賈振宇 劉瑤 王超?

共刺激分子B7H3在結直腸癌血管中的表達及意義

賈振宇 劉瑤 王超?

目的 探討共刺激分子B7H3在結直腸癌血管中的表達及意義。方法 收集2013年5月至2016年5月結直腸癌手術切除標本60例，免疫組織化學法檢測血管內皮生長因子（VEGF）和B7H3的表達，并分析其與臨床病理間的關系。結果 結直腸癌血管中B7H3陽性表達率顯著高于癌旁組織血管（P＜0.05），同時VEGF在結直腸癌血管中陽性表達率亦顯著高于癌旁組織血管（P＜0.05）；B7H3在結直腸癌血管內皮細胞中的表達水平與患者性別、年齡、腫瘤位置、分化程度無相關性（P＞0.05），但與腫瘤Dukes分期密切相關（P＜0.05）；在結直腸癌血管中B7H3和VEGF的表達呈正相關（r=0.60，P＜0.05）。結論 B7H3在結直腸癌血管內皮細胞中存在高表達，其表達水平與腫瘤Dukes分期密切相關，血管中B7H3的表達可能與結直腸癌血管新生和腫瘤免疫逃逸密切相關。

結直腸癌 B7H3 血管內皮生長因子 血管新生 腫瘤免疫逃逸

結直腸癌的發(fā)生是一個緩慢的演變過程，其病死率在惡性腫瘤中居于第4位［1］。近年來，抗血管治療日益成為結直腸癌靶向治療的熱點，但同時其應用受到諸多因素的限制，導致結直腸癌的復發(fā)與轉移率仍處于較高水平［2］。血管新生與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，研究發(fā)現，在缺乏新生血管支持的情況下，惡性腫瘤僅局限于0.1～0.2cm［3］。血管內皮生長因子（VEGF）具有一定的免疫調節(jié)功能，能夠降低機體內的免疫監(jiān)視功能，從而促進免疫逃逸［4-6］。共刺激分子B7H3是B7家族新發(fā)現的一員，其在機體免疫調節(jié)中發(fā)揮著重要作用，有研究發(fā)現B7-H3在多種腫瘤血管內皮細胞中存在高度表達［7］。本文探討共刺激分子B7-H3在結直腸癌血管中的表達及意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集2013年5月至2016年5月本院結直腸癌患者60例，其中男34例，女26例；年齡40～83歲。所有患者術前均未接受化療、放療或其他針對腫瘤的治療，其中Dukes分期A期11例（18.33%），B期 22例（36.67%），C期 15例（25.0%），D期 12例（20.0%），術后病理均為結直腸腺癌。腫瘤組織取自腫瘤中央非壞死部分，同時取自切除瘤緣20cm的腸組織作為對照，其經病理學確認為正常組織。取上述組織標本保存于4%甲醛溶液中。

1.2 免疫組織化學法檢測VEGF、B7H3的表達 組織標本經石蠟包埋后連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、抗原修復、內源性過氧化物酶阻斷。5%牛血清蛋白37℃封閉30min，抗VEGF（1：100，武漢博士德公司）、抗B7H3（7.5μg/ml，美國RD公司）4℃過夜，PBS洗滌5min×3次，HRP標記的二抗37℃孵育30min，PBS洗片5min×3次，DAB顯色，蘇木精復染，逐級脫水，透明，中性樹膠封固。

1.3 免疫組化結果判定 免疫組織化學檢測結果按著色程度：（1）按切片中細胞著色深淺評分：0分：細胞未見顯色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。（2）按陽性細胞數占同類細胞數的比例，＜30%為 1分，30% ～70%為 2分，＞70%為 3分。?。?）、（2）兩項評分的乘積作為總積分，0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），≥4分為陽性（++）。

1.4 統計學分析 采用SPSS20.0統計軟件。計量資料以（x±s）表示，組間比較用單因素方差分析，計數資料比較使用χ2檢驗，相關性分析用spearman相關性檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 B7H3和VEGF在結直腸癌血管中的表達 B7H3在結直腸癌血管中表達率顯著高于癌旁血管，差異有統計學意義（P＜0.05）。VEGF在癌旁組和結直腸癌組血管內皮細胞中均有不同程度表達，但結直腸癌中表達率顯著高于癌旁組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 B7H3和VEGF在結直腸癌血管中的表達

2.2 B7H3在結直腸癌血管中的表達水平與臨床病理因素的關系 B7H3在結直腸癌血管內皮細胞中的表達水平與患者性別、年齡、腫瘤位置、分化程度無相關性（P＞0.05），與腫瘤 Dukes分期密切相關（P＜0.05）。見表2。

表2 B7H3在結直腸癌血管中的表達水平與臨床病理因素的關系

2.3 B7H3和VEGF在結直腸癌血管中表達的相關性分析 經spearman相關性檢驗，B7H3與VEGF在結直腸癌血管中的表達呈正相關（r=0.60，P＜0.05）。

3 討論

結直腸癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，在全球范圍內，每年約有超過100萬人確診為本病，嚴重威脅人類健康。結直腸癌的發(fā)生發(fā)展與腫瘤自身免疫、腫瘤血管新生密切相關。腫瘤微環(huán)境中存在多種免疫細胞及免疫因子的浸潤，其與腫瘤細胞相互作用，達到清除腫瘤細胞的作用，而惡性腫瘤常可以突破機體的免疫清除，從而逃避機體的免疫監(jiān)視。同時腫瘤細胞的生長增殖需要大量的氧氣與能量供應。研究發(fā)現，腫瘤細胞可依存于人體成熟的血管網絡，以此進一步發(fā)展成較小的腫瘤團塊，在正常情況下，機體可以識別這種共存關系，通過減少血流、抑制血管生成、切斷腫瘤血供達到抑制腫瘤生長的作用。但在低氧等刺激下，腫瘤細胞分泌大量VEGF等血管因子，抑制機體對腫瘤共生血管的識別作用，減少共生血管退化，進一步誘導新生血管發(fā)芽，促進腫瘤生長。同時當腫瘤細胞在遠處定植后，腫瘤微血管隨之形成，腫瘤細胞進一步生長形成轉移灶［8-10］。因此腫瘤血管新生與腫瘤進展及轉移亦密切相關。

B7H3是近年來新發(fā)現的協同刺激分子B7家族的成員之一，主要由T細胞、B細胞、樹突狀細胞在多種炎癥因子的刺激下誘導產生［11］。研究發(fā)現，B7H3在多種惡性腫瘤及間質中浸潤的免疫細胞中均有表達，被認為可能是通過提供負性信號來限制、和/或減弱T細胞免疫應答來介導腫瘤免疫逃逸，對于促進腫瘤進展與轉移、影響患者預后具有重要作用［12-16］。但B7-H3在腫瘤中發(fā)揮的作用尚未完全闡明。Zang等發(fā)現B7H3表達于卵巢癌血管內皮細胞中，并與組織學分型、臨床分期、疾病復發(fā)及預后密切相關［17］；Mesri等發(fā)現在人臍靜脈內皮細胞（HUVECS）轉染B7H3 siRNA后，可顯著抑制HUVECS的生長［7］。

本資料顯示，B7H3在結直腸癌組織血管中大量表達，且B7H3在結直腸癌血管內皮細胞中的表達水平與患者Dukes分期密切相關，進一步分析發(fā)現，B7H3與VEGF在結直腸癌血管中的表達呈正相關，而VEGF作為預測結腸癌預后的重要因子，其與結腸癌浸潤深度、Dukes分期、免疫逃逸及血管侵犯密切相關［4，18］。因此，作者認為血管內皮中表達的B7H3可能與結直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，其可能與影響腫瘤血管形成、促進腫瘤細胞免疫逃逸有關。

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Objective To explore the expression and clinical significances of co-stimulatory molecule B7H3 in the vessel endothelium of colorectal cancer. Methods 60 cases of colorectal patients were included in this experiment. The endothelial expression of VEGF and B7H3 were detected by immunohistochemistry. The correlations between B7H3 and the clinicopathological characteristics of CRC were also analyzed. Results The expressions of B7H3 and VEGF were signif i cantly increased in CRC group compared to control group（P＜0.05）. The endothelial expression of B7H3 was positively correlated with Dukes stage（P＜0.05），but had no signif i cant relations to the age，gender，tumour location and differentiation degree（P＞0.05）. The endothelial expression of co-stimulatory molecule B7H3 is positively correlated with VEGF（r=0.60，P＜0.05）. Conclusion B7H3 was increased in the vessel endothelium of colorectal cancer. The endothelial expression of B7H3 is positively correlated with Dukes stage. B7H3 may be participated in the angiogenesis and immune escape process of colorectal cancer.

Colorectal cancer B7H3 Vascular endothelial growth factor Angiogenesis Tumor immune escape

215000 蘇州大學附屬第一醫(yī)院

*通信作者