王 留，郭全海，劉 鑫

（商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物工程系，河南 商丘 476000）

仔豬飼養(yǎng)管理是養(yǎng)豬生產(chǎn)中重要的環(huán)節(jié)之一，仔豬生理狀態(tài)和免疫功能強弱是仔豬飼養(yǎng)管理效果的直接反映，決定著仔豬的生長發(fā)育速度和抗病能力，仔豬飼養(yǎng)管理的好壞直接影響?zhàn)B豬生產(chǎn)的經(jīng)濟效益。改善仔豬的生理狀態(tài)和提高仔豬的免疫功能是養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)追求的目標之一，在養(yǎng)豬生產(chǎn)實踐中，大棗多糖、黃芪多糖、香菇多糖等多糖類物質(zhì)及果糖、甘露糖等寡糖類物質(zhì)用于提高仔豬的生理狀態(tài)和免疫功能已有大量的研究和報道[1-3]。蜂膠是一種具有多種生物活性的物質(zhì)，蜂膠中所含的黃酮類、黃酮醇類和雙氫黃酮類等生物活性物質(zhì)具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用[4-6]。本試驗在飲水中添加不同濃度的蜂膠乙醇提取物，測定斷奶仔豬血液生理數(shù)值，仔豬血清 α-腫瘤壞死因子（TNF-α）、γ-干擾素（IFN-γ）、白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-10（IL-10）等血清免疫因子含量和外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗，以評價蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬血液生理及免疫功能的影響，旨在揭示蜂膠乙醇提取物提高機體免疫功能的機理，為蜂膠產(chǎn)品的開發(fā)和在動物生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

真空采血管，BC-5800血細胞分析儀，TDL-5型臺式離心機，754型紫外可見分光光度計。α-腫瘤壞死因子（TNF-α）、γ-干擾素（IFN-γ）、白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-2（IL-2）、白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-10（IL-10）ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）檢測試劑盒均購自上海藍基生物科技有限公司。蜂膠乙醇提取物，商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物工程系藥理實驗室自制，詳見參考文獻[6]。

1.2 試驗設(shè)計

30頭28日齡健康、體重相近的杜長大三元雜種仔豬隨機分成空白對照組、試驗1組、試驗2組，每組10頭，各組均飼喂基礎(chǔ)飼糧。試驗期間，試驗1、2組飲水中分別添加終濃度為1、2 g/L的蜂膠乙醇提取物，自由飲水；空白對照組正常飲水。試驗期28 d。試驗于2017年6月3—30日在商丘牧原科技有限公司養(yǎng)豬場進行，斷奶仔豬采用高床飼養(yǎng)，保健與免疫按該場年度保健計劃與免疫程序進行。

1.3 血樣采集與處理

試驗結(jié)束時每頭豬前腔靜脈采血10 mL，分裝成兩管，其中一管肝素鈉抗凝，用于血液生理指標和外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗，另一管不作抗凝處理，室溫靜置3 h自然凝固，4 000 r/min離心10 min分離血清，-20℃凍存，用于血清免疫因子的測定。

1.4 指標檢測與數(shù)據(jù)處理

全自動血細胞分析儀測定仔豬血液生理指標，包括紅細胞數(shù)（RBC）、白細胞數(shù)（WBC）、紅細胞壓積（HCT）、血紅蛋白含量（HGB）。采用MTT法[7]測定外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率。TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10按照ELISA檢測試劑盒說明書進行操作。試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準差表示，采用SPSS 19.0統(tǒng)計處理軟件進行方差分析，P＜0.05判定為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬血液生理指標的影響

試驗結(jié)果顯示（表1），蜂膠乙醇提取物能夠提高試驗組斷奶仔豬血液中紅細胞數(shù)（RBC）、白細胞數(shù)（WBC）、血紅蛋白含量（HGB）、紅細胞壓積（HCT），但與空白對照組相比血液生理指標差異不顯著（P＞0.05）。

表1 蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬血液生理指標、淋巴細胞轉(zhuǎn)化率、血清免疫因子的影響

2.2 蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響

蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響見表1。試驗組斷奶仔豬外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率隨蜂膠乙醇提取物添加濃度的增加而隨之提高。飲水中添加2 g/L的蜂膠乙醇提取物的試驗組斷奶仔豬外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率與空白對照組相比差異顯著（P＜0.05）。

2.3 蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬血清免疫因子的影響

由表1可知，蜂膠乙醇提取物能夠提高斷奶仔豬血清免疫因子的含量。飲水中添加1 g/L的蜂膠乙醇提取物的試驗組斷奶仔豬血清免疫因子的含量與空白對照組相比有所提高，但是差異不顯著（P＞0.05）；飲水中添加2 g/L的蜂膠乙醇提取物的試驗組斷奶仔豬血清免疫因子的含量與空白對照組相比明顯提高，差異顯著（P＜0.05）。

3 討論與分析

3.1 蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬血液生理指標的影響

動物血液生理指標正常與否是動物有機體生命代謝、生理功能、抗病能力及健康狀況的內(nèi)在反應(yīng)，各血液生理指標的變化表明動物機體生理代謝與健康狀況發(fā)生了改變。動物臨床中測定的動物生理指標主要包括紅細胞數(shù)、白細胞數(shù)、紅細胞壓積、血紅蛋白含量。

紅細胞是血細胞中數(shù)量最多一種細胞，紅細胞不僅是血液運輸氧氣和二氧化碳的載體，紅細胞還具有識別抗原、提呈抗原、識別自我和非自我、清除免疫復(fù)合物、增強吞噬細胞的吞噬功能等重要的免疫功能[8]。白細胞是血細胞中一大類免疫細胞和吞噬細胞類群，白細胞中的嗜中性粒細胞和單核巨噬細胞是血細胞中的主要吞噬性細胞，是動物有機體炎癥反應(yīng)和天然免疫的第一道防線，抵御病原微生物等異物入侵動物有機體。白細胞中的單核巨噬細胞能夠吞噬、加工、提呈抗原，具有傳遞免疫信息和產(chǎn)生免疫因子的作用。動物血液中白細胞數(shù)量和組成比例直接影響著動物的免疫功能和健康狀況，當動物機體受到病原微生物感染或其他因素造成動物代謝與生理功能發(fā)生改變時，白細胞數(shù)量和組成比例都會發(fā)生相應(yīng)的變化[9]。血紅蛋白是紅細胞內(nèi)的主要功能性蛋白，是紅細胞運輸氧氣和二氧化碳的物質(zhì)基礎(chǔ)，同時血紅蛋白還是血液內(nèi)的緩沖物質(zhì)，能夠維持血液內(nèi)環(huán)境的相對穩(wěn)定。

蜂膠是蜜蜂在采制花粉和釀制蜂蜜過程中形成的一種天然產(chǎn)物，蜂膠中的黃酮類、黃酮醇類和雙氫黃酮類物質(zhì)具有多種生物學(xué)活性。本試驗在斷奶仔豬飲水中分別添加1、2 g/L的蜂膠乙醇提取物，結(jié)果表明蜂膠乙醇提取物能夠提高試驗組斷奶仔豬血液的紅細胞數(shù)、白細胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細胞壓積等血液生理指標，說明蜂膠乙醇提取物能夠提高斷奶仔豬的血液生理功能和改善仔豬的健康狀態(tài)。

3.2 蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響

細胞免疫是由細胞毒性T淋巴細胞介導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)，細胞毒性T淋巴細胞吞噬被感染的細胞以清除被感染細胞內(nèi)的病原體。體液免疫是由B淋巴細胞介導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)，B淋巴細胞在輔助T細胞誘導(dǎo)下產(chǎn)生抗體，以清除細胞外感染的病原體。外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率是指外周血淋巴細胞在體外受到非特異性有絲分裂原或特異性抗原刺激后，細胞體積增大、代謝旺盛、蛋白質(zhì)和核酸合成增加，轉(zhuǎn)變?yōu)槟苓M行分裂的淋巴母細胞。外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的高低反映動物機體免疫功能的強弱，可作為測定機體免疫功能的指標之一。據(jù)報道，蜂膠提取物能夠增加小鼠脾臟、胸腺等免疫器官指數(shù)，刺激小鼠脾臟淋巴細胞增殖、轉(zhuǎn)化，提高小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化率，改善小鼠的免疫功能[10-11]。本試驗結(jié)果顯示，斷奶仔豬飲水中添加2 g/L的蜂膠乙醇提取物能夠顯著提高仔豬外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率，并且外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率隨蜂膠乙醇提取物添加濃度的增加而提高。

3.3 蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬血清免疫因子的影響

細胞因子是由機體的造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)或炎性反應(yīng)中的活性細胞在抗原或有絲分裂原的刺激下產(chǎn)生的一大類具有廣泛生物學(xué)活性的多肽、蛋白質(zhì)或糖蛋白等異質(zhì)性調(diào)節(jié)因子，是免疫細胞之間的信息傳遞分子，在體內(nèi)能激活和調(diào)節(jié)免疫活性細胞，對機體的特異性免疫應(yīng)答發(fā)揮重要的調(diào)控作用。IL-1β是由活化的單核巨噬細胞分泌的一種細胞因子，具有調(diào)節(jié)免疫、促進炎癥和殺傷腫瘤細胞的作用。IL-1β調(diào)節(jié)免疫功能的作用機制可能是在抗原或有絲分裂原存在下通過刺激T淋巴細胞增殖、分化和分泌IL-2，并協(xié)同IL-2促進淋巴因子激活的殺傷細胞的產(chǎn)生，激活自然殺傷細胞。IL-2是由活化的輔助性T細胞分泌的一種具有廣泛的免疫調(diào)節(jié)功能的細胞因子，能夠促進T淋巴細胞分泌TNF-α等其他細胞因子，促進T、B淋巴細胞的增殖與分化，增強機體的細胞免疫和體液免疫應(yīng)答。IL-6是由活化的T淋巴細胞、單核巨噬細胞等分泌的一種細胞因子，能夠促進B淋巴細胞分化與成熟，并促進漿細胞分泌抗體。IFN-γ是由單核巨噬細胞分泌的一種細胞因子，能夠促進輔助性T細胞的分型轉(zhuǎn)化和提高中性粒細胞的吞噬能力。

本試驗結(jié)果表明，斷奶仔豬飲水中添加蜂膠乙醇提取物能夠提高仔豬血清免疫因子的含量，并且蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬血清免疫因子含量的影響呈劑量依賴關(guān)系。IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ等細胞因子可作用于機體內(nèi)免疫活性細胞，或促進其分化與增殖，或加強其活性與功能，或影響細胞內(nèi)生物活性分子的表達與分泌，從而促進機體免疫應(yīng)答，提高機體的免疫功能。

[1]王留，張代，劉秀玲.大棗多糖對斷奶仔豬血液生理生化指標及抗氧化能力的影響[J].畜牧與飼料，2013（10）：60-62.

[2]邊傳周，王老七.黃芪多糖對斷奶仔豬免疫功能及腹瀉的影響[J].畜牧與獸醫(yī)，2005，37（1）：10-12.

[3]文虹.果寡糖與甘露寡糖聯(lián)用對仔豬血液生化、免疫指標及生產(chǎn)性性能影響的研究[D].南昌：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

[4]王秉伋，張慧娟.北京蜂膠的化學(xué)成分研究 [J].中藥通報，1988，13（10）：37-38.

[5]遲家平，薛秉文，陳海生.遼西蜂膠黃酮類化學(xué)成分的研究[J].中國藥學(xué)雜志，1996，31（5）：264-266.

[6]王留，方磊涵，王向國.蜂膠乙醇提取物對斷奶仔豬生長性能和抗氧化功能的影響[J].養(yǎng)豬，2017（4）：15-16.

[7]Mosmann T.Rapid colorimetric assay for cellular growth and cytotoxicity assays[J].Journal of Immunology Methods,1983,65:55-63.

[8]李宏權(quán)，劉迎春，宋建德，等.動物的紅細胞免疫功能研究概述[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2002，22（3）：269-273.

[9]李佩國，薛瑞晨.動物生理學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)科技出版社，2000：26-28.

[10]朱旭，魏高文，陳書，等.蜂膠軟膠囊對糖尿病小鼠細胞免疫水平的影響[J].科教導(dǎo)刊，2016（2）：55-56.

[11]高春義，張建，趙躍然，等.蜂膠提取物抗腫瘤作用及對免疫功能的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2000，7（6）：27-28.