官檢發(fā)+陳應(yīng)

[摘要] 目的 構(gòu)建冬瓜子中C7H7NO2的含量測(cè)定方法。方法 研究對(duì)象購(gòu)置于2017年5月。通過 Diamonsil C18柱（4.6×250 mm 5 μm）；柱溫為25℃；流動(dòng)相為CH3OH-H2O-0.05% Sodium Dodecyl Sulfonate （5∶15∶80）；流動(dòng)相流速1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm；進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果 Linear relation analysis：25.2～201.6 μL/mL，線性關(guān)系優(yōu)異；Precision measurement：計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為（1.15±0.12）%，即為設(shè)備精密度優(yōu)異；stability test：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為（0.94±0.05）%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，對(duì)照品溶液在72 h中穩(wěn)定性優(yōu)異；Repeatability test：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為（1.68±0.11）%，即該方法的重復(fù)性優(yōu)異。結(jié)論 文中的測(cè)定方法及結(jié)果為評(píng)價(jià)冬瓜子藥材的質(zhì)量奠定了良好的基礎(chǔ)。

[關(guān)鍵詞] 冬瓜子；胡蘆巴堿；含量；測(cè)定

[中圖分類號(hào)] R5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2017）11（a）-0166-03

[Abstract] Objective To construct a measurement method of content of trigonelline in semen benincasae. Methods The research object was purchased on May 2017， Diamonsil C18 column （4.6×250 mm 5 μm）； column temperature： 25℃， mobile phase CH3OH-H2O-0.05% Sodium Dodecyl Sulfonate （5∶15∶80）； current velocity； 1 mL/min， test wave length： 265 nm， the sample size： 10 uL. Results Linear relation was excellent at 25.2～201.6 μL/mL， and the relative standard deviation （1.15±0.12）%， namely the excellent equipment precision， relative standard deviation（0.94±0.05）%， and the experimental results proved that the solution in the control group had an excellent stability and the relative standard deviation（1.68±0.11）%， and the repeatability of the method was excellent. Conclusion The measurement method and result in paper lay a good foundation for the evaluation of quality of medicinal materials of semen benincasae.

[Key words] Semen benincasae； Trigonelline； Content； Measurement

眾所周知，冬瓜子即為葫蘆科植物Benincasa hispida干燥成熟種子，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有所記載，具有較長(zhǎng)的藥用歷史[1]。冬瓜子具有清肺祛痰、排毒利濕的作用[2]。該文章研究對(duì)象購(gòu)置于2017年5月。以試析冬瓜子中胡蘆巴堿（C7H7NO2）的含量測(cè)定作為切入點(diǎn)，在此基礎(chǔ)上予以深入的探究，相關(guān)內(nèi)容如下所述。

1 實(shí)驗(yàn)材料

10批樣品通過鑒定為葫蘆科植物Benincasa的成熟種子；C7H7NO2參照品（批號(hào)110883-200502，含量測(cè)定用）。檢測(cè)裝置為Agilent 1200 高效液相色譜設(shè)備；常州市超聲設(shè)備有限公司KQ -500DE型超聲波清洗裝置（40 Hz，500 W）；使用SartoriusBP211D型電子稱。CH3OH為色譜純，H2O為高純水，其他試劑均為分析純。

2 方法及結(jié)果

2.1 方法

色譜條件：Diamonsil C18柱（4.6×250 mm 5 μm）；柱溫為25℃；流動(dòng)相為CH3OH-H2O-0.05% Sodium Dodecyl Sulfonate （5∶15∶80）；流動(dòng)相流速1 mL/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm；進(jìn)樣量10 μL [3]。

對(duì)照品制備：通過天平稱取C7H7NO2對(duì)照品，加CH3OH制成1 mL含 0.25 mg的溶液作為對(duì)照品溶液[4]。

供試品溶液制備：選4 g冬瓜子粗粉，放置在250 mL塞錐形瓶?jī)?nèi)，加C5H12 C6H14 C7H16 （60～90℃）60 mL，通過30 min的超聲處理，在此基礎(chǔ)上予以靜置處理，棄去C5H12 C6H14 C7H16，等藥渣完全干透，加入60 mLCH3OH，再通過60 min回流，放置一段時(shí)間等到完全冷卻后稱得重量，通過CH3OH填補(bǔ)損失的重量，最后予以搖勻及濾過處理。精密量取30 mL濾液，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行濃縮處理，殘?jiān)ㄟ^CH3OH溶解，放置于1 mL量瓶?jī)?nèi)，加CH3OH至刻度，予以搖勻處理，用0.5 μm微孔濾膜進(jìn)行濾過，作為供試品溶液[5]。

Linear relation analysis：分別吸取C7H7NO2對(duì)照品溶液1、2、4、6、8 mL，分別放到10 mL量瓶?jī)?nèi)，放置CH3OH稀釋到刻度，予以搖勻處理，取上述對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜設(shè)備，根據(jù)以上色譜條件予以檢驗(yàn)，記錄峰值。endprint

2.2 結(jié)果

Linear relation analysis：以C7H7NO2的量為橫軸（M），峰值即縱軸（A），在此基礎(chǔ)上繪制指標(biāo)曲線，A=1492 M+ 38.251（r=0.999 8），結(jié)果25.2～201.6 μg/mL線性關(guān)系優(yōu)異。見圖1。

Precision measurement：擇取50 μg/mL的對(duì)照品溶液，反復(fù)予以6次進(jìn)樣，通過上述色譜條件予以檢測(cè)，記錄峰值，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為（1.15±0.12）%，即為設(shè)備精密度優(yōu)異。

Stability test：選擇同一C7H7NO2對(duì)照品溶液，通過上述色譜條件予以檢測(cè)，在0、2、4、6、8、24、48、72 h予以檢測(cè)，記錄峰值，計(jì)算相對(duì)指標(biāo)偏差。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為（0.94±0.05）%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，對(duì)照品溶液在72 h中穩(wěn)定性優(yōu)異。

Repeatability test：精密稱取4 g同一批冬瓜子粗粉6份，根據(jù)上述方法制備樣品溶液，各予以3次進(jìn)樣，通過上述色譜條件予以檢測(cè)，在此基礎(chǔ)上記錄峰值，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為（1.68±0.11）%，即此方法的重復(fù)性優(yōu)異。

Recovery test：選擇9份已知含量的同一批冬瓜子粗粉各2 g，予以稱定，分別加入對(duì)照品溶液，根據(jù)上述方式制備供試品溶液。通過以上色譜條件予以檢驗(yàn)，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

Determination of sample：選擇差異批次的冬瓜子藥材粗粉，經(jīng)精密稱定，根據(jù)上述方法制備樣品溶液，通過上述色譜條件予以檢測(cè)，結(jié)果見表2。

3 討論

張志學(xué)等構(gòu)建了測(cè)定C7H7NO2的親水相互作用色譜-超高效液相色譜聯(lián)用分析法，質(zhì)量濃度線性區(qū)間為0.12～100 μg/mL，定量限為0.12 μg/mL，有效峰面積為（4 066.83±1 244.41），生物堿的相對(duì)生物利用率超過112%。該模式具有便捷、精準(zhǔn)、重復(fù)率優(yōu)異的特性。設(shè)備聯(lián)用分析法是把色譜設(shè)備作為質(zhì)譜儀的進(jìn)樣介質(zhì)，質(zhì)譜設(shè)備作為色譜儀的檢測(cè)裝置，把色譜設(shè)備的高分辨性和質(zhì)譜儀的高鑒別度進(jìn)行有機(jī)的結(jié)合，將兩種設(shè)備的優(yōu)勢(shì)整合在一起?，F(xiàn)階段，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法已成為C7H7NO2定量分析中十分常見方式。

袁明華構(gòu)建了電泳分析模式，對(duì)天然藥葫蘆巴內(nèi)的3種組分C7H7NO2、以及 NA予以分離及檢測(cè)。結(jié)果顯示，毛細(xì)管電泳在工作電壓為20 kW，電泳介質(zhì)濃度10 mol/L、酸堿值為7.8的硼砂-KH2PO4體系，（C2H4O）nC14H22O年-100與N，N-DMF體積分?jǐn)?shù)均為0.25%的條件下，可以在7 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)對(duì)3種有效成分的檢測(cè)。C7H7NO2峰面積與質(zhì)量飽和度線性關(guān)系優(yōu)異，線性范圍在3.0～200 μg/mL，檢測(cè)限為0.7、1.0、0.2 μg/mL，峰面積與遷移時(shí)間的 RSD：C7H7NO2為3.2%與1.3%，槲皮素為4.8%與0.83%，柚皮素4.3%與1.2% 。

依附于《中國(guó)藥典》[6]，C7H7NO2含量測(cè)定模式，發(fā)現(xiàn)C7H7NO2在已有色譜條件下供試品中分離性偏低，因此對(duì)流動(dòng)相的比例予以調(diào)整，進(jìn)而得到有效的色譜峰值，分離性優(yōu)異的流動(dòng)相，就是CH3OH-H2O-0.05% Sodium Dodecyl Sulfonate （5∶15∶80）[7]。

該次測(cè)定的10批樣品，4批為單邊，6批即雙邊。前者C7H7NO2的平均含量為0.004 875%，而后者胡蘆巴堿的平均含量為0.005 483%。雙邊樣品C7H7NO2平均含量要超過單邊樣品C7H7NO2含量。為冬瓜子內(nèi)具有一定的油脂，而且C7H7NO2的理化性質(zhì)無法溶于低極性溶劑，因此通過C5H12 C6H14 C7H16予以超聲處理進(jìn)而去除油脂[8]。對(duì)差異化的提取溶劑予以分析，發(fā)現(xiàn)CH3OH提取具有較高的有效性，分別對(duì)提取方式、提取時(shí)間以及CH3OH用量予以分析，最后明確CH3OH 60 mL，回流提取1 h。

C7H7NO2生物分布與來源相對(duì)廣泛，且具有一定的藥理作用，沒有顯著的不良反應(yīng)，可有效治療糖尿病、癌癥及高脂血癥，其開發(fā)前景十分廣闊。差異化的基質(zhì)對(duì)分析物產(chǎn)生的影響也各不相同，減少基質(zhì)影響，增加分析精準(zhǔn)度，即未來檢測(cè)所亟待解決的一個(gè)問題。在實(shí)踐環(huán)節(jié)，要依附于實(shí)際的檢測(cè)需要，擇取相適應(yīng)的檢測(cè)方式，對(duì)樣品可以快速、精準(zhǔn)的予以檢測(cè)及分析。伴隨分離技術(shù)、檢測(cè)方式的多元化發(fā)展，C7H7NO2的檢測(cè)模式在未將得到進(jìn)一步的完善。

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（收稿日期：2017-08-02）endprint