李玉琴+王英+李燕燕+李福玲

摘 要：目的：探討核桃分心木提取物總黃酮、總皂苷對(duì)家兔心肌缺血再灌損傷的影響。方法：30只家兔隨機(jī)分為5組，假手術(shù)組 單純?nèi)毖M，缺血再灌組 分心木治療A組 B組。結(jié)果：核桃分心木提取物總皂苷治療A組、B組與再灌注組相對(duì)比，血清中MDA含量明顯減少，SOD活性明顯增高，A組與B組相比，血清MDA含量和SOD活性差異不顯著。討論：提示核桃分心木提取物總皂苷可通過(guò)某種機(jī)制抑制脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程，提高內(nèi)源性抗氧化酶活性；而減輕心肌缺血一再灌注中產(chǎn)生的自由基對(duì)心肌細(xì)胞的損傷，具有抗氧化作用。

關(guān)鍵詞：核桃分心木提取物總皂苷；心肌再灌損傷；抗氧化

近年來(lái)，心血管疾病成為威脅人類健康的主要原因，而心肌梗阻的發(fā)病率亦呈上升趨勢(shì)，作為治療理想的手段：溶栓、血管擴(kuò)張及血管再造，可以有效提高心臟功能，但再灌損傷也越來(lái)越被醫(yī)務(wù)工作者關(guān)注。尋找新的安全有效的藥物用于防止心肌缺血再灌損傷成為醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)重要內(nèi)容。而對(duì)于再灌注損傷研究發(fā)現(xiàn)：缺血再灌過(guò)程中，缺血區(qū)會(huì)產(chǎn)生大量自由基是缺血再灌注損傷的重要機(jī)制之一——自由基損傷學(xué)說(shuō)。核桃分心木別名胡桃衣、胡桃夾、胡桃隔、核桃芯，為胡桃科植物胡桃JuglansregiaL果核的干燥木質(zhì)隔膜，功效固腎澀精，臨床主要用于遺精滑泄、遺溺尿頻、崩中、帶下。目前對(duì)于該藥材的研究文獻(xiàn)較少。隨著經(jīng)濟(jì)作物在我國(guó)的推廣，核桃在全國(guó)范圍內(nèi)的種植也越來(lái)越多，人們對(duì)核桃分心木的研究也重視起來(lái)。現(xiàn)代科學(xué)對(duì)核桃分心木的有效成分進(jìn)行了深入的研究，證實(shí)其中含有的總皂苷、總黃酮均有較強(qiáng)的抗氧化作用。許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究已經(jīng)證明：核桃分心木中的總皂苷和總黃酮，有較強(qiáng)的抗氧化活性，可以清除自由基、超氧離子。本實(shí)驗(yàn)利用家兔心肌缺血一再灌注模型，模擬人類的急性心肌梗死（acute myocardial infacction AMI）后的溶栓過(guò)程，通過(guò)檢測(cè)血清丙二醛（MDA）含量和超氧化歧化酶（SOD）活性，觀察其在心肌缺血-再灌注損傷的作用，以此來(lái)研究開發(fā)核桃分心木及連翹的新的藥用價(jià)值。

一、 材料與方法

1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成年家兔、體重2200-2900克、普通喂養(yǎng)、購(gòu)自本地家兔養(yǎng)殖戶。

2. 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與主要試劑：DH145型小型動(dòng)物呼吸機(jī)、巴比妥鈉、核桃分心木、SOD試劑盒、MDA試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

3. 實(shí)驗(yàn)方法：

（1） 核桃分心木中總皂苷的提取依據(jù)文獻(xiàn)[3]方法提取核桃分心木中的總皂苷。

（2） 動(dòng)物準(zhǔn)備。

（3） 缺血-再灌注模型建立：

建立家兔冠脈左前降支（LAD）缺血-再灌注模型：按文獻(xiàn)方法[4]。

①30只家兔耳緣靜脈注射2%或巴比妥鈉（45mg/kg）麻醉后仰位固定家兔固定臺(tái)上。

②行氣管切開術(shù)，并予以人工機(jī)械呼吸（嚙類動(dòng)物呼吸機(jī)，南京醫(yī)療設(shè)備公司DH145型）潮氣量30ml/次，呼吸頻率為40次/mim，吸入室內(nèi)空氣。

③沿胸骨左（3-5肋）開胸，剪開心包，暴露心臟＼＼于肺動(dòng)脈圓錐及左心房間找出LAD，在LAD下掛0號(hào)線以備可逆性結(jié)扎。

④分離左側(cè)頸內(nèi)靜脈，以備注藥。

⑤于腹主動(dòng)脈插管，以備取血清MDA含量及SOD活性測(cè)定。

二、 實(shí)驗(yàn)分組

將30只家兔經(jīng)上述處理后隨機(jī)分為5組，每組6只，分組如下：

（1） 假手術(shù)組，僅置線不結(jié)扎LDA，270 min后結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

（2） 單純?nèi)毖M，結(jié)扎LDA 30 min后結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

（3） 缺血-再灌組，結(jié)扎LDA 30 min后，再灌240 min結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

（4） 核桃分心木總皂苷治療A組，結(jié)扎前20 min于頸內(nèi)靜脈緩慢注射（10 mg/kg體重）結(jié)扎30 min后，再灌240 min結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

（5） 核桃分心木總皂苷治療B組，結(jié)扎LDA 5 min后，于頸內(nèi)靜脈緩慢注射分心木總皂苷（10 mg/kg體重），結(jié)扎30 min后，再灌240 min結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

假手術(shù)組、單純?nèi)毖M、缺血再灌組：分別于左側(cè)頸內(nèi)靜脈注射相應(yīng)量生理鹽水作對(duì)照。

1. 觀測(cè)指標(biāo)：

再灌注240 min末，動(dòng)物心臟取血3 ml，以3500 r/min離心15 min，分離血清，-20℃保存待測(cè)。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書，用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量，用黃嘌呤氧化酶法測(cè)SOD活性。

2. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用（x±s）表示，采用SPSS140統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，多組間比較用方差分析，P<0.05為差異有顯著性，P<0.01為差異有極顯著性。

3. 結(jié)果：

核桃分心木總皂苷對(duì)血清MDA含量及SOD活性的影響

各組在實(shí)驗(yàn)臨結(jié)束前于腹主動(dòng)脈取血清測(cè)血清MDA含量及SOD活性。

結(jié)果顯示：

缺血再灌注組與假手術(shù)組，單純?nèi)毖M相比，血清MDA含量明顯增加，而SOD活性明示降低（P<0.01）核桃分心木總皂苷治療A組與缺血再灌注組相比，血清MDA含量明顯減少，而SOD活性明示增高（P<0.05）；核桃分心木總皂苷治療A組與B組相比，血清MDA含量和SOD活性無(wú)差異（P>0.05），具體結(jié)果見表1：

三、 討論

如何減輕并防止心肌缺血再灌損傷是目前缺血性疾病防治過(guò)程中急需解決的一個(gè)難題，對(duì)心肌缺血再灌損傷的作用研究表明，心肌缺血再灌損傷的重要機(jī)制之一：是氧自由基的生成增多，使脂質(zhì)過(guò)氧化損傷導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）生成增多，SOD活性降低。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：心肌缺血再灌損傷后血清MDA含量明顯增加，SOD活性明顯降低，提示缺血再灌可產(chǎn)生的自由基引起心肌缺血再灌損傷，本治療后明顯降低血清MDA含量，提高血清SOD活性，提示核桃分心木提取物總皂苷有抗氧化作用，可使脂質(zhì)過(guò)氧化受抑制，同時(shí)提高內(nèi)源性抗氧化酶活性而減輕氧自由基對(duì)心肌的損傷.此抗氧化作用可能是其減輕心肌缺血再灌損傷的機(jī)制之一.與文獻(xiàn)報(bào)道【10】一致.治療組A與B相比，血清MDA含量和SOD活性無(wú)顯著差異，表明核桃分心木總皂苷用于心肌缺血前預(yù)防和心肌缺血再灌注前給藥均有效，提示核桃分心木總皂苷可能不僅能減輕心肌缺血再灌注損傷，且對(duì)心肌缺血再灌損傷有預(yù)防性作用。

總之，核桃分心木總皂苷在心血管疾病治療中具有一定的療效，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

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