張玲 焦博萍 李扉屏

/河北工業(yè)職業(yè)技術學院

黃芪甲苷含量測定方法研究進展

張玲 焦博萍 李扉屏

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綜述了黃芪甲苷含量測定方法的研究進展，包括薄層掃描法、高效液相色譜法、超高效液相色譜法等，評述每種方法的特點，為黃芪甲苷的含量測定提供參考。

黃芪甲苷；含量測定；研究進展

黃芪甲苷為黃芪的主要活性成分之一，生物活性強，具有增強機體免疫力、提高機體的抗病能力、抗病毒、抗應激功效、促生長、改善心肺功能的作用。目前主要采用黃芪甲苷作為評價黃芪藥材及其制劑質(zhì)量優(yōu)劣的標準。本文概述黃芪甲苷的含量測定方法。

1.薄層掃描法（TLCS）

薄層掃描法分為單波長和雙波長測定。雙波長掃描減少了干擾因素，提高了靈敏度，采用較多。此法設備簡單，操作方便、快速，應用廣泛，被2000版《中國藥典》采用為黃芪甲苷含量的測定方法。薄層掃描法的薄層板多采用硅膠G，展開劑多采用氯仿-甲醇-水(65:35:10)，顯色劑一般為10%硫酸乙醇。翟旭峰等[1]在實驗中發(fā)現(xiàn)，以正丁醇-醋酸乙酯-稀氨水 (4:1:5)為比例的上層溶液為展開劑,可使黃芪甲苷的斑點分離效果較好。

2.高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜兼有分離和分析功能，具有高分離效率、高靈敏度、測定快速等優(yōu)點，并且該方法避免了預處理的繁雜步驟，因此在中藥含量測定中應用廣泛。

2.1 UV檢測器

UV檢測器為最常用的檢測器，分為紫外吸收檢測器和光電二極管陣列檢測。黃芪甲苷在200.18nm處為最大吸收波長，為紫外末端吸收，通常測定波長多選用201～203nm。色譜柱主要是C18，流動相一般為乙腈-水，流速多為1mL/min。翟海云等[2]采用該法測定了復方補氣養(yǎng)血口服液中黃芪甲苷的含量，方法簡便可行、重復性好。

2.2 RI檢測器

RI檢測法簡單方便、重現(xiàn)性好，但是檢測靈敏度不高，被用于黃芪甲苷含量測定并不廣泛。

2.3 ELSD檢測器

蒸發(fā)光散射檢測器具有靈敏度高、適用性廣、干擾因素少等優(yōu)點，特別適合于黃芪甲苷這種紫外末端吸收，沒有特征吸收波長的情況，故被2005版和2010版《中國藥典》采用為的黃芪甲苷含量的測定方法。該法通常采用C18色譜柱，柱溫一般不超過40℃，流動相為乙腈-水或甲醇-水，流速一般不超過1mL/min。孫東東等[3]采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法對糖尿平膠囊中的黃芪甲苷進行了含量測定，色譜柱為KromasilC18(4.6×250mm,5μm)，柱溫：30℃，流動相為甲醇-水(76:24)，流速為1mL/min，ELSD漂移管溫度100℃，氣體流量為2.24SLPM；黃芪甲苷在2.51～7.53μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系，回收率達到101.80%，RSD=1.57%；該方法準確度高，重現(xiàn)性好，簡便快捷。

2.4 MS檢測器

質(zhì)譜分析具有靈敏度高、選擇性強、進樣量少、準確性好等特點。高效液相色譜和質(zhì)譜儀聯(lián)用可以定性、定量的分析復雜成分樣品和微量物質(zhì)，為體內(nèi)中黃芪甲苷和復雜樣品中黃芪甲苷的含量測定提供了方法。

HPLC-MS法多采用C18色譜柱，柱溫多選用室溫，流動相多為乙腈-水，梯度洗脫，流速一般不超過1mL/min。多采用電噴霧離子化（ESI）方式，選擇性離子監(jiān)測（SIM），檢測模式有正離子和負離子兩種。李晶等[4]應用HPLC-ESI-MSn法測定了黃芪藥材中黃芪甲苷的含量。色譜條件：色譜柱為Agilent SB-C18柱(4.6 mm×250mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.2%甲酸水(70:30，v:v)；體積流量為0.7 mL/min；檢測波長為203 nm；柱后 2:1 分流，三分之一流出液進行質(zhì)譜分析。質(zhì)譜條件：電噴霧正離子模式檢測；霧化氣壓力為35.0psi；干燥氣溫度為350℃，流速為8.0 L/min；黃芪甲苷選擇離子對為m/z 807.4→627.2；質(zhì)量掃描范圍為100～1000amu。結果表明黃芪甲苷在0.10～1.04 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關系，平均加樣回收率為96.51%。該方法具有簡便，快速和靈敏度高的特點，可用于黃芪藥材及其生物制品樣品中黃芪甲苷測定。

3.比色法

比色法是通過黃芪甲苷與顯色劑發(fā)生顯色反應后生成有色的物質(zhì)，再用分光光度計測定的方法，實際應用較少。根據(jù)顯色劑種類分為香草醛-冰醋酸比色法和香草醛-硫酸比色法。

4.熒光法

熒光法是利用黃芪甲苷與某些試劑反應生成在紫外光照射后能發(fā)射熒光的物質(zhì)的特性而定量分析的方法。此方法應用較少，根據(jù)試劑的種類分為香草醛-磷酸體系熒光法和茴香酸-硫酸體系熒光法。

5.超高效液相色譜（UPLC）

超高效液相色譜法是一個新興的領域，通過減小固定相的粒度，使色譜分離的解析度達到新的高度。超高效液相色譜具有高分離度、高速度和高靈敏度等優(yōu)點。因其分析精度高為一些需要深入研究領域提供了很好的方法。楊俊等[5]采用UPLC-ELSD法測定黃芪中黃芪甲苷的含量，色譜條件：色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18 (2.1mm×100mm，1.7μm)；流動相：乙腈-水(30:70)；流速為0.2mL/min；柱溫：30℃；ELSD檢測器漂移管溫度為45℃，載氣流速為2.6 L/min，理論塔板數(shù)以黃芪甲苷計算不低于4000，黃芪甲苷的保留時間為2.1min，結果表明黃芪甲苷在0.10～0.50mg/mL范圍內(nèi)有良好的線性關系。

6.結論

由于黃芪及其制劑成分復雜，前處理繁瑣，對于其中黃芪甲苷含量的測定研究很多，方法種類也不少。比色法和熒光分析法操作簡單、成本低廉、專屬性強，曾應用于黃芪甲苷的測定，但并不廣泛。薄層掃描法早期應用較多，但預處理繁雜，重現(xiàn)性差。隨著高效液相色譜的普及使用，尤其是蒸發(fā)光散射器，具有靈敏度高、受干擾因素少等優(yōu)點，目前多用于測定黃芪甲苷的含量。液相色譜和質(zhì)譜的聯(lián)用能對復雜樣品進行全面質(zhì)量控制，選擇性高、準確性好，近年來也應用于測定黃芪甲苷含量。隨著色譜技術不斷創(chuàng)新，超高效液相色譜和高分離度快速液相色譜的出現(xiàn)，大大提高了分析速率，縮短了分析時間，開始逐漸應用于黃芪甲苷的含量測定。

[1] 翟旭峰,劉法錦,郭用莊,廖彩震.薄層掃描法測定黃芪配方顆粒中黃芪甲苷的含量[J].中成藥.2003,25(8):651-653.

[2] 翟海云,吳燕紅,黃慶華,李苑新,袁旭江.RP-HPLC法測定復方補氣養(yǎng)血口服液中黃芪甲苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理.2009, 20(2):156-158.

[3] 孫東東,李祥,邱蓉麗,陳建偉.糖尿平膠囊質(zhì)量標準研究[J].時珍國醫(yī)國藥.2006, 17(3):385-386.

[4] 李晶,韋露莎,申旭霽,趙新鋒,王世祥,鄭曉暉.HPLCESI-MSn法測定黃芪藥材中黃芪甲苷[J].中成藥.2011,33(4):720-722.

[5] 楊俊,王文輝,王齊,孫曉東,朱艷琴.UPLC-ELSD法測定黃芪中的黃芪甲苷含量[J].光譜實驗室.2009,26(3):484-486.

科研項目：院級課題（ZY2016004）護心顆粒制劑工藝研究。