李愛珍

（江西省黎川縣人民醫(yī)院藥劑科，江西 黎川 344600）

升麻別名龍眼根、窟窿牙根和周麻，屬毛莨科植物大三葉升麻、興安升麻或升麻的干燥根莖，歸于肺、脾、胃、大腸經(jīng)，有發(fā)表透疹、清熱解毒、升陽舉陷的功效，常用于治療頭痛寒熱、喉痛、口瘡、子宮下墜等病癥。異阿魏酸作為升麻的主要活性成分，有消炎、止痛、退熱的效用，以往醫(yī)者常以異阿魏酸含量評定升麻質量及藥效，隨著臨床研究深入，醫(yī)者發(fā)現(xiàn)不同炮制方法會影響升麻中異阿魏酸含量進而影響藥物功效及臨床治療效果[1-2]。本文運用HPLC法測定不同炮制方法對升麻中異阿魏酸含量的影響，進而為后續(xù)臨床用藥提供參考。

1 儀器與藥品

1.1 儀器 安捷倫1260Ⅱ高效液相色譜儀，安捷倫四元泵1200系列，紫外吸收檢測器Agilent1100，高效液相色譜柱溫箱，安捷倫色譜柱ZORBAX Eclipse Plus C18，中草藥高速粉碎機RT-02B，Precisa 321XJ系列電子天平。

1.2 藥品 本次研究所用升麻樣品從上海扶生實業(yè)有限公司購進，3種炮制品均選用同批次升麻樣品所制；選擇上海士鋒生物科技有限公司生產(chǎn)的異阿魏酸（產(chǎn)品型號：B100054；CAS號：537-73-5；規(guī)格：標準品，98%；包裝20 mg）作為對照品；同時購進甲醇和乙腈作為色譜純。

2 實驗方法

2.1 不同炮制方法酒升麻和醋升麻樣品炮制方法相同，具體操作如下：分別選取2份100 g升麻樣品將其放置于不同陶瓷鍋內(nèi)，精取20 mL米醋和黃酒緩慢倒入陶瓷鍋內(nèi)攪拌均勻后封蓋靜置4 h，之后將配制的天麻放于炒鍋內(nèi)小火炒干取出晾涼備用。

升麻炭制作：取100 g升麻樣品放于炒鍋內(nèi)大火炒至升麻表面焦黑，灑水后待火星燃盡取出曬干備用。所有炮制工作均由同一工作人員完成，分別炮制2份酒升麻、醋升麻及升麻炭，以保證后續(xù)操作的科學性及嚴謹性。

2.2 對照品及供試品溶液制作 對照品溶液制備：精取異阿魏酸1 mg將其放于量瓶內(nèi)加入適量10%乙醇混合配制19.64μg/mL對照品溶液待用。

供試品溶液制備：精取0.5 g升麻粉末加入25 mL 10%乙醇靜置于錐形瓶內(nèi)塞緊瓶塞后稱重，加熱2.5 h自然冷卻后稱重，并添加少許乙醇以補充加熱及冷卻失去的溶液，過濾出溶液中的天麻后備用。

2.3 色譜條件 色譜柱：選用Diamonsil C18（150 mm×4.60 mm，5μm）；流動相：乙腈－0.01%磷酸溶液（13∶87）；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25 ℃；檢測波長：315 mm；理論塔板數(shù)：5000。

2.4 線性關系、精密度、穩(wěn)定性及重復性考察 線性關系：精取對照品5、15、30μL，運用色譜條件測定異阿魏酸含量并繪制標準曲線，通過分析面積和異阿魏酸濃度測定線性回歸關系，進而分析峰面積與藥物濃度的關系，本次研究結果顯示異阿魏酸含量在0.098～0.982μg呈線性關系。

精密度：精取5μg對照品連續(xù)測定5次，計算發(fā)現(xiàn)RSD=0.27%（n=5），即具有良好精密度。

穩(wěn)定性：精取5μg供試品立即測定峰面積并于1、3、6、12 h再次測定峰面積，發(fā)現(xiàn)RSD=2.00%（n=4），證實供試品均具有良好穩(wěn)定性，可用于后續(xù)研究。

重復性：分別精取5份5μg升麻樣品嚴格按照供試品溶液制作方法配制溶液并測定所制樣品溶液中異阿魏酸含量，實踐發(fā)現(xiàn)所制備供試品溶液平均異阿魏酸含量為2.79μg/mg，RSD=1.70%（n=5），證實制作供試品溶液具有良好重復性。

2.5 回收率實驗 分別選取3份已測定異阿魏酸含量的20 mg升麻炭、20 mg醋升麻、20 mg酒升麻，按照供試品溶液制備方法制作供試品，制備完成后分別取10μL樣品測定溶液內(nèi)含有異阿魏酸含量，與對照品溶液內(nèi)異阿魏酸含量對比計算回收率發(fā)現(xiàn)其回收率分別為99.6%，RSD=1.90%（n=3）；101.2%，RSD=1.93%（n=3）；100.5%，RSD=1.91%（n=3）。

2.6 樣品中異阿魏酸含量測定 精取10μL對照品和供試品溶液運用安捷倫1260Ⅱ高效液相色譜儀于相同色譜條件下測定對照品和供試品溶液中異阿魏酸含量。本次研究所有測定結果均一式兩份，以保證研究的科學性及可行性。

3 結果

實驗結果發(fā)現(xiàn)，升麻生品中異阿魏酸測定含量為0.24%，酒升麻中異阿魏酸測定含量0.27%，醋升麻中異阿魏酸測定含量0.31%，升麻炭中異阿魏酸測定含量為0.41%，即阿魏酸含量升麻生品〈酒升麻〈醋升麻〈升麻炭。

4 討論

升麻始載于《名醫(yī)別錄》，作為臨床常用中藥材，根據(jù)產(chǎn)地分布可分為關升麻、興安升麻、川升麻，多于秋季采挖根莖，去除泥沙，曬至八九成干后去須根即可用以臨床醫(yī)療。研究發(fā)現(xiàn)，升麻中含有有機酸類、三萜類及呋喃色原酮類等物質，異阿魏酸作為升麻中有機酸重要組成部分，其含量直接影響升麻藥物活性，近年有學者研究發(fā)現(xiàn)不同炮制方法直接影響升麻制品中異阿魏酸含量及其藥物功效，筆者分析升麻生品、酒升麻、醋升麻和升麻炭中異阿魏酸含量發(fā)現(xiàn)，升麻生品〈酒升麻〈醋升麻〈升麻炭，即升麻炭中異阿魏酸含量最高，而升麻生品中異阿魏酸含量最低，證實不同炮制方法會影響異阿魏酸含量。

升麻可有效抗擊結核桿菌、金黃色葡萄球菌、卡他球菌，升麻提取物有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗驚厥、抑制血小板聚集的功效，同時可抑制氯乙酰膽堿、組織胺和氯化鋇誘發(fā)的腸管痙攣，降低血壓，減緩心率，該藥中含有的異阿魏酸在抗炎、解毒、鎮(zhèn)痛中具有良好效用，實驗發(fā)現(xiàn)異阿魏酸多以化合物形式存在，在炮制過程中易水解，進而影響藥物中異阿魏酸含量。異阿魏酸別名3-羥基-4-甲氧基肉桂酸，作為無色晶體，多從毛莨科植物三大升麻、興安升麻、升麻干燥根莖中提取所得，需避光低溫保存，若長期暴露于空氣中會降低藥物含量，同時該品具有良好降血糖效果，當前醫(yī)者提煉該藥物并將其應用于糖尿病患者的治療中，取得良好療效。

HPLC法較之傳統(tǒng)液相色譜法簡便易操作且具有良好穩(wěn)定性，筆者借助反相高效液相色譜法可快速測定樣品中異阿魏酸含量，有學者指出HPLC法分離測定藥物含量僅需30 min即可，可有效縮短測定時間，獲取準確數(shù)據(jù)[3]。馬桂娟[4]用固相萃取HPLC法測定保健食品中阿魏酸含量，以最大程度發(fā)揮其簡便、高效、便捷、精準的優(yōu)勢。李洋[5]運用反相高效液相色譜法測定不同炮制方法對升麻中異阿魏酸含量的影響，證實不同炮制方法會影響升麻樣品中異阿魏酸含量?？傊煌谥品椒〞绊懮橹挟惏⑽核岷?。