李曉瑩 遼陽市疾病預防控制中心 檢驗科 （遼寧 遼陽 111000）

亞硝酸鹽是一種致毒性、致死性很強的物質(zhì)，它進入人體在血中代謝的游離與血紅蛋白高效結(jié)合奪取血液中的氧，使中毒者很快窒息死亡[1]。亞硝酸鹽的致死劑量一般為3g，而可引起中毒癥狀的最低劑量為0.3g。血液是檢測亞硝酸鹽及其代謝產(chǎn)物最為敏感的指標，對于血液亞硝酸鹽含量檢測方法也有很多種，常見的一般使用的是化學分光光度、極譜法以及離子色譜法[2]。本文主要探究離子色譜法檢測全血中的亞硝酸鹽以及代謝產(chǎn)物濃度的實驗效力，評價這種方法的靈敏度和準確性是否可用于臨床輔助診斷，現(xiàn)報告如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

ICS-5000+型離子色譜儀（配備KOH淋洗液自動發(fā)生器、AS自動進樣器，美國ThermoFisher公司），entrifuge 5430型高速離心機（德國艾本德公司）[3]，SK-1型快速混勻器（金壇市順華儀器有限公司），Milli-pore Direct Q-5超純水儀（美國密理博公司）。乙睛（色譜純，德國Merck公司），標準品（水劑，以N計100mg/L，國家標準物質(zhì)研究中心）[4]，實驗用水為超純水。

1.2 方法

將Dionex OnGuard Ⅱ Ag柱和Na柱分別用10mL去離子水活化，Dionex OnGuard Ⅱ RP柱分別用5mL二甲醇、10mL二去離子水活化，流速均為2mL/min，活化時間均為30min[5]。靜脈抽取5mL中毒患者血液，置于15mL塑料離心管中，加入2mL乙睛沉淀蛋白，加入去離子水7mL，振蕩、混勻，5min后置于高速離心機以7800r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，取上清液分別經(jīng)過活化的Dionex OnGuardⅡRP柱、Dionex OnGuardⅡAg/Na柱及有機相性針式濾器，棄去前而3mL，流出液后開始收集濾液。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 22.0對所得資料進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，兩組比較P＜0.05表示有顯著統(tǒng)計學差異。

2.結(jié)果

血中蛋白的沉淀選擇乙腈更好，因為乙腈介電常數(shù)較乙醇、甲醇等更小，所以沉淀更快，用2mL的乙腈就可以將95%蛋白質(zhì)從1mL血液中沉淀析出，對樣品的pH值幾乎無干擾。

血中成分復雜，需要梯度分離。使用不同物質(zhì)去除不同離子，C18柱很好地去除有機物、Na柱很好地去除銀離子、Ag柱很好地去除Cl-。

色譜測定結(jié)果顯示，當NO2-的濃度在0.256～20.31mL/h，線性關(guān)系最為良好，線性方程為Y=0.0312X+0.4892，相關(guān)系數(shù)r為0.9871。測的的檢出限為0.16μg/mL，總回收率為96.3%～104.5%。

3.討論

亞硝酸鹽中毒在生活、公安案例中出現(xiàn)率不低。法醫(yī)人員對尸體的鑒定首先需要測定血中亞硝酸鹽的濃度[6]?？诜喯跛猁}中毒的患者在清洗胃內(nèi)容物時，需將胃內(nèi)容物過C18柱，留取有效檢驗成分，去除油脂、有機代謝消化干擾物[7]。對于檢測樣品的淋洗劑的選擇也有所將就，本次實驗在比較了10余種洗劑后，首選了Na柱來清除干擾離子，充分淋洗待檢測離子，使其成為最佳流動相，Na柱清洗后的游離子干擾因素最少，檢測準確程度最佳。當患者亞硝酸鹽中毒后一段時間，患者可能排除分泌物，而尿液可將部分排出而檢測不到，但不能因此判斷患者沒有中毒，需要進一步進行血常規(guī)的化驗來檢測血中是否含有中毒物，使用離子色譜法檢測血中的含量[8,9]。

綜上所述，離子色譜法高效、便捷、重復性良好、回收率優(yōu)、安全性高，適合較大批量樣品的檢測工作。在食品檢測中，離子色譜法也常被應用于檢測食物、水等亞硝酸鹽含量，所耗費用并不高，結(jié)果準確率高，可靠性好，為臨床檢驗提供科學準確的診斷依據(jù)。

[1] 唐磊,應劍波,高珊,等.離子色譜法檢測全血中的亞硝酸鹽及其代謝產(chǎn)物[J].中國法醫(yī)學雜志,2014,29(5):464-466.

[2] 王勇,左躍先,宋勝利,等.離子色譜法檢驗血液中的亞硝酸鹽[J].中國無機分析化學,2013,3(1):80-82.

[3] 王勇,左躍先.離子色譜法檢驗血液中的亞硝酸鹽[C].第五屆華東地區(qū)色譜、質(zhì)譜學術(shù)報告會論文集.2012:1-6.

[4] 林玉娜,羅曉燕,劉莉治,等.血清和尿中亞硝酸鹽含量的離子色譜測定法[J].職業(yè)與健康,2013,27(4):2-3.

[5] 李樹輝,黃向東,林曉冬,等.離子色譜法檢驗亞硝酸鹽[J].刑事技術(shù),2005,30(6):56-57.

[6] Suzuki O, Watanabe K, Okamoto N, et al. Simultaneous analysis of nitrite and nitrate in whole blood by ion chromatography[J].Journal of liquid chromatography and related technologies,2015,28(19):3077-3085.

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[9] Kage S, Kudo K, Ikeda N, et al. Simultaneous determination of nitrate and nitrite in human plasma by gas chromatography-mass spectrometry.[J].Journal of Analytical Toxicology,2012,26(6):320-324.