竇曉霞，王家敏，李 倬

(1.西北民族大學(xué) 甘肅省動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)研究中心，甘肅 蘭州 730030；2.西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅 蘭州 730030)

流感即流行性感冒(Influenza)，是由流感病毒(Influenza virus)引起的一種急性呼吸道傳染性疾病.據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì)，在世界范圍內(nèi)，每年有300萬(wàn)～500萬(wàn)人嚴(yán)重感染流感，造成25萬(wàn)～50萬(wàn)人死亡[1].已有的抗病毒藥物對(duì)于流感病毒有一定的控制作用，但由于耐藥性的產(chǎn)生，流感沒(méi)有得到有效控制.目前，接種疫苗仍是預(yù)防流感最有效、最經(jīng)濟(jì)的方法.流感疫苗以雞胚培養(yǎng)法生產(chǎn)的傳統(tǒng)疫苗為主，近年來(lái)流感的新型基因工程疫苗和基于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的疫苗都有突破性進(jìn)展，部分已應(yīng)用于臨床.本文就流感疫苗的研究進(jìn)展進(jìn)行概述.

1 傳統(tǒng)疫苗

1.1 滅活疫苗

滅活疫苗1940年開(kāi)始生產(chǎn)和使用，是最常見(jiàn)的流感疫苗[2]，主要有三類(lèi)：①全病毒滅活疫苗，1954年首先在美國(guó)批準(zhǔn)生產(chǎn)，含有完整的已滅活的流感病毒，包含病毒所有的蛋白質(zhì)、脂類(lèi)和核酸.無(wú)論是血凝素(hemagglutinin HA)基因、神經(jīng)氨酸酶(neuraminidase NA)基因還是病毒的內(nèi)源性蛋白，都會(huì)誘發(fā)免疫反應(yīng)而產(chǎn)生各自相對(duì)應(yīng)的抗體[3]，其免疫原性強(qiáng)，但副作用大，只推薦成人使用[4].②裂解疫苗：對(duì)滅活完整病毒加以裂解并去除核酸和大分子蛋白，只保留其抗原有效成分HA和NA以及部分基質(zhì)蛋白和核蛋白后制成[5]，因其不含脂質(zhì)而副反應(yīng)小且免疫原性強(qiáng)，可用于兒童和老年人.③亞單位疫苗：由裂解疫苗進(jìn)一步裂解純化制成，由于其只包含了流感病毒的免疫原性與致病性相關(guān)的HA和NA抗原，因此安全性良好[6]，可適用于所有人.董蒲梅等[7]比較了給6～12歲兒童接種流感亞單位疫苗和裂解疫苗的安全性和免疫原性，發(fā)現(xiàn)兩種疫苗的免疫學(xué)效果相似，安全性良好，且亞單位疫苗發(fā)熱反應(yīng)率低于裂解疫苗.

1.2 減毒活疫苗

減毒活疫苗是將病毒在人工培育條件下使其喪失大部分反應(yīng)原性，保留免疫原性制成.接種這類(lèi)疫苗能引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生持久的粘膜免疫應(yīng)答、體液免疫應(yīng)答以及細(xì)胞免疫應(yīng)答[2].這種疫苗在俄羅斯使用了數(shù)十年，2003年在美國(guó)獲得批準(zhǔn)使用，用于2歲兒童到49歲成人之間[8]，2012年在歐洲獲得批準(zhǔn)使用，用于年齡為2歲～17歲的兒童[2].但是，2017～2018年的季節(jié)性流感不推薦兒童使用[9].美國(guó)Medimmune公司于2003年成功研發(fā)了全球第一支三價(jià)流感病毒活疫苗FluMist并上市，通過(guò)十余年的臨床應(yīng)用，證明流感病毒減毒活疫苗是安全的[10].

2 新型疫苗

2.1 類(lèi)病毒顆粒疫苗

流感病毒血清型眾多，給流感疫苗的研發(fā)帶來(lái)了巨大的困難，類(lèi)病毒顆粒(virus-like particles，VLPs)疫苗為這一難題提供了解決辦法.VLPs是含有某種病毒一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白的空心顆粒，類(lèi)似于完整的病毒粒子，具有與完整病毒相似的免疫原性、不含病毒核酸物質(zhì)，可誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答但不能自主復(fù)制且不具有感染性[11]，是一種理想的疫苗形式.流感類(lèi)病毒顆粒疫苗是將流感病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因插入到表達(dá)載體中，再轉(zhuǎn)入原核或真核細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá).2013年，美國(guó)(FDA)批準(zhǔn)了由Sciences公司生產(chǎn)的昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)的三價(jià)流感疫苗Flublock上市[12]，2016 年該公司再次宣布Flublok 四價(jià)流感疫苗被批準(zhǔn)用于18歲以上成年人，并且在Ⅰ～Ⅳ臨床期試驗(yàn)中顯示了良好的免疫原性和安全性[13].

2.2 重組活載體疫苗

重組活載體疫苗是選擇不能復(fù)制或者能復(fù)制但不致病的病毒作為載體，其利用基因工程的方法將流感抗原基因重組到病毒基因序列中，構(gòu)建重組病毒[14]制成的疫苗.該疫苗能夠模仿病原體自然感的方式進(jìn)入機(jī)體.在重組病毒進(jìn)入機(jī)體后，流感抗原基因隨著病毒的復(fù)制而高效表達(dá)，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)抗原蛋白全面、有效、持久的免疫應(yīng)答.荷蘭伊拉斯謨醫(yī)學(xué)中心的A Hessel等研究了改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified Vaccinia virus Ankara ，MVA )為載體的H5N1的HA重組疫苗的保護(hù)性，發(fā)現(xiàn)用3×108pfu MVA-HA-Vietnam/04免疫兩次后，用同源A/Vietnam/1194/04和異源A/Indonesia/5/05毒株攻毒，疫苗均能提供保護(hù)[15].

2.3 病毒核酸疫苗

2.3.1 DNA疫苗

DNA 疫苗即用基因工程的方法把一個(gè)或幾個(gè)抗原蛋白的編碼基因克隆到真核表達(dá)載體上，將此重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入機(jī)體內(nèi)，使編碼基因借助宿主的轉(zhuǎn)錄和翻譯機(jī)制獲得表達(dá)而得到抗原蛋白，進(jìn)而通過(guò)抗原提呈細(xì)胞將抗原提呈給免疫細(xì)胞，激活機(jī)體特異性的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)[5].洪宇[16]設(shè)計(jì)并合成了亞型H3579抗A型多表位DNA流感疫苗H5HA-Epi-H7HA-1-p VAX，進(jìn)行免疫指標(biāo)檢測(cè).結(jié)果表明，HA結(jié)合抗原表位完整DNA疫苗，具有應(yīng)對(duì)目前出現(xiàn)的亞型流感的潛力.陳銳等[17]通過(guò)將重配質(zhì)粒與流感病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到COS-1細(xì)胞和MDCK細(xì)胞的混合液中，篩選出拯救H7N9流感疫苗病毒候選株rg PR8-H7N9，并證明了以該候選株制備的H7N9流感裂解疫苗具有良好的免疫原性與免疫保護(hù)性.

2.3.2 mRNA疫苗

mRNA疫苗與DNA疫苗的作用機(jī)制相似，但相比于DNA疫苗而言，mRNA 疫苗在接種到機(jī)體后，直接被翻譯轉(zhuǎn)錄成蛋白質(zhì)，因此，表達(dá)的抗原蛋白量更高，降低了疫苗接種量和病毒核酸序列整合到宿主基因組的風(fēng)險(xiǎn).但mRNA疫苗的缺陷是mRNA容易被RNA酶降解，Petsch等通過(guò)優(yōu)化mRNA疫苗的GC含量和UTR序列，再將其整合到核酸精蛋白上，從而使mRNA免受RNase的降解，提高了其穩(wěn)定性[18].

2.4 廣譜疫苗

廣譜疫苗是對(duì)流感病毒的不同亞型的流感病毒產(chǎn)生交叉免疫保護(hù)，從而保護(hù)機(jī)體免受多種亞型流感病毒的感染的疫苗.流感病毒屬于正粘病毒科，由8個(gè)節(jié)段基因表達(dá)的 10 種蛋白組成，包括HA、NA、跨膜蛋白(membrane-spanning protein 2，M2)、基質(zhì)蛋白1(matrix protein 1，M1)、核蛋白(nucleocapsid protein，NP)、RNA 聚合酶 PA、PB1、PB2 及非結(jié)構(gòu)蛋白 NS1、NS2[19].目前，對(duì)廣譜流感疫苗的研究主要針對(duì)的保守表位，主要有以下幾種：

1)HA1：HA在靶細(xì)胞內(nèi)以前體的形式被合成(HA0)后酶切得到HA1和HA2兩個(gè)結(jié)構(gòu)域.HA1主要構(gòu)成HA的頭部，HA2和HA1的一小部分構(gòu)成HA的莖部[20].中和抗體識(shí)別的優(yōu)勢(shì)抗原表位主要位于HA頭部.因此，目前廣泛使用的三價(jià)流感疫苗所誘導(dǎo)的抗體都是針對(duì)HA頭部，盡管病毒可以通過(guò)改變HA1上的糖基化修飾位點(diǎn)或者積累點(diǎn)突變來(lái)掩飾或者改變抗體識(shí)別表位，從而逃脫抗體的中和作用[21].但頭部的改變只是改變病毒的致病性和病原性，且頭部唾液酸受體區(qū)為保守區(qū)，能產(chǎn)生具有交叉保護(hù)作用的抗體.所以，基于HA1的廣譜流感疫苗的研究對(duì)于預(yù)防不同亞型的流感具有一定的意義.

2)HA2：HA2抗體的結(jié)合位點(diǎn)是HA2蛋白N末端的23個(gè)氨基酸，被稱(chēng)作融合肽( Fusion peptide，F(xiàn)P)，是一段高度保守區(qū)域.該區(qū)域可阻止流感病毒與細(xì)胞融合、HA 的裂解以及病毒釋放，并可誘導(dǎo)產(chǎn)生ADCC及補(bǔ)體依賴(lài)細(xì)胞毒作用(complement-dependent cytotoxicity，CDC).此處受到攻擊會(huì)使流感病毒不能存活[19].針對(duì)HA2的廣譜流感疫苗的主要設(shè)計(jì)方法是，去除HA的HA1部分，只保留HA1 蛋白的N、C末端及HA2蛋白.將該無(wú)頭HA2蛋白以VLPs的形式表達(dá)或者輔以合適的佐劑改善HA2蛋白的免疫原性，提高免疫保護(hù)效果[22].CHEN等[23]構(gòu)建和表達(dá)了構(gòu)型正確、穩(wěn)定的無(wú)HA1的HA，用其免疫小鼠和雪貂后，可誘導(dǎo)產(chǎn)生廣譜的中和抗體.

3)NP和M1：NP和M1蛋白均高度保守，這兩種蛋白不會(huì)暴露在病毒表面，也不會(huì)在細(xì)胞表面表達(dá)，所以可以誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng).其誘導(dǎo)的T細(xì)胞免疫有廣泛交叉保護(hù)作用.針對(duì)NP和M1蛋白的疫苗主要為病毒或載體疫苗.如Dynavax公司[24]利用昆蟲(chóng)桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)了流感毒A/P/R/8/34(H1N1)的NP蛋白的新型流感疫苗，LILLIE等利用改良型痘苗病毒安卡拉株(modified vaccinia virus Ankara，MVA)為載體構(gòu)建了含 NP和M1新型流感疫苗[19].

4)M2e：M2e存在于膜內(nèi)蛋白M2的N端，是一段由24個(gè)N-末端殘基組成的高度保守序列.基于M2e蛋白的流感疫苗免疫性低，還需要借助如構(gòu)建表達(dá)M2e的VLPs、與免疫原性較強(qiáng)的大分子蛋白融合表達(dá)以及添加合適的佐劑等來(lái)增強(qiáng)M2e免疫原性，如De Filette等[25]將酵母轉(zhuǎn)錄激活蛋白GCN4(general control nondepressible 4)四聚體與M2e融合形成M2e-GCN4四聚融合體，接種小鼠后，小鼠在致死攻毒劑量情況下，100%被攻毒的小鼠均得到免疫保護(hù)而存活.

5)NA：NA是流感病毒表面的另一種重要糖蛋白，因其有水解唾液酸的作用，故對(duì)病毒從宿主細(xì)胞中釋放有重要作用，所誘導(dǎo)的抗體也具有交叉保護(hù)作用.但是NA誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)能夠減緩病毒感染子代細(xì)胞并且能減輕感染后的嚴(yán)重程度[20].要加強(qiáng)其免疫效果需通過(guò)病毒載體表達(dá)多亞型NA或者構(gòu)建融合NA的VLPs，如EASTERBROOK[26]等用H1N1毒株的NA基因序列制備出了NA病毒樣顆粒疫苗，用其免疫小鼠后，其對(duì)H5N1病毒也產(chǎn)生了交叉免疫.

3 基于哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)的流感疫苗

目前，國(guó)內(nèi)外使用的流感疫苗大多是雞胚疫苗.這種疫苗傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝固然成熟，但還存在很多缺陷，如成本高、產(chǎn)量不穩(wěn)定、勞動(dòng)強(qiáng)度大、生產(chǎn)周期長(zhǎng)、病毒容易變異、易引起過(guò)敏反應(yīng)等.因此，WHO于1995年提出使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞替代雞胚作為流感疫苗的生產(chǎn)基質(zhì)[27].現(xiàn)階段獲得批準(zhǔn)可用于人用流感疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞系主要有Vero細(xì)胞、MDCK細(xì)胞和PER.C6細(xì)胞.其中，Vero細(xì)胞在全球獲得批準(zhǔn)使用，MDCK細(xì)胞僅在歐洲獲得批準(zhǔn)[28]，PER.C6細(xì)胞系存在專(zhuān)利保護(hù)問(wèn)題，無(wú)法推廣[29].目前，應(yīng)用最廣的細(xì)胞系為Vero細(xì)胞和MDCK細(xì)胞.Baxter公司有三種Vero細(xì)胞生產(chǎn)的滅活流感疫苗上市，分別為三價(jià)滅活疫苗Preflucel，單價(jià)A(H5N1)流感大流行滅活疫苗Vepacel，單價(jià)A(H1N1)(PDM 09)流感大流行滅活疫苗Celtura[30].但是，目前基于Vero細(xì)胞生產(chǎn)疫苗的細(xì)胞系，存在可能檢測(cè)不出的潛在感染性因子和殘余宿主蛋白和以及DNA可能導(dǎo)致致瘤性和致癌性的風(fēng)險(xiǎn)[31].

劉鵬等[32]通過(guò)流感病毒在Vero細(xì)胞系與MDCK細(xì)胞系增殖條件中的比較，結(jié)果表明，流感病毒血凝素在MDCK細(xì)胞系可獲得較高的滴度.目前已上市的基于MDCK細(xì)胞生產(chǎn)的流感疫苗Novartis公司生產(chǎn)的疫苗，Optaflu，Novartis公司在此基礎(chǔ)上生產(chǎn)的甲型H1N1疫苗Celtura[29].Solvay Pharmaceuticals公司生產(chǎn)的季節(jié)性亞單位流感疫苗Influvac，Med Immune公司生產(chǎn)的四價(jià)流感疫苗FluMist.

4 結(jié)語(yǔ)

目前，流感嚴(yán)重威脅著我國(guó)乃至世界的人類(lèi)健康和公共衛(wèi)生安全，對(duì)流感的防治已經(jīng)刻不容緩.雖然流感病毒是目前研究比較清楚的一類(lèi)病毒，但是由于其極易產(chǎn)生抗藥性、易發(fā)生變異等特性，且由于目前使用的疫苗只能對(duì)亞型內(nèi)的毒株產(chǎn)生抗體，又因其生產(chǎn)基質(zhì)都是雞胚，無(wú)疑增加了潛在支原體等污染，這對(duì)于預(yù)防流感以及流感疫苗的開(kāi)發(fā)是嚴(yán)峻的考驗(yàn).面對(duì)日趨嚴(yán)重的流感大流行，開(kāi)發(fā)安全有效、抗原含量單一、能預(yù)防多種亞型流感病毒以及能產(chǎn)生持久的保護(hù)作用的疫苗成為科研的重點(diǎn).一些新型疫苗的研究為有效預(yù)防流感帶來(lái)希望.隨著對(duì)流感致病機(jī)理研究的深入以及分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，研制出快速有效、致敏性低的新型流感疫苗有望實(shí)現(xiàn).

[1] 謝辛慈，劉璐，袁松華，等.廣譜流感疫苗的研究進(jìn)展[J].微生物與感染，2016，11(1)：48-54.

[2] Claudia Maria Trombetta，Elena Gianchecchi；Emanuele Montomoli. Influenza vaccines： Evaluation of the safety profile[J]. Human Vaccines & Immunotherapeutics，2018，14(3)：657-670.

[3] 竇成利，于凱源，于喜冰.流感疫苗研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2015，10：52-55.

[4] 李馳，馮靖.基于血凝素的新型流感疫苗的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2014 ，27(2) ：272-284.

[5] 秦添，黃鳳杰，顧覺(jué)奮.流感疫苗的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)，2015，10(3)：263-266.

[6] 張莉，趙學(xué)群.流感疫苗的研究進(jìn)展[J].繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2015，29(3)：85-87.

[7] 董蒲梅，李玉秦，鄭天柱，等.流行性感冒滅活亞單位疫苗和裂解疫苗的安全性和免疫原性的比較研究[J]. 中華流行病學(xué)雜志，2003，24(7)：570-573.

[8] Soema PC1，Kompier R2，Amorij JP，et al .Current and next generation influenza vaccines： Formulation and production strategies[J]. Eur J Pharm Biopharm.2015，94：251-263.

[9] Angela J.P. Campbell，Lisa A. Grohskopf. Updates on Influenza Vaccination in Children[J]. Infectious Disease Clinics of North America. 2018，32(1)： 75-89.

[10] 耿興良. 流感病毒減毒活疫苗的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2017 ，30(1)：103-111.

[11] Grgacic EV，Anderson DA． Virus-like particles：passport to immune recognition [J]． Methods，2006，40(1)：60-65．

[12] 郭琦，廖國(guó)陽(yáng).人用H7N9禽流感疫苗的研究進(jìn)展[J].中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2017，30(02)：210-214.

[13] 于琨，安麗平，王偉，劉亞磊，李?lèi)?ài)英.流感疫苗的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2017，44(14)：2644-2646，2650.

[14] 周虹妤，裴磊，馮嘉林，等. 禽流感疫苗研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2016，(08)：231.

[15] 尹元，王偉靈. 基于改良型痘苗病毒安卡拉株載體的新型流感疫苗研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2017，(03)：222-227.

[16] 洪宇. 流感亞型H3579抗A型多表位核酸疫苗免疫指標(biāo)檢測(cè)[J]. 中國(guó)公共衛(wèi)生，2014，(10)：1347-1348.

[17] 陳銳，段躍強(qiáng)，趙忠鵬，等. 甲型H7N9流感裂解疫苗制備及免疫保護(hù)效果的評(píng)價(jià)[J]. 免疫學(xué)雜志，2014，(07)：608-611.

[18] Petsch B，Schnee M，Vogel AB，et al. Protective efficacy of in vitro synthesized，specific m RNA vaccines against influenza A virus infection[J]. Nat Biotechnol，2012，30(12)：1210-1216.

[19] 李朋偉，劉鵬. 基于流行性感冒病毒保守區(qū)域的通用流行性感冒疫苗的研究進(jìn)展[J]. 微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展，2017，(03)：66-70.

[20] 凌志祥，張宏，邊超，等. 廣譜流感疫苗的研究進(jìn)展[J]. 生命的化學(xué)，2014，(01)：2-12.

[21] 謝辛慈，劉璐，袁松華，等. 廣譜流感疫苗的研究進(jìn)展[J]. 微生物與感染，2016，(01)：48-54.

[22] 譚偉，謝芝勛. 基于甲型流感病毒血凝素莖部區(qū)的流感通用疫苗的研究進(jìn)展[J]. 畜牧與獸醫(yī)，2015，(03)：120-124.

[23] CHEN C J，ERMLER M E，TAN G S，et al. Influenza A viruses expressing intra-or inter-group chimeric hemagglutinins[J].J Virol，2016，90(7)：3789-3793.

[24] Pica N，Palese P．Toward a universal influenza virus vaccine：prospects and challenges [J]．Annu Rev Med，2013，64：189-202．

[25] De Filette M，Martens W，Roose K，et al. An influenza Avaccine based on tetrameric ectodomain of matrix protein 2 [J]. J Biol Chem，2008，283(17)：11382-11387.

[26] EASTERBROOK J D，SCHWARTZMAN L M，GAO J，et al. Protection against a lethal H5N1 influenza challenge by intranasal immunization with virus-like particles containing 2009 pandemic H1N1 neuraminidase in mice[J]. Virology，2012，432(1)： 39-44.

[27] Anonymous． Cell cultur；as a substrate for the production of influenza vaccines： memorandum from WH0 meeting[C]． Bull Wld Hlth0rg，1995，73( 4) ： 431-435.

[28] 呂讓?zhuān)瑒⒋簢?guó)，劉明. 細(xì)胞源流感疫苗研究進(jìn)展[A]. 中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)、中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室.中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C].中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)、中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，2016：3.

[29] 賈涵婧.用于流感疫苗生產(chǎn)的MDCK懸浮細(xì)胞流加培養(yǎng)工藝的開(kāi)發(fā)[D].上海：華東理工大學(xué)，2015：1-59.

[30] 楊帆. 乙型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株遺傳重配研究[D].北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2016.

[31] 徐國(guó)峰，耿興良，宋紹輝，等. Benzonase酶去除流感疫苗中Vero細(xì)胞DNA條件的優(yōu)化[J]. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2017，(05)：540-545.

[32] 劉鵬，李佳林，馬超，等.流感病毒在Vero細(xì)胞系與MDCK細(xì)胞系增殖條件的比較[J]. 微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展，2012，(05)：24-27.