汪俊，王芳，史亞男

（1.武漢科技大學附屬漢陽醫(yī)院婦科，湖北武漢 430100；2.中山大學，廣東廣州 510275）

子癇前期（PE）是一種發(fā)生于妊娠期的特有疾病，多伴有多臟腑功能損傷或衰竭，重癥患者可見昏迷、抽搐、肺水腫、腦出血、心功能衰竭、血管內彌漫性出血，甚至死亡［1-3］。同時胎兒可見生長不同程度受限，早產(chǎn)等妊娠并發(fā)癥的發(fā)生概率顯著高于正常妊娠孕婦。子癇前期孕婦的遠期心血管系統(tǒng)疾病的患病風險也明顯高于健康妊娠的孕產(chǎn)婦。本病的發(fā)生機制與病因目前尚未完全明確，其發(fā)生與演進過程為多因素參與的復雜過程，具有病情變化多樣性及進展迅速的特征。目前臨床上普遍認為本病與血管的內皮細胞組織功能障礙、受損具有密切關系，甚至有將本病劃歸為血管內皮細胞損傷性的一種疾病。目前血管內皮功能障礙在心腦血管疾病臨床上已被作為動脈粥樣硬化（AS）的一項重要的早期指征應用于臨床診斷當中，同時氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）對于血管內皮組織所具有的直接性損傷起始作用已被心腦血管臨床所公認。白細胞介素-22（IL-22）與白細胞介素-24（IL-24）均為白細胞介素家庭的成員，在多種炎性疾病、腫瘤以及AS中均可見IL-22、IL-24的異常表達。因此我們將測定ox-LDL、IL-22、IL-24在子癇前期患者血清及胎盤組織中的表達水平并據(jù)此研究其在疾病中所發(fā)揮的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取武漢科技大學附屬漢陽醫(yī)院2015年1—12月收治的40例PE患者，根據(jù)患者病情將全部患者分為輕度組20例，重度組20例，另選取同期在武漢科技大學附屬漢陽醫(yī)院接受常規(guī)孕檢并順利分娩的20例作為對照組。PE患者均符合子癇前期相關診斷標準［4］。全部患者均為初產(chǎn)婦、單胎妊娠，均無胎膜早破、絨毛膜羊膜炎疾病，均無皮質激素應用史，無吸煙、酗酒等不良習慣，無放、化療史。均具有剖宮產(chǎn)指征并剖宮產(chǎn)分娩，對照組均因臍帶胎盤位置關系異常、胎位不正、高齡產(chǎn)婦以及頭盆不稱而接受剖宮產(chǎn)分娩。三組孕婦均排除合并原發(fā)性高血壓、糖尿病、妊娠糖尿病、腫瘤、全身感染性疾病、免疫系統(tǒng)疾病或功能障礙，心、肺、肝、腎臟嚴重疾病或功能異常的患者。全部入選患者均完全知曉本次研究內容，并自愿參與且簽屬了知情同意書；獲得武漢科技大學附屬漢陽醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑與儀器 本次研究中使用：BIORAD公司出品的酶標儀，拜耳公司出品的臺式離心機，奧林巴斯公司出品的光學顯微鏡。DR公司出品的ELISA試劑盒，ox-LDL兔抗人試劑盒、IL-22兔抗人試劑盒、IL-24兔抗人試劑盒、HRP羊抗兔標記二抗均購自Diagnostic Systems Laboratories公司；其它常用試劑均使用國藥生物化學公司制劑，使用Sigma公司出品的中性樹膠、伊紅、石蠟等；DAB試劑盒為中衫金橋公司出品。

1.2.2 血清中ox-LDL、IL-22、IL-24檢測 以ELISA法檢測全部研究對象血清中的ox-LDL、IL-22、IL-24濃度。全部研究對象均于清晨抽取空腹外周靜脈血液樣本5 mL，置于室溫條件下待凝集20 min，以2 000 r·min－1速度離心20 min，吸取上層血清。置于－80℃無菌環(huán)境下儲存。全部應用試劑放置于18～25℃條件下平衡30 min，嚴格依據(jù)試劑說明書制備試劑。ELISA操作嚴格按試劑盒的說明書執(zhí)行。終止反應后的5 min之內于450 nm的波長處以酶標儀按順序測定各孔吸光度值（A），使用專用Curve Expert-1.3軟件計算結果。

1.2.3 胎盤組織中ox-LDL、IL-22、IL-24檢測 以免疫組織化法檢測胎盤中ox-LDL、IL-22、IL-24表達水平。全部研究對象均于胎盤娩出后5 min之內于無菌環(huán)境下，于無出血點、無鈣化及梗死區(qū)域內的母體面胎盤中央處取1 cm3胎盤組織樣本，以冷生理鹽水進行沖洗，使用10%的中性福爾馬林液進行固定，以梯度酒精脫水后常規(guī)石蠟包埋，完全冷卻后做3～5μm厚切片，放入60℃的烤箱過夜，次日取出切片置于室溫條件下儲存?zhèn)溆?。行HE染色，切片進行常規(guī)脫蠟處理，水化后以蘇木素進行染色，使用自來水反復沖洗，以1%的鹽酸乙醇進行分化，流水返藍，以伊紅進行染色處理，自來水反復沖洗，以梯度乙醇充分脫水、透明處理后封片，于顯微鏡下對病理改變情況進行觀察。免疫組織化法根據(jù)試劑盒說明書滴加一抗、二抗，以顯微鏡進行觀察并采集圖像，使用Image Pro Plus 6.0進行結果分析，結果判讀采取半定量分析法，將5張無重疊圖像掃描至分析軟件內，選取有染色區(qū)域（AOI），測定AOI內的累積光密度（IOD），測定有效區(qū)域面積（area），由軟件據(jù)此按IOD／area公式計算出該區(qū)域內的平均光密度值，并以此作為ox-LDL、IL-22、IL-24在胎盤組織中的表達水平，表達水平越高說明陽性程度越高。

1.3 觀察項目 觀察三組患者的一般資料差異性，對比三組患者血清及胎盤組織中ox-LDL、IL-22、IL-24表達水平的差異性，分析血清ox-LDL表達與IL-22、IL-24表達的相關性，分析胎盤組織中ox-LDL、IL-22、IL-24表達水平與PE病情嚴重程度的相關性。

1.4 統(tǒng)計學方法 本次研究中所涉及全部數(shù)據(jù)均以手工輸入方式錄入至SPSS 17.0軟件，其中計量資料以x±s表示，使用單因素ANOVA檢驗，計量資料相關性采取Pearson分析并繪制線性回歸相關性曲線圖，等級資料與計量資料相關性采取Spearman分析。

2 結果

2.1 一般資料 三組患者年齡差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。重度組患者分娩時孕周顯著低于對照組與輕度組（P＜0.01）；對照組與輕度組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 三組一般資料比較／x±s

2.2 血清中ox-LDL、IL-22、IL-24表達 重度組患者血清中ox-LDL、IL-22、IL-24表達水平均顯著高于對照組與輕度組（P＜0.01）；輕度組顯著高于對照組（P＜0.01）；經(jīng)進一步統(tǒng)計學分析三組組間對比ox-LDL、IL-22、IL-24表達水平均差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表2。

表2 三組血清ox-LDL、IL-22、IL-24表達水平比較／x±s

2.3 血清中ox-LDL與IL-22、IL-24相關性分析血清中ox-LDL與IL-22、IL-24均具有顯著正相關性（0＜r＜1，P＜0.01）。見表3。

表3 血清中ox-LDL與IL-22、IL-24相關性分析結果

2.4 胎盤組織中ox-LDL與IL-22、IL-24表達水平 重度組患者胎盤組織中ox-LDL、IL-22、IL-24表達水平均顯著高于對照組與輕度組（P＜0.01）；輕度組顯著高于對照組（P＜0.01）；經(jīng)進一步統(tǒng)計學分析三組組間對比ox-LDL、IL-22、IL-24表達水平均差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表4。

表4 胎盤組織中ox-LDL、IL-22、IL-24表達水平比較／x±s

2.5 胎盤組織中ox-LDL、IL-22、IL-24與PE病情相關性 胎盤組織中ox-LDL、IL-22、IL-24表達水平與PE病情嚴重程度均呈顯著正相關性（0＜r＜1，P＜0.01）。見表5。

表5 胎盤中ox-LDL、IL-22、IL-24與PE病情相關性分析

3 討論

PE是婦產(chǎn)科臨床上一種常見的妊娠期特發(fā)疾病，對于孕婦與胎兒的健康均構成嚴重威脅［5-7］。目前，PE的病因與致病機制已經(jīng)成為了一項圍產(chǎn)期重要的研究課題。PE尚無一致公認的明確病因，臨床上以血管內皮組織功能損傷理論及滋養(yǎng)層的表層植入理念為主［8-10］。PE患者大多可見抗氧化及氧化失衡所致氧化應激反應。在疾病進展過程中，氧化應激反應生成大量的氧化自由基及諸多氧化劑，在這兩者的共同作用下，機體中的LDL通過一系列的反應而生成了大量的ox-LDL。ox-LDL可經(jīng)由諸多途徑誘使血管的內皮細胞發(fā)生凋亡，從而發(fā)揮損害血管的平滑肌與內皮細胞的作用，巨噬細胞與內皮細胞的清道夫受體能夠有效識別ox-LDL并與之相結合，于細胞內生成過量膽固醇積聚而成的泡沫細胞，屬于心腦血管相關疾病的一項獨立性高危因素。PE患者胎盤發(fā)生的急性AS與心腦血管早期AS近似［11］。PE患者血清中的ox-LDL表達顯著高于正常孕婦。IL-22是具有活性的淋巴樣組織的誘導細胞、NK細胞、NKT細胞及Th17細胞等分泌生成的免疫介質［12-13］。IL-22具有諸多生物學能力，主要可見對炎性反應的誘導、加快組織的再生與修復、抑制細胞的凋亡以及免疫調節(jié)作用等，可于不同的病理微環(huán)境下發(fā)揮保護或致病作用。IL-22能夠通過STAT3信號的通路起到上調拮抗凋亡蛋白Bcl-2系列中Bcl-w、Bcl-2及Bcl-xl的作用，并可經(jīng)由此通路下調促凋亡因子Caspase3的濃度，從而降低ox-LDL導致的內皮細胞的過度凋亡，協(xié)助血管內皮細胞的再生修復，延緩AS的進展過程。隨著子癇前期病程的演進，由ox-LDL刺激所致的內皮細胞損傷程度加劇，促使IL-22的表達代償性升高。即AS早期時IL-22表達可隨ox-LDL表達的升高而升高，IL-22的表達可見代償性升高，于AS早期時對患者的內皮細胞發(fā)揮保護性作用。本次研究中我們發(fā)現(xiàn)，IL-22的表達水平隨PE病情而升高，三組間呈逐級升高的表達水平，PE病情嚴重程度與胎盤中的IL-22的表達呈顯著正相關性。據(jù)此分析，PE應處于AS早期，隨PE病情程度的進展，在ox-LDL的持續(xù)刺激下內皮細胞的損傷呈持續(xù)性加重，促使IL-22的表達出現(xiàn)代償性的升高。

IL-24是人體內一項關鍵性的細胞因子，與IL-22一樣屬于白細胞介素體系中的一員，也稱為黑色素瘤分化基因-7（MDA-7），IL-24具有廣譜抗腫瘤細胞異常增殖及誘導腫瘤細胞凋亡的功能，并且可有效阻止或延緩腫瘤細胞的浸潤與播散。正常的早期孕絨毛組織及蛻膜組織中均能夠發(fā)現(xiàn)IL-24的陽性表達。血管的生成因子功能紊亂及全身性炎性反應與血管的內皮組織功能損傷的形成與進展均具有重要關系，PE的發(fā)病機制有可能因IL-24激活Fas，導致Fas／FasL死亡受體下行通路的開啟，調控線粒體的通路，誘導了組織內細胞的凋亡。本次研究中我們檢測到PE患者血清中的IL-24表達水平顯著高于對照組，重度PE患者血清中的IL-24表達水平顯著高于輕度組，三組血清中的IL-24表達與IL-22一樣呈階梯狀上升趨勢。因此可以推斷，IL-24對于血管上皮組織的損傷具有促進作用，因此隨PE病情的加重而逐漸升高。通過相關性分析可知，IL-24在胎盤組織中的表達水平與PE病情的嚴重程度呈顯著正相關性。同時血清中的IL-24、IL-22與ox-LDL呈顯著正相關，說明在ox-LDL、IL-24發(fā)揮促進PE患者血管上皮細胞損傷的同時，IL-22出現(xiàn)代償性上升。

綜上所述，PE患者血清及胎盤組織中的ox-LDL、IL-24表達升高可從多種層面與途徑誘導并形成血管內皮組織的損傷，加大血管的通透性，使血管中的蛋白與液體滲出，血管的活性因子紊亂，協(xié)助血管的收縮因子占據(jù)主導地位，而致使患者血管壓力加大，繼而發(fā)生PE相關的系列體征與臨床癥狀。然而，IL-22在這一病理過程中發(fā)揮著代償性的保護作用，隨疾病進展其表達水平出現(xiàn)代償性升高。鑒于PE早期時ox-LDL、IL-24表達即可見明顯升高，同時IL-22也隨之出現(xiàn)代償性升高，因此檢測妊娠期婦女血清中的三項指標有利于PE的早期診斷，并且在PE篩查中也具有獨特優(yōu)勢。隨著病情的進展ox-LDL、IL-24表達出現(xiàn)逐漸升高并促使IL-22表達水平隨之升高，三項指標的表達水平與病情進展呈顯著正相關性，提示監(jiān)測PE患者三項指標的表達水平有利對患者病情的進展程度作出正確評估，同時也可作為臨床治療效果的評估指標應用?？傊?，我們認為血清中ox-LDL與IL-22、IL-24表達水平對于PE的診斷、病情進展的判斷以及療效評估等均具有重要意義，胎盤中的ox-LDL與IL-22、IL-24的表達則對于明確PE病情、評估預后以及預后治療方案的選擇均具有重要意義。

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