羅成群

（重慶市涪陵區(qū)焦石鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶 408000）

不同方法檢測(cè)布魯氏菌抗體的比較分析

羅成群

（重慶市涪陵區(qū)焦石鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，重慶 408000）

隨機(jī)采集重慶市涪陵區(qū)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的規(guī)模養(yǎng)殖戶和散養(yǎng)農(nóng)戶14085份牛、羊血清，采用RBPT、SAT和ELISA 方法對(duì)布病非免疫抗體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，采用RBPT方法檢測(cè)出陽(yáng)性81份，陽(yáng)性率為0.57%，SAT檢測(cè)出陽(yáng)性78份，陽(yáng)性率為0.55%，ELISA檢測(cè)出陽(yáng)性73份，陽(yáng)性率為0.52%。結(jié)果表明SAT和ELISA檢測(cè)方法具有較高的敏感性，在實(shí)際工作中，可采用RBPT方法對(duì)布病進(jìn)行初篩，SAT和ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行確診，本研究為本地區(qū)牛、羊布病防控、凈化工作提供了依據(jù)。

布魯氏菌 檢測(cè)方法 RBPT SAT ELISA

布魯氏菌?。╞rucellosis）以下簡(jiǎn)稱“布病”，是由布魯氏菌引起的一種廣泛分布于世界各地的人畜共患的傳染病，以生殖器官和胎膜發(fā)炎、母畜流產(chǎn)、不孕和公畜睪丸炎為主要臨床特征。據(jù)報(bào)道，在全世界現(xiàn)有的200多國(guó)家地區(qū)中，有布病報(bào)到的就有170個(gè)，30多個(gè)國(guó)家尚未報(bào)告有布病發(fā)生，還有16個(gè)國(guó)家和地區(qū)宣布沒(méi)有或已經(jīng)控制布病，而美國(guó)目前人間發(fā)病率仍在1/10萬(wàn)以上，對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類(lèi)健康造成了很大危害。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)布病系統(tǒng)性的研究有近150年的歷史，其間開(kāi)發(fā)了許多布病體外和體內(nèi)診斷方法，這些診斷方法服務(wù)于不同的應(yīng)用目的，例如：證實(shí)疫情發(fā)生、全國(guó)性普查、確診、國(guó)際貿(mào)易檢測(cè)以及“無(wú)布病”地區(qū)的布病監(jiān)測(cè)等等，如何選擇診斷策略取決于布病的流行狀況及檢測(cè)的目的。目前常用的檢測(cè)方法有：平板凝集試驗(yàn)（PAT）、虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）、試管凝集試驗(yàn)（SAT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)（PCR）等。

本研究采用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）、試管凝集試驗(yàn)（SAT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等常用的血清學(xué)檢測(cè)方法對(duì)布病非免疫抗體進(jìn)行檢測(cè)，以明確不同方法檢測(cè)的敏感性和特異性，以便以后針對(duì)性地選擇使用檢測(cè)方法提供依據(jù)，從而為我區(qū)布病的防控、凈化工作提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）試驗(yàn)試劑 布病虎紅平板凝集抗原、布病陽(yáng)性血清、布病試管凝集抗原，青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn)：布病競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)抗體檢測(cè)試劑盒，哈爾濱平河生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

（2）血清來(lái)源14085份血清均為2014年～2016年5月采自重慶市涪陵區(qū)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)農(nóng)戶。

1.2 方法

（1）虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）、試管凝集試驗(yàn)（SAT）

（2）競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 布病陽(yáng)性檢測(cè)率

14085份牛、羊血清樣品，采用RBPT方法檢測(cè)出陽(yáng)性81份，陽(yáng)性率為0.57%，SAT方法檢測(cè)出陽(yáng)性78份，陽(yáng)性率為0.55%，ELISA方法檢測(cè)出陽(yáng)性73份，陽(yáng)性率為0.52%。具體監(jiān)測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同檢測(cè)方法對(duì)布病的陽(yáng)性檢測(cè)率

2.2 不同檢測(cè)方法的符合率

14085份血清樣品，采用RBPT、SAT、競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)，采用RBPT方法檢測(cè)出陽(yáng)性81份；SAT檢測(cè)出陽(yáng)性78份，其中3份為RBPT檢測(cè)的陽(yáng)性血清樣品；競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)出陽(yáng)性73份，其中8份為RBPT檢測(cè)的陽(yáng)性血清樣品，5份為SAT檢測(cè)的陽(yáng)性血清樣品。結(jié)果顯示SAT和RBPT檢測(cè)方法的結(jié)果符合率為96.3%，競(jìng)爭(zhēng)ELISAR和BPT結(jié)果符合率為90.1%，競(jìng)爭(zhēng)ELISA和SAT結(jié)果符合率為93.59%。

3 討論

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)14085份牛、羊血清布病非免疫抗體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種檢測(cè)方法中，ELISA敏感性最高，而SAT檢測(cè)方法的敏感性也優(yōu)于PBPT。

血清學(xué)試驗(yàn)：主要檢測(cè)血清或乳中的布魯氏菌抗體。平板凝集試驗(yàn)（PAT）是布病血清學(xué)診斷的常規(guī)方法之一，通常用于布病普查的初篩，但PAT法有時(shí)可出現(xiàn)非特異性凝集，在基層獸醫(yī)檢測(cè)中已經(jīng)不適用PAT方法；目前RBPT是許多國(guó)家布病普查的常規(guī)方法之一，RBPT法檢出率與PAT基本一致，略低于SAT檢查感染動(dòng)物血清的陽(yáng)性率，但一般來(lái)說(shuō)，RBPT 并不能與 SAT、PAT、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）等相互替代，最好采取綜合診斷，主要用于布病早期診斷。

SAT一直是許多國(guó)家布病診斷的常規(guī)血清學(xué)方法，我國(guó)家畜布病檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)就是用SAT作為復(fù)核診斷方法。但單獨(dú)應(yīng)用SAT，可能出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性反應(yīng)，同時(shí)并不是所有感染動(dòng)物都出現(xiàn)具有診斷意義的抗體水平，因而易造成誤診和漏診。

ELISA是目前比較通用的血清學(xué)檢測(cè)方法，特異性、敏感性強(qiáng)，是國(guó)際貿(mào)易指定試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)證實(shí)ELISA試驗(yàn)較SAT敏感性高10～100倍，是布病診斷中不可缺少的方法之一。

在實(shí)際操作過(guò)程中，RBPT操作簡(jiǎn)便并且用時(shí)短，SAT出現(xiàn)結(jié)果時(shí)間較長(zhǎng)，是實(shí)驗(yàn)員肉眼觀察判定結(jié)果，具有很大的主觀性，ELISA方法監(jiān)測(cè)布病，操作便捷，敏感性高，結(jié)果更為準(zhǔn)確，因此在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)把三種方法結(jié)合起來(lái)運(yùn)用，互補(bǔ)優(yōu)劣。先用RBPT篩選，對(duì)疑似陽(yáng)性樣品再用SAT以及ELISA復(fù)檢進(jìn)行確診，從而達(dá)到布病防控和凈化的目的。

[1] 黎銀軍.我國(guó)布魯氏菌病時(shí)空分布及風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)研究[D].中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2013.