付穎，董慶文，李新，王稚英，許王漢

（錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，遼寧 錦州 121000）

PRF對(duì)下頜骨牽引成骨區(qū)骨保護(hù)素表達(dá)的影響*

付穎，董慶文，李新，王稚英，許王漢

（錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，遼寧 錦州 121000）

目的探討富血小板纖維蛋白（PRF）對(duì)牽引成骨（DO）區(qū)骨保護(hù)素（OPG）表達(dá)的影響。方法將25只大耳白兔隨機(jī)分5組，分別行雙側(cè)下頜骨皮質(zhì)骨切開(kāi)術(shù)，一側(cè)下頜骨牽引間隙放置PRF膜，作為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)側(cè)作為對(duì)照組，分別于牽引穩(wěn)定期1、3、7、14和28d各處死一組動(dòng)物，將下頜骨DO區(qū)骨塊制成脫鈣石蠟切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅染色及OPG免疫組織化學(xué)染色，細(xì)胞圖像分析儀測(cè)量牽引間隙處骨痂OPG表達(dá)情況。結(jié)果下頜骨牽引處形成新生骨，免疫組織化學(xué)OPG染色主要表達(dá)在成骨細(xì)胞的胞漿中。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在穩(wěn)定期1、3、7、14和28d的OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論P(yáng)RF能促進(jìn)兔下頜骨DO區(qū)新骨的生成，OPG可能在DO過(guò)程的早期調(diào)控組織細(xì)胞應(yīng)力信號(hào)傳遞，發(fā)揮成骨作用。

下頜骨；牽引成骨；新骨形成；富血小板纖維蛋白；骨保護(hù)素

牽引成骨（distraction osteogenesis，DO）雖然已廣泛應(yīng)用，但是仍存在治療周期較長(zhǎng)、局部易感染不易愈合等缺點(diǎn)。富血小板纖維蛋白（platelet-rich fibrin，PRF）是一種自體靜脈血經(jīng)離心后的蛋白凝塊，能誘導(dǎo)組織再生和促進(jìn)愈合[1]，推測(cè)可能促進(jìn)DO新骨形成，縮短治療周期。在新骨的形成中，骨保護(hù)素（Osteoprotegerin，OPG）能間接抑制破骨細(xì)胞的分化、成熟，促進(jìn)新骨形成[2]。因此,本研究通過(guò)兔下頜骨DO模型，探討在DO局部應(yīng)用PRF膜的作用及OPG的表達(dá)，為促進(jìn)新骨的形成提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

北京大學(xué)王興教授設(shè)計(jì)的外置式下頜骨純鈦牽引器由西安中邦公司制作。牽引桿每旋轉(zhuǎn)1周，牽引器兩固定臂間隙增大0.4 mm。高速離心機(jī)（KLG，Osterrode，德國(guó)Sigma公司）、齒科低速手機(jī)、操作臺(tái)、器械及麻醉藥由遼寧醫(yī)學(xué)院科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供，OPG的SABC免疫組織化學(xué)法試劑盒（北京中杉金橋）。

1.2 儀器與設(shè)備

組織切片機(jī)（德國(guó)Leica公司，Leita1512），Vixwin2000圖像分析系統(tǒng)（美國(guó)Display公司），萬(wàn)能顯微鏡照相機(jī)（日本Olympus公司），CIAS-1000細(xì)胞圖像分析儀（北京大恒公司）。

1.3 方法

1.3.1 PRF膜的制備在無(wú)菌條件下，每只大耳白兔抽取靜脈血5 ml，先后2400 r/min離心10 min，3 600 r/min離心15 min，靜置后取出纖維蛋白凝塊，即PRF膜[3]，放入-70℃冰箱標(biāo)號(hào)備用。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組日本大耳白兔25只，體重2.0～2.5 kg購(gòu)自遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。在安靜、溫暖、避強(qiáng)光的環(huán)境中適應(yīng)性圈養(yǎng)1周，隨機(jī)分為5組，每組5只。復(fù)制雙側(cè)下頜骨DO動(dòng)物模型，一側(cè)牽引間隙處放置PRF膜，作為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)側(cè)為對(duì)照組，分別于牽引穩(wěn)定期1、3、7、14和28d處死。

1.3.3 下頜骨DO動(dòng)物模型的復(fù)制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按2.5 mg/kg經(jīng)耳緣靜脈注射10%平衡液全身麻醉后，在每只動(dòng)物一側(cè)下頜骨磨牙前部行骨切開(kāi)術(shù)，安放牽引器，并于間隙處放置PRF膜；另一側(cè)下頜骨磨牙前部行骨切開(kāi)術(shù)并安放牽引器作為對(duì)照組，骨膜復(fù)位縫合，分層縫合肌肉、皮膚，牽引器加力桿端暴露于口外，間歇期5d后，用牽引器按0.8 mm/d（2次/d，0.4 mm/次，間隔12 h）的速度緩慢延長(zhǎng)下頜骨。連續(xù)牽引5d，共延長(zhǎng)下頜骨4 mm后固定牽引器，進(jìn)入穩(wěn)定期。

1.3.4 光鏡標(biāo)本的制備與染色分別于穩(wěn)定期第1、3、7、14和28d處死1組動(dòng)物，將下頜骨修剪成以DO區(qū)為中心的12 mm長(zhǎng)組織塊，放入4℃、4%中性甲醛溶液中固定24 h。0.5 mol/L EDTA脫鈣，乙醇梯度脫水，透明，包埋，制成5μm厚切片，蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色，光鏡下觀察。

1.3.5 免疫組織化學(xué)法兔下頜骨DO區(qū)標(biāo)本放入4℃、4%中性甲醛溶液固定24 h，0.5 mol/L EDTA脫鈣后，流水沖洗過(guò)夜，脫水，石蠟包埋，制成5μm厚切片。切片于60℃烘烤30 min，脫蠟至水，10%過(guò)氧化氫液室溫5～10 min，0.02 mol/L PBS洗3次，5 min/次，切片浸入0.01 mol/L枸櫞酸鈉緩沖液（pH=6.0）微波修復(fù)抗原，滴加1∶100稀釋的一抗OPG抗體，4℃孵育過(guò)夜；滴加生物素化二抗，37℃水浴30 min，0.02 mol/L PBS洗3次，5 min/次，滴加SABC于濕盒中37℃水浴30 min，0.02 mol/L PBS洗3次，5 min/次，DAB顯色，取1 ml蒸餾水，加試劑盒中試劑，混勻后加到載玻片上，室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間，蒸餾水終止反應(yīng)，蘇木精復(fù)染胞核，脫水，透明，封片，鏡下觀察。PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大體觀察

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下頜骨均被成功延長(zhǎng)，術(shù)后7d內(nèi)咀嚼功能稍有障礙，不影響健康和基本活動(dòng)。牽引器固定穩(wěn)定，周圍無(wú)嚴(yán)重并發(fā)感染。取材時(shí)發(fā)現(xiàn)個(gè)別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中切牙明顯偏斜。

2.2 光鏡觀察HE染色

2.2.1 穩(wěn)定期1d兩組見(jiàn)紊亂排列的纖維結(jié)締組織，有大量增殖的成骨樣細(xì)胞。

2.2.2 穩(wěn)定期3d兩組間隙內(nèi)纖維結(jié)締組織沿牽引方向呈條束樣，實(shí)驗(yàn)組纖維結(jié)締組織更密集。見(jiàn)圖1。

圖1 穩(wěn)定期3d兩組纖維結(jié)締組織排列情況（HE染色×100）

2.2.3 穩(wěn)定期7d對(duì)照組膠原纖維束增多密集，沿牽引力方向有序排列。實(shí)驗(yàn)組于交界處有稀少的骨小梁。見(jiàn)圖2。

圖2 穩(wěn)定期7d兩組纖維組織及骨小梁排列情況（HE染色×100）

2.2.4 穩(wěn)定期14d對(duì)照組出現(xiàn)幼稚骨小梁，成骨細(xì)胞排列在其周圍并大量增生。實(shí)驗(yàn)組骨小梁增多，稀疏且不規(guī)則。見(jiàn)圖3。

圖3 穩(wěn)定期14d兩組骨小梁形成情況（HE染色×100）

2.2.5 穩(wěn)定期28d對(duì)照組骨小梁稀疏，分散，不連接，排列于骨斷開(kāi)方向。實(shí)驗(yàn)組骨小梁有序，連接緊密，成骨細(xì)胞在骨小梁周圍整齊排列。見(jiàn)圖4。

圖4 穩(wěn)定期28d兩組骨小梁形成情況（HE染色×100）

2.3 免疫組織化學(xué)法染色結(jié)果

2.3.1 穩(wěn)定期1d兩組DO區(qū)見(jiàn)大量增殖的間充質(zhì)細(xì)胞，新骨生成區(qū)OPG陽(yáng)性表達(dá)，主要集中在間充質(zhì)細(xì)胞的胞漿中。實(shí)驗(yàn)組增殖的細(xì)胞更明顯，OPG表達(dá)更多。見(jiàn)圖5。

2.3.2 穩(wěn)定期3d對(duì)照組DO區(qū)新骨OPG在大量增殖的間充質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞中表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組纖維束密集，OPG表達(dá)于沿牽引力方向排列的成纖維細(xì)胞的胞漿中。見(jiàn)圖6。

2.3.3 穩(wěn)定期7d對(duì)照組沿牽引力方向的成骨細(xì)胞胞漿中有OPG的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組在切開(kāi)邊緣的新生骨小梁周圍有表達(dá)。見(jiàn)圖7。

2.3.4 穩(wěn)定期14d對(duì)照組OPG表達(dá)于排列在少量骨小梁表面的成骨細(xì)胞胞漿中。實(shí)驗(yàn)組OPG表達(dá)于增多的骨小梁周圍的成骨細(xì)胞的胞漿中。見(jiàn)圖8。

2.3.5 穩(wěn)定期28d兩組新骨形成區(qū)，OPG表達(dá)于骨小梁周圍的成骨細(xì)胞胞漿中。見(jiàn)圖9。

2.4 OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)比較

兩組在牽引穩(wěn)定期1、3、7、14和28d的DO區(qū)OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)比較，采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果：①不同時(shí)間點(diǎn)OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)有差異（F=124.679，P=0.000）。②實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)有差別（F=3.650，P=0.015），實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組在DO區(qū)OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)高，能較好地促進(jìn)兔下頜骨DO區(qū)新骨的生成。③實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)變化趨勢(shì)有差別（F=119.093，P=0.000）。見(jiàn)圖10和表1。

2.5 OPG陽(yáng)性表達(dá)面積比較

兩組在牽引穩(wěn)定期1、3、7、14和28d的DO區(qū)OPG陽(yáng)性表達(dá)面積比較，采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果：①不同時(shí)間點(diǎn)OPG陽(yáng)性表達(dá)面積有差異（F=58.365，P=0.000）；②實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組OPG陽(yáng)性表達(dá)面積有差異（F=73.215，P=0.000），實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組高。③實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組OPG陽(yáng)性表達(dá)面積變化趨勢(shì)無(wú)差異（F=0.111，P=0.978）。見(jiàn)表2。

圖5 穩(wěn)定期1d兩組OPG在間充質(zhì)細(xì)胞的胞漿中呈陽(yáng)性表達(dá) （免疫組織化學(xué)法×400）

圖6 穩(wěn)定期3d兩組OPG在成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞中表達(dá) （免疫組織化學(xué)法×400）

圖7 穩(wěn)定期7d兩組OPG在成骨細(xì)胞胞漿中呈陽(yáng)性表達(dá)（免疫組織化學(xué)法×400）

圖8 穩(wěn)定期14d兩組OPG在成骨細(xì)胞胞漿中呈陽(yáng)性表達(dá) （免疫組織化學(xué)法×400）

圖9 穩(wěn)定期28d兩組OPG在少量骨小梁表面成骨細(xì)胞中表達(dá) （免疫組織化學(xué)法×400）

圖10 兩組OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)不同時(shí)間點(diǎn)變化趨勢(shì)

表1 兩組各時(shí)間OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)比較 （n =25，個(gè)，±s）

表1 兩組各時(shí)間OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)比較 （n =25，個(gè)，±s）

組別 穩(wěn)定期1d 穩(wěn)定期3d 穩(wěn)定期7d 穩(wěn)定期14d 穩(wěn)定期28d對(duì)照組 11.000±1.000 7.600±1.140 5.600±1.140 2.800±0.837 1.800±0.836實(shí)驗(yàn)組 14.600±0.894 11 600±1.140 10.000±1.871 5.200±1.304 2.600±1.140

表2 兩組各時(shí)間OPG陽(yáng)性表達(dá)面積比較 （n =25，μm2，±s）

表2 兩組各時(shí)間OPG陽(yáng)性表達(dá)面積比較 （n =25，μm2，±s）

組別 穩(wěn)定期1d 穩(wěn)定期3d 穩(wěn)定期7d 穩(wěn)定期14d 穩(wěn)定期28d對(duì)照組 0.219±0.046 0.168±0.026 0.120±0.026 0.074±0.019 0.044±0.025實(shí)驗(yàn)組 0.335±0.026 0.278±0.045 0.224±0.036 0.174±0.038 0.146±0.036

3 討論

DO技術(shù)已廣泛應(yīng)用于顱頜面外科領(lǐng)域，并取得較好的效果，但還有一定的局限性，尤其治療過(guò)程偏長(zhǎng)，患者攜帶牽引器不方便，影響美觀和生活質(zhì)量。隨著該技術(shù)的發(fā)展，如何縮短治療過(guò)程且保持DO的效果，是該領(lǐng)域研究的重點(diǎn)問(wèn)題。以往的研究中，許多生長(zhǎng)因子，如骨形態(tài)發(fā)生蛋白、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子（platelet-derived growth factor，PDGF）、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transforming growth factor-beta，TGF-β）及胰島素樣生長(zhǎng)因子（insulin-like growth factor，IGF）等都能促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖、分化，從而加速新骨的形成與重建，而哪些骨修復(fù)材料或生物材料能具備以上多種因子促進(jìn)骨生長(zhǎng)的特性呢？近幾年外科和種植方面研究較多的是富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）和PRF，而PRF膜是區(qū)別于傳統(tǒng)PRP的新一代血小板濃縮物，富含血小板、白細(xì)胞、多種生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子。有研究表明，其能使成骨細(xì)胞增殖、分化，促進(jìn)骨組織的修復(fù)愈合[4-6]。本實(shí)驗(yàn)HE染色結(jié)果提示，實(shí)驗(yàn)組在牽引間隙處加入PRF膜，新骨生成區(qū)的骨痂質(zhì)量高于對(duì)照組，PRF膜能加速骨的愈合與修復(fù)。由于PRF膜中的血小板能釋放PDGF、VEGF、TGF-β及IGF等，其對(duì)細(xì)胞的分化、血管增生和成骨細(xì)胞的增殖起促進(jìn)作用，同時(shí)還能抑制破骨細(xì)胞的功能。這些因子有著天然的比例，具有協(xié)同效應(yīng)并相互作用，共同維持著組織環(huán)境的平衡，對(duì)骨再生、愈合發(fā)揮重要的作用。

骨的愈合與修復(fù)需要多種細(xì)胞因子的相互作用。有研究顯示，PRF能調(diào)節(jié)VEGF、BMP-2、OPG、TGF-β1等多種生長(zhǎng)因子[7]。其中OPG和RANKL為骨的關(guān)鍵調(diào)控分子，在骨改建過(guò)程中，OPG具有抑制破骨細(xì)胞的增殖、分化、活化成熟及誘導(dǎo)破骨細(xì)胞的凋亡的功能，能通過(guò)與RANK結(jié)合，抑制RANKL與RANK的結(jié)合，從而抑制破骨細(xì)胞的形成、分化，進(jìn)而阻止骨的吸收[2]。OPG在DO過(guò)程中間隙處的表達(dá)與骨折斷端愈處的表達(dá)具有相似性。KON等[8]在鼠骨折后愈合過(guò)程中OPG表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn)，OPG在骨折后的1周內(nèi)表達(dá)較高，以后逐漸下降，4周后恢復(fù)正常。國(guó)內(nèi)祝為橋等[9]在大鼠的下頜DO區(qū)新骨形成的研究中發(fā)現(xiàn)，OPG和RANKL在早期表達(dá)明顯，以后逐漸下降。LI等[10]用原位雜交方法在對(duì)兔子的DO過(guò)程中OPG/RANKL/RANK的研究中發(fā)現(xiàn)，OPG/ RANKL比率對(duì)于骨的修復(fù)與生成起著重要作用。本實(shí)驗(yàn)的免疫組織化學(xué)法研究發(fā)現(xiàn)，OPG主要表達(dá)于新生骨痂組織中的成纖維細(xì)胞及增殖活躍的成骨細(xì)胞中。兩組在穩(wěn)定期1、3、7、14和28d的OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)有差異，且在穩(wěn)定期1、3和7d，牽引間隙處組織中OPG表達(dá)水平較高；隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，在牽引穩(wěn)定期14d，新生骨組織逐漸成熟，成骨細(xì)胞埋入骨基質(zhì)中，OPG表達(dá)水平降低；到穩(wěn)定期28d，新生骨小梁逐漸成熟、穩(wěn)定，OPG在成骨細(xì)胞中僅有微弱的表達(dá)。在穩(wěn)定期1、3和7d，由于成纖維細(xì)胞與成骨細(xì)胞等大量增殖，在其胞漿中大量表達(dá)OPG，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的OPG陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)有差異。隨著細(xì)胞增殖的逐漸減弱，成骨細(xì)胞表達(dá)OPG逐漸減弱，到穩(wěn)定后期，實(shí)驗(yàn)組新生骨痂處成骨細(xì)胞趨于穩(wěn)定。

DO間隙的愈合與成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞關(guān)系密切，PRF與牽引應(yīng)力同時(shí)作用于成骨細(xì)胞，新骨生成受牽引信號(hào)和PRF兩方面的調(diào)控。牽引力的施加對(duì)周圍組織有一定的刺激，引起局部生長(zhǎng)因子的釋放，本實(shí)驗(yàn)前期基礎(chǔ)研究顯示，在牽引早期能促進(jìn)OPG及其配體在DO區(qū)域的表達(dá)[11-12]。在本研究中，將PRF膜植入DO區(qū)，穩(wěn)定早期，牽引間隙處覆蓋PRF膜后，其表面形成纖維蛋白網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，期間有許多小孔，為大量增殖的成骨細(xì)胞等提供一定的增殖分化空間，并為骨斷端的愈合搭建支架，促進(jìn)牽引間隙處局部OPG濃度的增高。然后，局部高濃度的OPG與RANKL相結(jié)合，從而阻斷RANKL與RANK的結(jié)合，促進(jìn)骨合成代謝，增加骨小梁和骨密度表面新骨沉積，阻止?fàn)恳g隙的骨吸收，增加骨的厚度與強(qiáng)度。本實(shí)驗(yàn)的免疫組織化學(xué)法分析OPG發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組在穩(wěn)定期1、3和7d，OPG在增殖活躍的成纖維細(xì)胞和成骨細(xì)胞呈陽(yáng)性高表達(dá)，隨著時(shí)間延長(zhǎng)至穩(wěn)定期14d，成骨細(xì)胞等增殖逐漸減弱，OPG表達(dá)呈下降趨勢(shì)；穩(wěn)定期28d，牽引間隙處的成骨細(xì)胞不再大量增殖，趨于穩(wěn)定或減少，出現(xiàn)破骨細(xì)胞，在這一時(shí)期主要表現(xiàn)為是骨的改建與再塑形，以骨吸收為主，從而保持動(dòng)態(tài)的平衡關(guān)系。此時(shí)，HE染色發(fā)現(xiàn)，骨小梁周圍出現(xiàn)細(xì)胞核較大、胞漿少的大量成骨細(xì)胞，成行或復(fù)層排列，與李紹蘭等[13]的研究一致。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，局部應(yīng)用PRF膜可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖，能提高下頜骨新骨生成的速度和質(zhì)量，而且PRF可增加局部OPG在穩(wěn)定期早期的表達(dá)，在新生骨痂成熟后OPG的表達(dá)逐漸減弱。提示OPG可能在PRF促進(jìn)下頜DO的新骨生成中有重要的作用，為加快新骨的形成，縮短DO的治療周期，減少并發(fā)癥，以及臨床的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Effect of platelet-rich fibrin ondistraction osteogenesis and osteoprotegerin expression*

Ying Fu, Qing-wendong, Xin Li , Zhi-ying Wang, Wang-han Xu

(The Second Affiliated Hospital of Jinzhou Medical University, Jinzhou, Liaoning 121000, China)

ObjectiveTo investigate the effect of platelet-rich fibrin (PRF) on mandibular osteogenesis and the expression of osteoprotegerin (OPG) in the period ofdistraction osteogenesis.MethodsTwenty-five mature rabbits were randomlydivided into five groups, bilateral mandibular osteotomies were performed in the rabbits. PRF was implanted in one side of the mandible as experimental group. The other side of madible was taken as control group. The rabbits were sacrificed and thedistracted calluses were harvested and processed for HE and OPG immunohistochemical staining on the 1st, 3th, 7th, 14th and 28thday after the end ofdistraction. The expression of OPG in the calluses was analyzed by celldigital imaging soft-ware.ResultsThe regenerated bone was found in thedistraction gap after mandibular lengthening, OPG was co-localized in cytoplasm of osteoblasts and newly-embedded osteocytes. Compared with the control group, the OPG-positive cell number was statistically different in the experimental group on the 1st, 3th, 7th, 14th and 28thday afterdistraction (P＜ 0.05).ConclusionsOur preliminary resultdemonstrated that PRF increases new bone formation and has a positive effect on early bone healing. OPG may play important roles at the early stage of mandibulardistraction.

mandible;distraction osteogenesis; new bone formation; platelet-rich fibrin; osteoprotegerin

10.3969/j.issn.1005-8982.2018.02.003

1005-8982（2018）02-0014-06

R782.2

A

2016-04-18

遼寧省自然科學(xué)基金（No：2015020352）；遼寧省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（No：201510160000019）

李新，E-mail：httplixin@163.com；Tel：13841637172

（童穎丹 編輯）