黃崢 姜新華 吳小明

尿液巨細(xì)胞病毒核酸檢測(cè)結(jié)合全血細(xì)胞計(jì)數(shù)在小兒巨細(xì)胞病毒感染診斷中的應(yīng)用

黃崢 姜新華 吳小明

目的 調(diào)查兒童人巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染狀況，探討HCMV DNA、白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類的聯(lián)合檢測(cè)在小兒HCMV感染診斷與治療中的應(yīng)用價(jià)值。方法 采用FQ-PCR方法檢測(cè)518例不明原因支氣管炎、上呼吸道疾病、發(fā)熱等患兒尿液中的HCMV DNA含量，同時(shí)采集EDTA抗凝全血，進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)分析患兒具體信息、診斷和檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 HCMV DNA陽(yáng)性率49.2%，男患兒在1～≤3歲年齡段的檢出率最高，女患兒陽(yáng)性檢出率則隨年齡增長(zhǎng)逐年下降；淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與比例、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)在治療前后與正常對(duì)照比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而中性粒細(xì)胞比例則較正常對(duì)照顯著下降（P＜0.01）；兒童HCMV感染主要累及肺臟，引起疾病復(fù)雜多樣并以呼吸道疾病為主；經(jīng)1周治療后，HCMV DNA病毒載量與發(fā)病初期比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論 不同年齡組兒童間HCMV感染率不同，HCMV感染與性別有關(guān)，HCMV感染可導(dǎo)致WBC數(shù)量異常增高，尿HCMV DNA定量測(cè)定與WBC計(jì)數(shù)和分類的聯(lián)合檢測(cè)在不明原因呼吸道感染患兒的早期病因診斷與抗病毒治療動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)及療效判斷中有參考價(jià)值。

HCMV DNA 白細(xì)胞 支氣管炎 呼吸道感染 兒童

巨細(xì)胞病毒 （Human cytomegalovirus，HCMV）是世界范圍內(nèi)常見的導(dǎo)致新生兒產(chǎn)后感染和兒童病毒性感染的病原微生物［1］?；顒?dòng)性HCMV感染，其臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，病情輕重不一，易漏診、誤診；在免疫功能低下的人群中，可被激活而發(fā)生顯性感染和再次感染，累及多臟器、多系統(tǒng)，或可造成嚴(yán)重傷害［2］。本文探討HCMV DNA、白細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類的聯(lián)合檢測(cè)在小兒HCMV感染診斷與治療中的應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 2011年6月至2016年3月衢化醫(yī)院兒科收治的疑似呼吸道病毒感染患兒518例，男326例，女192例；年齡2個(gè)月～14歲。以同期體檢的健康兒童94例為正常對(duì)照。

1.2 方法 采用FQ-PCR方法檢測(cè)患兒晨尿中的HCMV DNA含量，試劑盒由杭州艾康生物技術(shù)有限公司提供，儀器采用羅氏cobas z 480熒光定量PCR儀；白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)與分類應(yīng)用Sysmex XE-2100五分類血液分析儀，sysmex原裝配套試劑。治療1周后復(fù)查。以HCMV-DNA＞500IU/ml為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 518例疑似呼吸道病毒感染患兒中，HCMV DNA陽(yáng)性255例，陽(yáng)性率接近50%。見表1。

表1 不同性別與各年齡段患兒HCMV-DNA陽(yáng)性檢出情況［n（%）］

2.2 合并HCMV-DNA陽(yáng)性的相關(guān)疾病分析，見表2。

表2 HCMV-DNA陽(yáng)性的相關(guān)疾病所占比例（n）

2.3 治療前后HCMV DNA定量、WBC計(jì)數(shù)與分類結(jié)果的變化 見表3。

表3 治療前后HCMV DNA定量、WBC計(jì)數(shù)與分類結(jié)果的變化（x±s）

3 討論

HCMV侵入人體后，可產(chǎn)生持續(xù)性感染，引起嚴(yán)重疾病，對(duì)優(yōu)生優(yōu)育及兒童的健康影響較大［3］。本資料結(jié)果表明，＜7歲兒童是活動(dòng)性HCMV感染的高發(fā)人群，在各年齡段男患兒的檢出率均高于女患兒，表明其感染與性別有一定關(guān)系，這一結(jié)果與武漢地區(qū)［1］的報(bào)道存在區(qū)別，這可能是地域差異導(dǎo)致，也可能是檢測(cè)方法靈敏度不同引起。在不明原因的支氣管炎、上呼吸道疾病、發(fā)熱等癥狀的＜3歲患兒中，56.8%的男患兒和49.1%的女患兒是因HCMV感染而發(fā)病，陽(yáng)性檢出率54.0%，顯著高于其他年齡組（P＜0.01）?？傮w陽(yáng)性檢出率49.2%，與湖南（46.3%）［4］、遼寧（45.0%）［5］等地報(bào)道結(jié)果相近。HCMV具有潛伏-活化的生物學(xué)特性，僅在個(gè)體免疫系統(tǒng)出現(xiàn)問(wèn)題、免疫力低下時(shí)，才易致?。?］。在本資料中，隨著年齡增長(zhǎng)，不論男女患兒的HCMV DNA陽(yáng)性檢出率均逐漸下降，＞7歲降為0，這與兒童的機(jī)體免疫力隨年齡增長(zhǎng)不斷增強(qiáng)有關(guān)。

HCMV感染于胎兒和新生兒可表現(xiàn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害和先天畸形，而在嬰幼兒則多表現(xiàn)為器官疾病，可影響多個(gè)臟器，缺乏特異性［7］。本資料顯示，衢化地區(qū)＜14歲兒童感染HCMV后主要以呼吸道疾病為主，與國(guó)內(nèi)其他文獻(xiàn)［8］報(bào)道結(jié)果相似，其中支氣管炎所占比例最大（39.9%），其次為上呼吸道疾?。?2.0%）、肺炎（9.3%）；感染主要累及的器官是肺臟，與陳平［8］等報(bào)道一致。此外，HCMV感染還可導(dǎo)致兒童胃腸炎、肝功能異常、驚厥等，有資料顯示，HCMV感染與難治性潰瘍性結(jié)腸炎存在關(guān)系［9］，而HCMV肝炎則可引起嬰幼兒膽汁性肝硬化，加重肝臟損害［10］，提示如臨床癥狀不典型伴有上述癥狀表現(xiàn)又無(wú)明確原因，應(yīng)考慮HCMV感染存在的可能。

WBC計(jì)數(shù)作為細(xì)菌和病毒感染最常用的指標(biāo)，通常認(rèn)為細(xì)菌感染時(shí)增高而病毒感染時(shí)降低，但本資料結(jié)果顯示，255例HCMV感染患兒中有75%在發(fā)病初期WBC異常增高，即使治療1周后，仍有65%異常增高，其余則在正常范圍，未發(fā)現(xiàn)異常降低的患兒，且發(fā)病初期與治療1周后WBC計(jì)數(shù)值均顯著高于正常對(duì)照（P＜0.01）。分析WBC分類結(jié)果，則符合病毒感染的臨床表現(xiàn)，淋巴細(xì)胞數(shù)量與比例、單核細(xì)胞比例在發(fā)病初期與治療1周后均較正常對(duì)照顯著增高（P＜0.01），而中性粒細(xì)胞比例則顯著低于正常對(duì)照（P＜0.01）。FQ-PCR檢測(cè)HCMV-DNA，在兒童HCMV感染早期診斷中的應(yīng)用已獲得廣泛認(rèn)可［11］，檢測(cè)所需的尿液標(biāo)本取材方便、無(wú)創(chuàng)，易被家長(zhǎng)和小兒接受。檢測(cè)原理是HCMV最易侵犯嬰幼兒管道上皮細(xì)胞，尿液中可檢測(cè)出HCMV是由于HCMV侵襲腎小球及腎小管上皮所致，其排毒的多少與尿液中受感染的上皮細(xì)胞含量有關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道［12］，該法靈敏性和特異性均高于pp65抗原檢測(cè)法和CMV-IgG法。但其在療效判斷中的應(yīng)用價(jià)值報(bào)道甚少。本資料結(jié)果顯示，HCMV感染患兒經(jīng)1周治療后，HCMV DNA病毒載量較發(fā)病初期下降顯著（P＜0.01），表明治療的有效性；與正常對(duì)照比較，無(wú)論發(fā)病初期還是1周治療后，HCMVDNA病毒載量的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示病毒受到抑制但并未徹底清除，HCMV感染的治療周期至少＞1周。

綜上所述，F(xiàn)Q-PCR對(duì)HCMV-DNA定量測(cè)定可作為病毒活動(dòng)性感染的一種敏感、特異、快速的檢測(cè)方法，臨床診斷WBC增高時(shí)不能排除HCMV感染的可能，結(jié)合WBC分類與HCMV DNA量化結(jié)果有助于評(píng)價(jià)感染狀態(tài)，是判斷藥物治療效果的有效手段。

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Objective To investigate the status of HCMV infection in children，combined detection of DNA and white blood cell count and classif i cation in the application value in the diagnosis and treatment of HCMV infection in children. Methods HCMV DNA content in urine of 518 patients with unexplained bronchitis，upper respiratory tract disease and fever were detected by FQ-PCR. EDTA anticoagulant blood was collected for CBC，analysis of children with specif i c information，diagnostic and statistical results. Results The positive rate of HCMV DNA was 49.2%，the male patients in the highest detection rate of 1～ is less than or equal to 3 years of age，the positive rate of female children decreased year by year；compared with the control group，there was significant difference in the percentage of lymphocyte count and the proportion of mononuclear cells（P＜0.01），while the proportion of neutrophils decreased signif i cantly（P＜0.01）. HCMV infection in children was mainly involved in the lung，resulted in a variety of diseases，including respiratory diseases；after a week of treatment，HCMV DNA viral load compared with the initial stage，the difference was statistically signif i cant （P＜0.01）. Conclusion HCMV infection rates are different among children of different age groups，HCMV infection is related to sex. HCMV infection can lead to abnormal increase in the number of WBC，the quantitative detection of urinary HCMV DNA combine the detection of WBC count and classif i cation in the early diagnosis of children with respiratory infection of unknown origin have reference value，also take effect for the dynamic monitoring and evaluation of therapeutic eff i cacy of antiviral therapy.

Human cytomegalovirus DNA Leucocyte Bronchitis Respiratory tract infection Children

310013 杭州迪安醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心（黃崢）

324004 浙江衢化醫(yī)院（姜新華 吳小明）