邢天一

食品安全問題已經(jīng)受到了人們的廣泛關(guān)注，因此，這也加強(qiáng)了人們對(duì)食品中物質(zhì)的研究。黃曲霉毒素是食品中致癌能力最強(qiáng)的一種毒素，同時(shí)，它具有著很強(qiáng)的生存能力特征，也是影響食品安全的主要物質(zhì)，為了保證食品的安全，就需要對(duì)這種毒素物質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)的研究，下面，本文就針對(duì)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)食品中的黃曲霉毒素實(shí)踐進(jìn)行探討，來研究黃曲霉毒素對(duì)食品安全的影響。

1.材料和方法

1.1材料和試劑

材料：市購(gòu)的花生、玉米、芝麻以及花生核桃乳制飲品、燕麥片。

試劑：黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中黃曲霉毒素放入B1、G1質(zhì)量濃度為1μg / m L，B2、G2質(zhì)量濃度為0.3μg / m L；乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、甲酸（分析純）、超純水等。

1.2儀器與設(shè)備

對(duì)黃曲霉毒素的檢測(cè)儀器主要是借助6430三重四極桿液質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)的，這個(gè)聯(lián)用系統(tǒng)配有1200高效液相色譜系統(tǒng)、電噴霧離子源（ESI）及Mass Hunter數(shù)據(jù)處理軟件；另外，主要儀器還包括Mycosep 226真菌毒素凈化柱、FA110電子天平、KQ2200E超聲波清洗器、Milli-Q 超純水儀等設(shè)備。

1.3儀器參數(shù)

儀器參數(shù)色譜條件：

色譜柱為ZORBAX Eclipse XDB-C18 柱（4.6mm×50mm，1.8μm）；流動(dòng)相為0.1%甲酸溶液-甲醇（60：40）；流速為0.4m L/min；柱溫為35℃；進(jìn)樣量：5μL。

儀器參數(shù)質(zhì)譜條件：

離子源為電噴霧離子源；干燥氣流速為12mL/min；干燥氣溫度為350℃；霧化氣壓力為50psi；毛細(xì)管電壓為4000V；質(zhì)量掃描范圍為100～500（m/z）；掃描模式為正離子模式；4種黃曲霉毒素的MRM掃描參數(shù)為如表：

1.4樣品處理

將選擇試驗(yàn)的樣品各取25g的量，然后將它們分別放入250mL的錐形瓶中，進(jìn)而再向錐形瓶中加入100mL乙腈-水溶液，快速攪拌3分鐘，讓它們混合均勻，再將溶液分別通過定性濾紙和Mycosep 226真菌毒素凈化柱，這樣就得到了相應(yīng)的凈化液，取一定量的凈化液通過0.22μm濾膜，進(jìn)而收集待進(jìn)樣。

2.結(jié)果和分析

2.1流動(dòng)相的選擇

黃曲霉毒素具有著自身的特點(diǎn)，它在甲醇和乙腈中溶解度比較高，因此，在對(duì)其流動(dòng)相的選擇上就可以分別選用甲醇和乙腈與水混合來進(jìn)行使用。6430三重四極桿液質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)使用中，其流動(dòng)相的選擇除了考慮其組分的洗脫能力，還要考慮其質(zhì)譜中是否能夠促進(jìn)所使用的樣品達(dá)到要求的標(biāo)準(zhǔn)的離子化效率。通過實(shí)驗(yàn)可以證明，乙腈作為流動(dòng)相時(shí)，其洗脫能力是略高于乙醇的，但是其離子化程度卻明顯不足，因此，在流動(dòng)相的選擇上常用于乙醇。

2.2質(zhì)譜條件的選擇

根據(jù)黃曲霉毒素的特征，通過電噴霧離子源可以很好的達(dá)到其離子化狀態(tài)，電噴霧離子源有兩種模式，分別為正離子模式和負(fù)離子模式，而對(duì)于黃曲霉毒素的離子化試驗(yàn)證明正離子模式下其離子化效率比負(fù)離子模式下的要高，因此，采用正離子模式來促進(jìn)四種黃曲霉毒素的離子化狀態(tài)，進(jìn)而將M+H作為四種黃曲霉毒素的母離子。

2.3凈化小柱的選擇

凈化小柱的選擇也是黃曲霉毒素檢測(cè)中的一個(gè)重要內(nèi)容，現(xiàn)階段使用的凈化小柱類型主要包括多功能凈化柱以及免疫親和柱兩種，在黃曲霉毒素檢測(cè)中，多功能凈化柱是采用復(fù)合材料進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)、色素等吸附，但是黃曲霉毒素是不會(huì)被吸附的，因此將樣品液體進(jìn)行凈化，得到黃曲霉毒素液體，但是這種方法出了凈化速度快，卻還存在一定的缺陷，它并不能有效全面的排除雜質(zhì)，因此，在實(shí)際的試驗(yàn)中選擇免疫親和柱方式來進(jìn)行凈化。

2.4線性范圍和檢測(cè)限

針對(duì)黃曲霉毒素樣品液體，取不同濃度的樣液按照選擇的色譜條件好質(zhì)譜條件來進(jìn)行進(jìn)樣處理，進(jìn)而將其表現(xiàn)的黃曲霉毒素含量和峰面積分別作為x和y軸進(jìn)行坐標(biāo)系的建立，進(jìn)一步得到相應(yīng)的線性方程和線性曲線，然后根據(jù)3倍和10倍信噪比計(jì)算出檢出限和定量限。

2.5精密度和回收率

在黃曲霉毒素樣品液體的試驗(yàn)中，對(duì)于其精密度以及回收率的測(cè)定，需要將每一個(gè)樣品液體中連續(xù)進(jìn)行5次進(jìn)樣，來測(cè)量其峰面積，進(jìn)而計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，進(jìn)而衡量樣液的精密度，進(jìn)而利用色譜條件和質(zhì)譜條件來計(jì)算其加標(biāo)回收率。然后根據(jù)黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)偏差表和加標(biāo)回收表來進(jìn)行對(duì)照，其標(biāo)準(zhǔn)偏差要小于5%，回收率要在80%-95%之間，才能說明這個(gè)方法的精密度和回收率是可以的。

3.通過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)食品中的四種黃曲霉毒素，這種方法首先是用乙醇流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，進(jìn)而在正離子模式質(zhì)譜下進(jìn)行監(jiān)測(cè)，進(jìn)而計(jì)算出四種黃曲霉毒素的檢出限，判斷相應(yīng)食品中的黃曲霉含量，這種方法不僅具有很高的準(zhǔn)確性，同時(shí)使用簡(jiǎn)單快速，具有很大的使用優(yōu)勢(shì)。

（作者單位：226000江蘇省南通市權(quán)證檢驗(yàn)檢測(cè)有限公司）