guó)球蟲病疫苗的研究情況作一概述。

1 活疫苗

球蟲活卵囊疫苗是實(shí)際生產(chǎn)中防控球蟲病的重要手段之一，目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)球蟲病疫苗的研究主要以活苗為主, 分為強(qiáng)毒疫苗、弱毒疫苗、晚熟系球蟲苗和早、中、晚熟系聯(lián)合球蟲苗4類。

1.1 強(qiáng)毒疫苗

強(qiáng)毒疫苗的蟲株是直接從自然感染球蟲的雞體內(nèi)或糞便中分離出來的，然后采用單卵囊分離技術(shù)分離并純化單個(gè)球蟲種，再按一定比例混合，并配以適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑，即組成強(qiáng)毒活蟲苗(索勛等, 1998)。Edgar通過飲水或拌料的方式給4～10 日齡雞接種少量混合雞球蟲卵囊，取得較好的免疫保護(hù)效果(Edgaretal., 1954)。在強(qiáng)毒疫苗的研究過程中，王宗儀等(1988)發(fā)現(xiàn)，與初次感染大劑量卵囊相比，通過依次增加卵囊數(shù)量并反復(fù)輕微感染雛雞, 不僅對(duì)宿主機(jī)體無影響, 且能獲得良好的免疫保護(hù)。陳明勇等(1992)報(bào)道，E．tenella單蟲種活苗經(jīng)涓滴免疫、大劑量一次免疫和二次免疫均可獲得較高的免疫保護(hù)力，且引起機(jī)體的免疫應(yīng)答類型不一樣，涓滴免疫能引起雛雞以細(xì)胞免疫為主的免疫應(yīng)答，而大劑量一次免疫和二次免疫則引起雛雞以體液介導(dǎo)免疫為主的免疫應(yīng)答。在實(shí)驗(yàn)條件下研究了雞球蟲苗1號(hào)(LCV-1)、雞球蟲苗(LCV-2)和四價(jià)雞球蟲疫苗(LCV)的免疫效果，發(fā)現(xiàn)雞球蟲苗LCV安全性高、免疫保護(hù)效果顯著(閆鴻斌等,2006; 2008; 2009)。

強(qiáng)毒疫苗雖然能激發(fā)宿主產(chǎn)生足夠的保護(hù)力，但在使用過程中也存在一定的風(fēng)險(xiǎn)：(1)強(qiáng)毒疫苗在制作和使用過程中不使用抗球蟲藥，如免疫不當(dāng)，可能會(huì)引起球蟲病；(2)強(qiáng)毒疫苗中的混合球蟲是野生毒株，未經(jīng)任何致弱處理，毒力較強(qiáng)，如使用不當(dāng)可能會(huì)引起球蟲?。?3)強(qiáng)毒疫苗是由地方性毒株組成，若不謹(jǐn)慎使用，引入新的雞場(chǎng)，引起當(dāng)?shù)厍蛳x病暴發(fā)。

1.2 弱毒疫苗

弱毒活苗是從自然感染的雞糞便中收集卵囊， 采用單卵囊擴(kuò)增法來純化卵囊, 然后通過減弱蟲株的致病性, 降低對(duì)宿主的危害性, 并能產(chǎn)生足夠的免疫力的致弱蟲株, 按一定比例配以適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑而組成的一種活疫苗(索勛等, 1998)。目前致弱的方法有早熟選育、雞胚傳代和理化處理等幾種。

1.2.1早熟選育: 1975年Jeffers 首次實(shí)現(xiàn)了柔嫩艾美耳球蟲的早熟選育，并發(fā)現(xiàn)早熟株較親本毒株致病力減弱, 但仍保持親本株的免疫原性(Jeffers, 1975),這極大地推動(dòng)了弱毒疫苗的發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過20代的早熟選育，獲得潛隱期縮短16 h的巨型艾美耳球蟲早熟株比其親代株繁殖力下降了74%，致病力明顯降低，但仍保持了免疫原性(王江清等, 1991)。經(jīng)過12代早熟選育獲得潛隱期74 h的兩株堆型艾美耳球蟲早熟株(P9株：裂殖生殖為3代和P12株：裂殖生殖為2代)，早熟株在繁殖力和致病力方面與親代株相比均降低，但仍保持良好的免疫原性(秦建華等, 1992)。采用早熟選育方法獲得潛隱期縮短21和26 h的柔嫩艾美耳球蟲早熟株和毒害艾美耳球蟲早熟株，早熟株的致病性大大降低，小劑量感染對(duì)增重?zé)o影響，大劑量感染也不會(huì)引起死亡，同時(shí)保持了良好的免疫原性(段嘉樹等, 1993)。2007年正典研制的含柔嫩、毒害、巨型和堆型艾美耳球蟲的四價(jià)雞球蟲活疫苗獲得農(nóng)業(yè)部新獸藥證書。

1.2.2雞胚傳代: 將雞球蟲孢子化卵囊在體外進(jìn)行人工脫囊, 獲得子孢子, 再將球蟲子孢子接種到雞胚絨毛尿囊膜上培養(yǎng), 連續(xù)傳代多次, 可獲得致病性降低, 但免疫原性仍良好的所謂“雞胚適應(yīng)株” (索勛等, 1998)。Long 等(1965)首次用柔嫩艾美耳球蟲培養(yǎng)出雞胚致弱蟲株—“TA”株。經(jīng)過連續(xù)傳代, “TA”株致病力顯著低于親本株, 且免疫后能抵抗強(qiáng)毒的攻擊。我國(guó)學(xué)者在1977—1987年通過雞胚培育傳代致弱方法，制成柔嫩艾美耳球蟲弱毒活蟲苗，并系列報(bào)道了該弱毒活蟲苗的最小免疫劑量、免疫力產(chǎn)生期、安全性、穩(wěn)定性、免疫期以及田間免疫試驗(yàn)(楊振中等, 1987a; 1987b；1990)。樊生超等采用柔嫩艾美耳球蟲雞胚適應(yīng)株和巨型艾美耳球蟲早熟選育株，按不同的配比制成混合球蟲苗，免疫雛雞，分別于免疫后第2、4、6、8周用強(qiáng)毒卵囊攻毒。與對(duì)照組相比，免疫雞腸道病變輕微，增重明顯，腸道內(nèi)容物卵囊密度顯著降低，獲得較好的免疫效果(樊生超等,1997)。

1.2.3理化處理: 采用各種物理和化學(xué)手段, 如加熱、冷凍、輻射、化學(xué)誘變劑等對(duì)球蟲卵囊進(jìn)行處理, 以便使卵囊的毒力降低(索勛等, 1998)。吳兆敏等(1991)用化學(xué)誘變劑N-甲基-N’-硝基-N亞硝基胍處理(5 μg/120 min或10 μg/60 min)后的柔嫩艾美耳球蟲免疫雛雞(2×103～8×103)，然后用2×105強(qiáng)毒株攻毒，發(fā)現(xiàn)雞群無任何臨床癥狀，保護(hù)率高達(dá)100%。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所采用化學(xué)和物理雙重致弱方法研制的雞球蟲病多價(jià)疫苗(DLV疫苗：柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲)是國(guó)內(nèi)第一個(gè)獲得新獸藥證書的雞球蟲苗，并在實(shí)驗(yàn)室及田間試驗(yàn)取得很好的應(yīng)用效果和效益(蘇華煒等, 1996; 蘇華煒等, 1997; 姚惠娟等, 2004)。

弱毒疫苗相比強(qiáng)毒疫苗，致病性顯著下降，且仍保持了良好的免疫原性。但也存在一些不足：(1)弱毒疫苗的制作工藝繁瑣，耗時(shí)耗力；(2)弱毒疫苗蟲株的繁殖力相比親本株明顯下降，導(dǎo)致研制成本增加；(3)致弱蟲株存在致弱性能不穩(wěn)定，毒力返強(qiáng)等潛在因素。

1.3 晚熟疫苗

索勛等(1996)利用“時(shí)間遞增傳代法”,即每代間隔加8 h的方法,經(jīng)過14代的選育，首次獲得比親本株卵囊高峰期延長(zhǎng)1 d的柔嫩艾美耳球蟲晚熟株。接種同劑量(200/只)的早熟、中熟和晚熟蟲株，再攻毒后晚熟株的免疫效果最好。有學(xué)者經(jīng)過16次傳代, 獲得了排卵囊高峰較母株(中熟系)推遲了2 d的毒害艾美耳球蟲晚熟株, 且具有較好的穩(wěn)定性。在生活史和生物學(xué)特性方面：晚熟系生活史各階段蟲體均比母株大，卵囊潛隱期不變，同等劑量晚熟株系的繁殖力高于中熟系；在同等劑量免疫下，晚熟系的致病性與中熟系相當(dāng)，但免疫原性好于中熟系，攻蟲后卵囊排出減少率在99%以上(董輝等, 2003a; 2003b)。

1.4 早、中、晚熟系疫苗:強(qiáng)效牌艾美耳球蟲疫苗

索勛等于1996 年推出由早、中、晚熟系球蟲聯(lián)合制成的球蟲苗———強(qiáng)效艾美耳牌雞球蟲苗(Einerivac Plus)并報(bào)道了強(qiáng)效艾美耳牌球蟲苗的免疫效果(索勛等, 2000)。后來有學(xué)者進(jìn)行了強(qiáng)效牌艾美耳球蟲生物免疫毒力、安全范圍的測(cè)定(雷江紅等, 1999; 索勛等, 2000)。

活疫苗在防控球蟲病的過程中發(fā)揮了重要作用，但活卵囊疫苗存在散播病原、制作工藝繁瑣和穩(wěn)定性等問題。在近十幾年里, 隨著分子生物學(xué)和基因組學(xué)的發(fā)展，許多研究者將關(guān)注點(diǎn)集中在基因工程疫苗的研究上。

2 DNA疫苗

自1990年Wolff等人發(fā)現(xiàn)裸DNA可以在肌肉細(xì)胞內(nèi)表達(dá)以來(Wolffetal., 1990)，DNA疫苗越來越受到青睞。在球蟲病DNA疫苗研究過程中，我國(guó)科研工作者做了大量工作。候選抗原的選擇：由于球蟲生活史復(fù)雜，發(fā)育階段多，保護(hù)性抗原多。目前疫苗選擇主要集中于折光體、微線、棒狀體等細(xì)胞器抗原、蟲體(子孢子、裂殖子和配子體)表面抗原和一些酶類抗原。如SO7(Songetal., 2013)、Mic家族蛋白(Shietal., 2014；Huangetal., 2015;)、cSZ-2(Shahetal., 2010)、3-1E(扈炳新等, 2011; Maetal., 2011)、TA4(Songetal.,2017)、Gam56(Xuetal., 2013)、Rhomboid(Liuetal., 2013)、pEtK2(張步彩等, 2008)和GAPDH(Tianetal., 2017)等。免疫接種劑量：在免疫接種時(shí)，免疫接種劑量不同對(duì)免疫效果有一定的影響。趙月蘭等將構(gòu)建的堆型艾美耳球蟲3-1E基因核酸疫苗，分別設(shè)25、50和100 μg三個(gè)劑量進(jìn)行免疫實(shí)驗(yàn)，攻毒后發(fā)現(xiàn)50 μg免疫組卵囊減少率達(dá)到67.67%，抗球蟲指數(shù)(ACI)達(dá)到167.06，而25 μg免疫組為54.89%和146.59；100 μg免疫組為60.34%和148.88。表明50 μg產(chǎn)生較強(qiáng)的抗球蟲效果(趙月蘭等, 2011)。Song等(2017)將核酸疫苗pVAX1.0-TA4-IL-2設(shè)了6個(gè)劑量組，分別為2、15、25、50、100和200 μg進(jìn)行免疫攻毒，發(fā)現(xiàn)25 μg劑量組免疫效果最佳，其ACI達(dá)到194.42。免疫途徑的選擇：免疫途徑不同，引起的免疫應(yīng)答，因此選擇合適的免疫途徑，所產(chǎn)生的免疫效果可能更好。Song等(2009)將pcDNA3.1b-TA4-chIL-2通過皮下注射、口服、肌肉注射、靜脈注射和滴鼻等多種途徑免疫雞，攻毒后發(fā)現(xiàn)肌肉注射的方式免疫效果更佳，ACI最高，達(dá)到193.97。Kopko等(2000)將E．tenellaS07基因連接到真核表達(dá)載體pcDNA3.1上，構(gòu)建了pcDNA3-S07質(zhì)粒，直接肌肉注射免疫雞，發(fā)現(xiàn)其盲腸病變的減輕和相對(duì)體重的增加均優(yōu)于用活卵囊和重組蛋白抗原(CheY-S07)免疫的雞。免疫佐劑的應(yīng)用：免疫佐劑是構(gòu)建疫苗的重要組成部分，它能提高抗原的免疫原性，產(chǎn)生更好的免疫保護(hù)。吳紹強(qiáng)等(2004)將表達(dá)柔嫩艾美耳球蟲的TA4抗原的核酸疫苗，聯(lián)合重組干擾素，以中劑量(50 μg)免疫時(shí)，雞的增重效果最為明顯，盲腸病變值也最小，ACI達(dá)到167.2。將柔嫩艾美耳球蟲TA抗原和雞IL-2制成核酸疫苗,免疫雞兩次，攻毒后發(fā)現(xiàn)pcDNA-TA4-IL-2免疫組的卵囊較少率為75.1%，ACI為192均高于pcDNA-TA4免疫組和pcDNA-IL-2組(Xuetal., 2008)。Geriletu將雞IL-17基因與柔嫩艾美耳球蟲的MZ5-7基因插入表達(dá)真核載體pcDNA4.0中，構(gòu)建成核酸疫苗pcDNA4.0-MZ5-7-IL17,免疫雞后攻毒發(fā)現(xiàn)卵囊減少率達(dá)到65.99%，ACI達(dá)到190，高于pcDNA4.0-MZ5-7的60.4%(卵囊減少率)和186(ACI)(Geriletuetal., 2011)。

雖然我們?cè)贒NA疫苗的研究中取得了一定的進(jìn)展，但由于DNA疫苗的保護(hù)性試驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行，考慮到外界環(huán)境、地方蟲株本身、免疫佐劑、免疫劑量和攻毒劑量不一等因素，試驗(yàn)結(jié)果需要進(jìn)行田間試驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步考證。

3 亞單位疫苗

在亞單位疫苗研究中，我國(guó)科研工作者也進(jìn)行了深入地探索研究。周賽等(2013)用重組酵母表達(dá)柔嫩艾美耳球蟲Mic4-N端蛋白與AbISCO?-100佐劑結(jié)合后免疫雞，發(fā)現(xiàn)10 μg蛋白+50 μg佐劑組卵囊減少率為67.90%，而 1 μg蛋白+50 μg佐劑組和5 μg蛋白+50 μg佐劑組卵囊減少率分別為39.64%和36.85%，證明免疫劑量是影響抗球蟲效果的因素之一。將柔嫩艾美耳球蟲的TA抗原、毒害艾美耳球蟲的NA4抗原、堆型艾美耳球蟲的LDH抗原和巨型艾美耳球蟲的Em8抗原組成多價(jià)亞單位疫苗，免疫雞后分別以4種球蟲攻毒，發(fā)現(xiàn)ACI均在170以上，表明在混合感染時(shí)，多價(jià)疫苗可以產(chǎn)生較好的免疫保護(hù)效果(Songetal., 2015)。將表達(dá)的柔嫩艾美耳球蟲IMP1和CD40 L重組蛋白免疫雞后，發(fā)現(xiàn)IMP1和CD40 L免疫組產(chǎn)生較好的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答同時(shí)盲腸病變計(jì)分和體增重結(jié)果均優(yōu)于IMP1與佐劑免疫組，表明CD40 L能增強(qiáng)IMP1的免疫原性，增強(qiáng)免疫效果(Yinetal., 2015)。重組的柔嫩艾美耳球蟲的RHO1蛋白免疫雞后，免疫組的IL-2、IFN-γ的表達(dá)水平和CD4+、CD8+T細(xì)胞的比例顯著高于對(duì)照組，攻毒后免疫組的保護(hù)效率達(dá)到77.3%，證明RHO1基因具有良好的免疫原性，具有疫苗開發(fā)潛力(Lietal., 2012)。同時(shí)在SO7(許金俊等, 2007)、3-1E(扈炳新等, 2010)、SAG(Liuetal., 2018)、HSP70(陳珊等, 2008)、Serpin(李文超等, 2013)和5401(Duetal., 2005)等一系列抗原進(jìn)行了嘗試，取得了一定的成果。但目前市售的亞單位疫苗只有配子體亞單位疫苗COXABIC。因此在亞單位疫苗的研究的道路上，我們依然任重而道遠(yuǎn)。

4 活載體疫苗

活載體疫苗是將目的抗原的編碼基因通過基因工程技術(shù)導(dǎo)入活載體 (弱毒的細(xì)菌或病毒), 構(gòu)建重組菌 (毒) 株, 從而誘發(fā)相應(yīng)的免疫應(yīng)答。目前在球蟲病活載體疫苗研究中我國(guó)工作者主要集中在細(xì)菌、病毒和球蟲活載體疫苗研究中。

4.1 細(xì)菌活載體疫苗

細(xì)菌具有易于體外培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染和篩選系統(tǒng)相對(duì)簡(jiǎn)單和穩(wěn)定，外源基因容量大，刺激宿主產(chǎn)生高質(zhì)量免疫應(yīng)答等優(yōu)點(diǎn)(Beitelsheesetal., 2016)，目前應(yīng)用到球蟲上的細(xì)菌載體有沙門氏菌、卡介苗、乳酸菌和枯草桿菌等。杜愛芳等以DNA腺嘌呤甲基化酶(dam)和轉(zhuǎn)錄激活因子(phoP)雙基因突變減毒鼠傷寒沙門氏菌ZJ111株為載體，表達(dá)了柔嫩艾美耳球蟲5401基因，將菌株口服接種于3日齡的雞，免疫兩次，結(jié)果表明重組ZJ111/pcDNA3-5401菌既能誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)球蟲的抗體，也能顯著增強(qiáng)淋巴細(xì)胞增殖水平，其ACI達(dá)到164.98(杜愛芳等, 2006)，表明減毒沙門氏菌作為載體疫苗具有良好的安全性、穩(wěn)定性和免疫原性。李云娜等將構(gòu)建的重組卡介苗pMV261-ADF和pMV361-ADF疫苗通過滴鼻、口服、頸部皮下注射3種途徑接種雛雞，發(fā)現(xiàn)重組卡介苗pMV261-ADF和pMV361-ADF采用滴鼻方式免疫效果較好，ACI值分別為161.47和169.21(李運(yùn)娜等, 2012)。Wang等(2014)分別構(gòu)建了表達(dá)柔嫩艾美耳球蟲rhomboid基因的pMV361-rho和pMV361-rho-IL2重組卡介苗，免疫兩次，發(fā)現(xiàn)pMV361-rho-IL2和pMV361-rho均能顯著增強(qiáng)淋巴細(xì)胞增殖水平,攻毒后其卵囊減少率分別為64.1%和51.6%。說明卡介苗能作為載體疫苗具有較好的免疫效果，同時(shí)細(xì)胞因子IL-2作為佐劑能提高抗原的免疫原性，增強(qiáng)免疫效果。將表達(dá)柔嫩艾美耳球蟲AMA1基因?qū)肴樗峋磉_(dá)載體并將重組菌免疫雞，結(jié)果顯示與對(duì)照組相比免疫組雞的抗體水平和CD4+T細(xì)胞比例顯著提高，攻毒后卵囊減少率達(dá)到33.33%(Lietal., 2018)。用芽孢桿菌飼喂雛雞，攻毒后發(fā)現(xiàn)雞的盲腸病變記分降低，體重增加，表明芽孢桿菌具有作為疫苗載體的潛力(Leeetal., 2010)。將表達(dá)柔嫩艾美耳球蟲表面抗原3-1E的基因的重組枯草芽孢桿菌免疫肉雞，攻毒后發(fā)現(xiàn)免疫組盲腸病變記分顯著降低，體重明顯增加，卵囊減少率達(dá)到63.70%，ACI為189(余東游等, 2014)，表明芽孢桿菌作為活載體疫苗具有較好的免疫保護(hù)效果。

4.2 病毒活載體疫苗

病毒載體具有安全性高、操作簡(jiǎn)便、免疫效力高等優(yōu)點(diǎn)，因此以病毒為疫苗載體的研究發(fā)展迅速。楊桂連等將柔嫩艾美耳球蟲的Rhomboid基因?qū)腚u痘病毒中獲得雞痘重組病毒rFPV-Rhomboid,免疫雛雞，發(fā)現(xiàn)重組病毒接種雞外周血中的CD4+、CD8+T細(xì)胞的比例和增重效果顯著高于未免疫對(duì)照組，攻毒后也具有一定的保護(hù)作用(楊桂連等, 2006)。表明雞痘病毒作為活載體疫苗具有較好的應(yīng)用前景。

4.3 球蟲活載體疫苗

基于活卵囊球蟲疫苗的廣泛應(yīng)用、轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展和球蟲自身的“優(yōu)勢(shì)”，我們課題組提出以活卵囊球蟲為疫苗載體表達(dá)外源抗原，從而實(shí)現(xiàn)一苗多用的目的。目前也取得了豐碩的成果。Kelleher等(1998)首先利用Mic1蛋白啟動(dòng)子實(shí)現(xiàn)了β-半乳糖苷酶在柔嫩艾美耳球蟲的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，拉開了球蟲轉(zhuǎn)染的序幕。利用熒光蛋白作為報(bào)告基因，在柔嫩艾美耳球蟲的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染獲得了成功，證明了球蟲轉(zhuǎn)染的穩(wěn)定性(Yanetal., 2009)。利用限制性內(nèi)切酶介導(dǎo)的整合轉(zhuǎn)染效率，顯著提高了球蟲的轉(zhuǎn)染效率(Liuetal., 2008)。將表達(dá)巨型艾美耳球蟲的IMP1和profilin抗原的轉(zhuǎn)基因柔嫩艾美耳球蟲免疫雞，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因球蟲免疫組不僅能產(chǎn)生針對(duì)IMP1和profilin的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，而且用巨型艾美耳球蟲攻毒后，可產(chǎn)生一定的免疫保護(hù)，免疫組卵囊產(chǎn)量降低。表明了球蟲作為活載體疫苗具有可行性(Tangetal., 2018a；2018b)。

雖然活載體疫苗的研究尚處于試驗(yàn)研究階段，還有一些瓶頸技術(shù)有待解決。但我們相信隨著免疫學(xué)理論的不斷豐富和先進(jìn)技術(shù)的不斷發(fā)展，疫苗載體的研究必將步入新的更高臺(tái)階，為人類和動(dòng)物的健康做出更加突出貢獻(xiàn)。

5 展望

近年來，隨著公眾對(duì)食品安全的重視和對(duì)“綠色食品”的推崇，疫苗是替代藥物防控球蟲病的重要舉措。迄今為止，我們雖然在雞球蟲病疫苗的研究過程中(從活疫苗到基因工程疫苗)取得了令人鼓舞的成就，但還存在許多不足，如活卵囊疫苗雖然能提供完全保護(hù)，但存在制作工藝繁瑣、容易擴(kuò)散病原等問題?；蚬こ桃呙缒苷T發(fā)雞體產(chǎn)生部分保護(hù)力但無法替代傳統(tǒng)活疫苗。因此，未來需要進(jìn)一步研究球蟲蟲體與宿主之間的相互作用，闡明雞對(duì)球蟲產(chǎn)生免疫應(yīng)答的生理學(xué)和免疫學(xué)的機(jī)理，進(jìn)而利用各種手段如基于細(xì)胞水平、全基因組范圍篩查方法等鑒別出各種重要的保護(hù)性抗原，進(jìn)而采用合適的抗原傳遞系統(tǒng)，我們有理由相信球蟲基因工程疫苗最終能在雞球蟲病的免疫防治中發(fā)揮重要作用。