韋會(huì)平(通訊作者) 陳愷

（攀枝花學(xué)院醫(yī)學(xué)院 四川 攀枝花 617000）

在我們以往對(duì)“瑪咖不同提取物對(duì)雄性小鼠交配能力的影響”研究中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)瑪咖能顯著提高雄性小鼠的交配能力，其藥用活性成分主要存在于水提物中，且可能是多種成分共同作用的結(jié)果。本文在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步以攀枝花產(chǎn)瑪咖為研究對(duì)象，通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)觀察其對(duì)雄性小鼠精子生成能力的影響，揭示瑪咖提高小鼠性功能可能的作用機(jī)制。

1.材料與方法

1.1 藥品與試劑

瑪咖由攀枝花三博士科技有限公司提供，為產(chǎn)自四川省攀枝花市海拔3300的格薩拉風(fēng)景區(qū)的正品曬干黃瑪咖。苯甲酸雌二醇由寧波第二激素廠生產(chǎn)（批號(hào)20151121）。其它試劑均為市售分析純。SZX7型體視顯微鏡(日本，Olympus公司)；DMILLED 型倒置顯微鏡（德國(guó)，Leica公司），SC-100-01-02-C型一次性精子計(jì)數(shù)板（荷蘭，Leja公司），Direct-Q5型MilliQ超純水器（美國(guó)，Millipore公司）。其它有低溫高速離心機(jī)、電子天平、微量移液器、手術(shù)器械、眼科剪、眼科鑷、持針鉗、酒精燈等。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

6～8周齡清潔級(jí)昆明系小鼠，購(gòu)于重慶市中藥研究所動(dòng)物中心（動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(渝)20150006），雌、雄各半，體重18～22g。雌鼠群養(yǎng)，雄鼠單籠飼養(yǎng)，控制光照時(shí)間為每日7:00～18:00，飼喂普通飼料，自由飲水。

1.3 瑪咖提取物的制備瑪咖樣品粉碎，過(guò)40目篩，依次分別用10倍體積的石油醚、無(wú)水乙醇、蒸餾水在50℃下磁力攪拌回流提取3次，每次30 min，回收溶劑，再分別用1%聚山梨酯溶解，得到醚提取物、醇提取物、水提取物三種不同的混懸劑。另取等量瑪咖粉末樣品，混合用蒸餾水作溶劑進(jìn)行提取，同樣的方法制備得到混合水提取物的混懸劑。所有混懸劑瑪咖含量均相當(dāng)于生藥250mg/mL.

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1對(duì)雄鼠體重及性器官重量的影響50只成年雄性小鼠隨機(jī)平均分為6組：對(duì)照組（0.9%生理鹽水）、醚提取物組（5 g生藥/kg BW）、醇提取物組（5g生藥/kg BW）、水提取物組（5 g生藥/kg BW）及混合水提取物組（5g生藥/kg BW），各組均連續(xù)灌胃給藥28d，灌胃容積均為0.2mL/10gBW，qd。試驗(yàn)期滿后，將雄鼠頸椎脫臼致死，并解剖分離雄性性器官及附屬組織（睪丸，附睪，精囊和腹側(cè)前列腺），清洗附著的結(jié)締組織，精確稱重并計(jì)算臟器系數(shù)[4]。

1.4.2 對(duì)雄鼠精子生成的影響 雄鼠睪丸置于4mL37℃、0.9%生理鹽水中，用眼科剪剪碎，37℃溫育20min，使精子游離出來(lái)，過(guò)濾殘余組織后充分混勻，覆蓋礦物油至37℃保存。附睪尾精子懸液的制備同上[5]。采用一次性精子計(jì)數(shù)板分別對(duì)睪丸、附睪尾精子懸液進(jìn)行精子計(jì)數(shù)，計(jì)算睪丸精子日生成量（Daily Sperm Production,DSP），其計(jì)算公式為：DSP=睪丸總精子數(shù)/精子平均生成時(shí)間。其中，小鼠精子平均生成時(shí)間為4.84d[6]。

2.結(jié)果與分析

2.1 對(duì)雄鼠體重及性器官重量的影響結(jié)果見(jiàn)表1?，斂Р煌崛∥飳?duì)雄鼠體重及睪丸、附睪和精囊臟器系數(shù)的影響與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。

表1 瑪咖不同提取物對(duì)雄鼠體重及性器官臟器系數(shù)的影響（±s，n=10）

表1 瑪咖不同提取物對(duì)雄鼠體重及性器官臟器系數(shù)的影響（±s，n=10）

注：與對(duì)照組比較，*代表P＜0.05，**代表P＜0.01

組別 增加體重（g） 睪丸臟器系數(shù) 附睪臟器系數(shù) 精囊臟器系數(shù)對(duì)照組 18.53±1.87 0.671±0.091 0.225±0.083 0.113±0.077醚提取物組 17.82±1.69 0.658±0.097 0.221±0.059 0.108±0.046醇提取物組 18.12±2.01 0. 664±0.0630.226±0.074 0.112±0.069水提取物組 18.08±2.14 0.681±0.088 0.231±0.094 0.109±0.081混合提取物組 17.97±1.79 0.675±0.074 0.227±0.088 0.113±0.068

2.2 對(duì)雄鼠精子生成的影響結(jié)果見(jiàn)表2。

瑪咖不同提取物中醚提取物組、醇提取物組對(duì)雄鼠睪丸總精子數(shù)、DSP以及附睪尾總精子數(shù)無(wú)顯著影響，而水提取物組、混合水提取物組都可以顯著提高雄鼠睪丸總精子數(shù)、DSP以及附睪尾總精子數(shù)（P＜0.05）。混合水提取物組都的雄鼠睪丸總精子數(shù)、DSP以及附睪尾總精子數(shù)顯著高于水提取物組。

表2 瑪咖不同提取物對(duì)雄鼠精子生成的影響（±s，n=10）

表2 瑪咖不同提取物對(duì)雄鼠精子生成的影響（±s，n=10）

注：與對(duì)照組比較，*代表P＜0.05，**代表P＜0.01

附睪尾總精子數(shù)（107/g）對(duì)照組 89.32±6.17 18.45±1.26 13.53±1.33醚提取物組 88.12±8.74 19.24±1.94 14.15±1.67醇提取物組 91.56±6.54 18.92±1.36 13.88±2.01水提取物組 116.15±7.17* 23.00±1.49* 16.01±1.27*混合水提取物組 128.93±5.78** 25.37±1.18** 18.49±1.09**組別 睪丸總精子數(shù)（106/g）睪丸精子日生成量（106/g?d）

3.結(jié)論與討論

本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組對(duì)雄鼠體重及睪丸、附睪和精囊臟器系數(shù)都無(wú)顯著影響，而僅混合水提取物組和水提取物組而對(duì)睪丸總精子數(shù)、DSP以及附睪尾總精子數(shù)有顯著的增加作用。這充分說(shuō)明，瑪咖能顯著提高雄性小鼠的精子生成能力，其活性成分主要存在于水提物中。以往的很多試驗(yàn)都證明，瑪咖能顯著提高試驗(yàn)動(dòng)物的性功能[3-4,6-9]。本試驗(yàn)結(jié)果與與Gonzales C等人的研究結(jié)果較為一致[8]。

本試驗(yàn)中，攀產(chǎn)瑪咖在用石油醚、乙醇先行提取后，再用水提取得到的水提取物，和不用石油醚、乙醇先行提取，而直接用水提取得到的混合水提取物的藥用功效存在顯著差異。后者的睪丸總精子數(shù)、DSP以及附睪尾總精子數(shù)均顯著高于前者。這充分說(shuō)明在用石油醚、乙醇和水依次提取瑪咖的過(guò)程中，可能有部分藥用活性成分進(jìn)入了石油醚或乙醇的提取物中，導(dǎo)致水提取物的藥用功效顯著降低。而混合水提取物中，存在多種成分的共同作用，導(dǎo)致其對(duì)雄鼠精子生成的影響更為顯著。

有研究資料表明，關(guān)于瑪咖提高雄性性功能的機(jī)制，可能與其中含有的瑪咖酰胺、瑪咖烯以及豐富的精氨酸和果糖等關(guān)系密切[10-11]。王曦晨等人的研究表明，瑪咖水提浸膏具有提高半去勢(shì)大鼠的交配能力和陰莖勃起功能的作用，其機(jī)制可能與調(diào)整失衡的血清性激素水平有關(guān)[4]。我們以往對(duì)攀產(chǎn)瑪咖的測(cè)定分析表明，瑪咖中生物堿、水溶性多糖、精氨酸、Zn的含量都較高[12]。現(xiàn)代科學(xué)研究證明，這些成分本身與動(dòng)物的性能力、精子的生成或活力等都有一定關(guān)系。本試驗(yàn)中，瑪咖混合水提取物對(duì)雄性小鼠精子生成能力的影響要顯著高于水提取物，這證明瑪咖對(duì)小鼠性功能的影響極有可能是這些成分共同作用的結(jié)果。

綜上所述，本試驗(yàn)充分表明，瑪咖能顯著提高雄性小鼠的精子生成能力，藥用活性成分主要存在于水提物中，且可能是多種成分共同作用的結(jié)果。

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