黃云峰，黃致敬，羅燕飛，陸霜霜

（右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科，廣西 百色 533000）

近些年，我國(guó)遺傳病檢測(cè)技術(shù)發(fā)展迅速，已經(jīng)基本上可以與世界同步。但也有一些新檢測(cè)技術(shù)處于起步應(yīng)用階段，因此，需要面臨一系列的挑戰(zhàn)和問(wèn)題?；诖?，本文進(jìn)行一個(gè)簡(jiǎn)單的概括，以供與兒科同行一起研究與討論。

1 第二代測(cè)序技術(shù)分析

與第一代測(cè)序技術(shù)比較，第二代測(cè)序技術(shù)具有測(cè)速費(fèi)用低、速度塊等優(yōu)點(diǎn)，支持邊合成邊測(cè)序操作，從而在臨床疾病檢測(cè)中得到廣泛的使用?，F(xiàn)階段，主要包含以下幾種：全基因測(cè)序就是針對(duì)某種生物基因組內(nèi)的所有基因展開(kāi)測(cè)序，可以真實(shí)展現(xiàn)整個(gè)生物體所有的遺傳信息；全外顯子測(cè)序（WES）則是運(yùn)用目標(biāo)序列的捕獲技術(shù)，對(duì)基因組所有外顯因子進(jìn)行捕獲操作，并實(shí)施高通量測(cè)序的技術(shù)[1]。與全基因組測(cè)序比較，這種技術(shù)在包含蛋白編碼信息的基礎(chǔ)上，展現(xiàn)出成本低、測(cè)序周期短、便于分辨數(shù)據(jù)等優(yōu)勢(shì)[2]。但這種技術(shù)也有一定的局限性，難以了解非編碼序列是否出現(xiàn)改變，無(wú)法全面的了解基因組狀況。疾病靶向序列測(cè)序技術(shù)（DTS）工作原理與全外顯子測(cè)序，就是先要捕獲目標(biāo)需求，隨之開(kāi)展高通量測(cè)序。按需定制主要優(yōu)勢(shì)在于，能夠與某一類疾病、臨床表現(xiàn)有關(guān)的致病因子整合在一個(gè)基因測(cè)序包內(nèi)實(shí)施高通量測(cè)序操作，尤其適合用于臨床遺傳性病因異質(zhì)性強(qiáng)疾病檢測(cè)中[3]。DTS主要優(yōu)點(diǎn)為目標(biāo)區(qū)域比較集中，測(cè)序成本有所下降，有利于縮短測(cè)序及數(shù)據(jù)分析所用周期，進(jìn)而滿足臨床診斷要求。如今，DTS得以廣泛用于臨床診斷中，包含癲癇、先天遺傳代謝病、智力障礙等。上述疾病具有較強(qiáng)的異質(zhì)性，對(duì)于標(biāo)本取材、診斷比較困難的疾病，DTS因具有創(chuàng)傷小、可以同時(shí)檢測(cè)引起類似表現(xiàn)的幾十種甚至上百種基因優(yōu)點(diǎn)，能夠提前到臨床診斷后，在神經(jīng)病理等信息之前展開(kāi)檢測(cè)。必須注意，DTS也有一些不足之處，主要表現(xiàn)為：無(wú)法檢測(cè)出未知致病基因；DTS基因包可能優(yōu)于設(shè)計(jì)缺陷，導(dǎo)致所納入已知基因并不全面，導(dǎo)致發(fā)生關(guān)鍵遺傳信息遺漏的情況；新疾病或者表型有關(guān)基因被發(fā)現(xiàn)，DTS納入的基因需要不斷進(jìn)行更新，因此，優(yōu)秀的DTS檢測(cè)包需要定期更新納入基因。

2 拷貝數(shù)檢測(cè)技術(shù)分析

該技術(shù)主要由多重連續(xù)探針擴(kuò)增技術(shù)（MLPA）、微陣列比較基因組雜交（aCCH）組成，其中，aCCH是在芯片上使用攜帶不同熒光素的樣本和正常對(duì)照樣本展開(kāi)共雜交，此時(shí)，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于正常對(duì)照樣本基本組可知，病例樣本基因組DNA拷貝數(shù)發(fā)生改變。aCGH檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于，用來(lái)進(jìn)行單次檢測(cè)的DNA樣本量比較少，可以覆蓋整個(gè)基因組，且具有較高的分辨率[4]。而在國(guó)內(nèi)，使用aCGH技術(shù)最主要的問(wèn)題在于價(jià)格，從技術(shù)方面分析，aCGH無(wú)法檢測(cè)小于2 kb的DNA片段缺失或者重復(fù)情況。MLPA就是運(yùn)用探針和目的DNA序列實(shí)施雜交處理，依托連接、產(chǎn)物電泳分離等步驟對(duì)目的DNA序列展開(kāi)定性及半定量分析技術(shù)[5]。MLPA展現(xiàn)出試驗(yàn)周期短、操作方便等優(yōu)勢(shì)，進(jìn)一步確定基因是否重復(fù)或者缺失。與上一種技術(shù)對(duì)比，該技術(shù)的缺點(diǎn)在于，一次檢測(cè)區(qū)域范圍有一定的閑置，無(wú)法覆蓋整個(gè)基因組。MLPA技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是，其價(jià)格明顯低于aCGH，且操作簡(jiǎn)單，能夠快速分析數(shù)據(jù)，獲得良好的檢測(cè)信息。不得不說(shuō)，雖然遺傳性檢測(cè)用于兒科神經(jīng)系統(tǒng)疾病診治的作用越來(lái)越大，也需要清晰地看到每一種技術(shù)的局限性。例如：無(wú)法準(zhǔn)確展開(kāi)查體操作，確定患者臨床癥狀及體征，將共濟(jì)失調(diào)誤診為肌無(wú)力，那么，就無(wú)法正確挑選疾病靶向測(cè)序包，由于肌無(wú)力和共濟(jì)失調(diào)作為兩個(gè)不同的疾病靶向測(cè)序包，還必須了解所用測(cè)序包是否滿足自己檢測(cè)的目的。此外，還必須向患兒家長(zhǎng)說(shuō)明遺傳性檢查在臨床診治中的應(yīng)用價(jià)值。因此，不要濫用遺傳學(xué)檢測(cè)技術(shù)，醫(yī)者需要在與家長(zhǎng)進(jìn)行充分的溝通之后，由家長(zhǎng)決定是否讓孩子接受檢測(cè)。

3 結(jié) 論

綜上所述，優(yōu)于遺傳學(xué)檢測(cè)技術(shù)的迅速發(fā)展，檢測(cè)成本明顯下降，檢測(cè)準(zhǔn)確的得到相應(yīng)的提高。我們可以相信，遺傳學(xué)檢測(cè)會(huì)稱為臨床一種有效的技術(shù)手段用于兒科神經(jīng)系統(tǒng)診療工作中，不僅可以準(zhǔn)確診斷病情，也能為評(píng)估患者預(yù)后情況、特異性治療提供一定的依據(jù)。