朱宣羽，張燕，丁子瑩，操鋒#（.中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥劑系，南京98；.國家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品評(píng)審中心，北京00089）

拉莫三嗪緩釋片的制備及體外釋放行為考察

朱宣羽1＊，張燕2，丁子瑩1，操鋒1#（1.中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥劑系，南京211198；2.國家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品評(píng)審中心，北京100089）

目的：改進(jìn)原研制備工藝，仿制拉莫三嗪緩釋片，并考察其體外釋放行為。方法：采用羥丙基甲基纖維素（HPMC）E4M CR和HPMC K100LV CR制備緩釋骨架片芯，以尤特奇?L30D-55為腸溶材料包衣，制備拉莫三嗪緩釋片。以與原研制劑體外釋放度的相似因子f2為指標(biāo)，采用單因素法篩選處方中乳糖用量、HPMC E4M CR和HPMC K100LV CR質(zhì)量比、HPMC用量及包衣增質(zhì)量。結(jié)果：片芯處方為拉莫三嗪50 mg、HPMC K100LV CR 40 mg、HPMC E4M CR 61.4 mg、乳糖128 mg，最佳包衣增質(zhì)量為3%。自制制劑和原研制劑在含0.5%十二烷基硫酸鈉的pH 6.8磷酸鹽緩沖液、pH 4.5乙酸-乙酸鈉緩沖液和水中的體外釋放行為均相似。結(jié)論：成功仿制了拉莫三嗪緩釋片，且工藝比原研制劑更加簡單、易行。

拉莫三嗪；緩釋片；腸溶包衣；體外釋放

拉莫三嗪（Lamotrigine）是新一代苯三嗪類廣譜抗癲癇藥，通過阻斷電壓依賴性鈉離子通道、抑制谷氨酸釋放，從而發(fā)揮抗癲癇作用[1]。其口服吸收好，生物利用度高，不存在肝藥酶誘導(dǎo)作用，發(fā)生藥物相互作用的幾率低，在臨床上廣泛應(yīng)用于癲癇患者的治療[2-3]。

GSK公司研制的拉莫三嗪緩釋片（Lamictal XR）于2013年在美國批準(zhǔn)上市。該制劑通過親水凝膠骨架片芯、腸溶包衣和“DiffCORE”釋藥技術(shù)3種方式控制藥物釋放。其中“DiffCORE”釋藥技術(shù)由英國GSK公司自行研發(fā)，主要體現(xiàn)在：于拉莫三嗪緩釋片直徑約9 mm的包衣片上削去部分腸溶層，形成2個(gè)（上、下面）直徑約5 mm的裸露片芯孔洞[4]。該技術(shù)對(duì)相關(guān)技術(shù)和設(shè)備要求高，難以被完全模仿，也難以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。

筆者初期在考察原研制劑的體外釋放行為后發(fā)現(xiàn)，原研制劑中的拉莫三嗪在0.01 mol/L鹽酸溶出介質(zhì)中2 h的累積釋放度僅為3%左右，這一結(jié)果也被相關(guān)研究者所佐證[5]。這意味著原研制劑采用“DiffCORE”釋藥技術(shù)后藥物在酸性介質(zhì)中的釋放行為與普通腸溶制劑類似，并未顯著增加，故筆者希望采用普通腸溶片的技術(shù)實(shí)現(xiàn)原研制劑同樣的釋藥效果。本試驗(yàn)采用普通腸溶片的技術(shù)，使用與原研制劑相同的輔料對(duì)拉莫三嗪緩釋片進(jìn)行仿制，通過調(diào)節(jié)骨架片芯處方和包衣增質(zhì)量來控制釋藥效果，以期制得在不同溶出介質(zhì)中與原研制劑有相似釋藥效果的拉莫三嗪緩釋片。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010cHT型高效液相色譜儀（日本島津公司）；pHS-25型pH計(jì)（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）；TDP型單沖式壓片機(jī)（上海天祥健臺(tái)制藥機(jī)械有限公司）；YPD-300D型片劑硬度儀和BY300A型小型包衣機(jī)（上海黃海藥檢儀器有限公司）；ZRS-8G型智能溶出儀（天津天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

拉莫三嗪原料藥（浙江華海藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：5629-13-001，純度：98.4%）；拉莫三嗪對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100775-200401，純度：100%）；拉莫三嗪緩釋片（原研制劑，商品名：Lamictal XR，美國GSK公司，批號(hào)：4ZP2831，規(guī)格：50 mg/片）；乳糖（德國美劑樂集團(tuán)）；羥丙基甲基纖維素（HPMC）E4M CR和HPMC K100LV CR（卡樂康技術(shù)有限公司）；硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料有限公司）；尤特奇?L30D-55（Eudragit?L30D-55，德國羅姆公司）；單硬脂酸甘油酯[嘉法獅（上海）貿(mào)易有限公司]；枸櫞酸三乙酯（蚌埠豐源有限公司）；聚山梨酯80（青島天力源生物科技有限公司）；甲醇為色譜純，乙酸銨、濃鹽酸、磷酸鈉、十二烷基硫酸鈉（SDS）、乙酸、乙酸鈉均為分析純，水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 拉莫三嗪緩釋片的制備

2.1.1 骨架片芯的制備參考美國FDA審評(píng)報(bào)告[6]和原研制劑相關(guān)專利[7]擬定片芯處方。稱取拉莫三嗪原料藥和乳糖，過80目篩后混勻，加入適量水為潤濕劑制軟材，過16目篩制濕顆粒，50℃下干燥2 h，過18目篩整粒。稱取處方量HPMC E4M CR、HPMC K100LV CR和硬脂酸鎂，過60目篩后混勻，加入干燥顆?；靹蚝髩浩ㄓ捕?～7 kg），制得骨架片芯。

2.1.2 緩釋片的制備參考尤特奇?L30D-55包衣液技術(shù)資料和使用指導(dǎo)[8]擬定包衣液處方。稱取尤特奇?L30D-55包衣液與水混合，攪勻，為包衣液A。稱取枸櫞酸三乙酯、聚山梨酯80與水混合，加入單硬脂酸甘油酯，于70℃水浴加熱至溶解，趁熱高速分散（3 000 r/min分散0.6 min），冷卻至室溫后為包衣液B。將包衣液B緩慢加入包衣液A中，攪拌40 min，采用BY300A型小型包衣機(jī)進(jìn)行包衣（轉(zhuǎn)速：30 r/min，溫度：30℃，流速：1.2 mL/min），達(dá)到目標(biāo)增質(zhì)量后于40℃下固化30 min，制得拉莫三嗪緩釋片。

2.2 拉莫三嗪的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件色譜柱：Dikma C18反相色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.8 g/L乙酸銨溶液（用乙酸調(diào)pH至4.5）-甲醇（32∶68，V/V）；流速：1 mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長：310 nm；進(jìn)樣量：50 μL。

2.2.2 方法學(xué)考察按2015年版《中國藥典》（四部）通則9101相關(guān)要求進(jìn)行方法學(xué)考察。結(jié)果顯示，拉莫三嗪質(zhì)量濃度（c）對(duì)峰面積（A）的回歸方程為A＝67 124c－6 560.7（R2＝0.999 6，n＝6），其線性范圍為2.5～80 μg/mL；高、中、低質(zhì)量濃度樣品的回收率分別為（101.14±0.42）%、（100.16±0.53）%、（98.63±0.39）%（n＝3）；精密度試驗(yàn)的峰面積RSD為0.78%（n＝6）；24 h內(nèi)穩(wěn)定性試驗(yàn)的含量RSD為1.14%（n＝6）。結(jié)果均符合相關(guān)規(guī)定。

2.3 體外釋藥考察

按2015年版《中國藥典》（四部）通則0931第二法（槳法）進(jìn)行操作。參考美國FDA公開的評(píng)審報(bào)告[6]后確定前2 h以700 mL的0.01 mol/L鹽酸溶液為釋放介質(zhì)，之后以加入200 mL磷酸鹽緩沖液（PBS）調(diào)整為900 mL含0.5%SDS的pH 6.8的PBS（0.05 mol/L）為釋放介質(zhì)。同時(shí)分別考察自制制劑在水和pH 4.5乙酸-乙酸鈉緩沖液中的釋藥效果。設(shè)轉(zhuǎn)速為50 r/min，溫度為37℃，取樣時(shí)間為2、5、7、12、15、24 h，取樣體積為5 mL（同時(shí)補(bǔ)充同溫等量相應(yīng)介質(zhì)），取樣液過0.45 μm尼龍濾膜后，取續(xù)濾液進(jìn)樣測(cè)定。采用外標(biāo)一點(diǎn)法根據(jù)峰面積計(jì)算相應(yīng)濃度和累積釋放度，繪制釋藥曲線。

2.4 單因素試驗(yàn)優(yōu)化緩釋片處方

2.4.1 乳糖用量乳糖遇水后快速溶解，使片芯中形成大量孔道，從而改變骨架片的溶蝕行為，影響藥物的釋放，因此需要對(duì)乳糖用量進(jìn)行考察。固定拉莫三嗪用量為50 mg，HPMC K100LV CR用量為40 mg，HPMC E4M CR用量為61.4 mg，包衣增質(zhì)量為3%，包衣液處方為尤特奇?L30D-55 8.26 g、檸檬酸三乙酯0.46 g、聚山梨酯80 0.09 g、單硬脂酸甘油酯0.24 g、固含量為20%～25%，按“2.1”項(xiàng)下方法制備乳糖用量分別為68、128、188 mg的拉莫三嗪緩釋片，記為F1、F2、F3。按“2.3”項(xiàng)下方法繪制上述拉莫三嗪緩釋片和原研制劑在含0.5%SDS的pH 6.8的PBS中的釋藥曲線，采用相似因子（f2）法[9]比較自制制劑與原研制劑的相似性。結(jié)果顯示，乳糖用量與拉莫三嗪緩釋片的釋放速率呈正相關(guān)，F(xiàn)1、F2、F3與原研制劑釋藥曲線的f2分別為41.33、74.26、40.71（n＝6），以f2越大越相似為標(biāo)準(zhǔn)，確定128 mg為乳糖用量。F1、F2、F3中骨架片芯的處方組成見表1，釋藥曲線見圖1。

表1 單片拉莫三嗪緩釋片中骨架片芯的處方組成（mg）Tab1FormulationcompositionsofoneLamotriginesustained-release tablet（mg）

2.4.2 HPMC比例由于HPMC的黏度會(huì)影響骨架片芯的溶蝕行為，通過調(diào)整低黏度HPMC K100LV CR和高黏度HPMC E4M CR的比例可控制藥物在骨架片芯中的釋放行為。按“2.4.1”項(xiàng)下處方量和方法，制備不同質(zhì)量比（40∶61.4、30∶71.4、35∶66.4、45∶56.4）HPMC K100LV CR-HPMC E4M CR的拉莫三嗪緩釋片，記為F2、F4、F5、F6。按“2.3”項(xiàng)下方法繪制上述拉莫三嗪緩釋片和原研制劑在含0.5%SDS的pH 6.8的PBS中的釋藥曲線，比較其相似性。結(jié)果顯示，HPMC E4M CR比例越高，緩釋材料黏度越大，自制制劑釋放越慢。F2、F4、F5、F6與原研制劑釋藥曲線的f2分別為73.62、33.77、48.27、33.24（n＝6），故確定40∶61.4為HPMC K100LV CR-HPMC E4M CR的質(zhì)量比。F2、F4、F5、F6中骨架片芯的處方組成見表1，釋藥曲線見圖1。

圖1 單因素試驗(yàn)的釋藥曲線（±s，n＝6）Fig1Drugreleasecurvesofsinglefactor test（±s，n＝6）

2.4.3 HPMC總量緩釋材料的總量將影響凝膠骨架的降解速度，而藥物的釋放行為與凝膠骨架的降解速度有關(guān)。因此，在確定HPMC比例的情況下，分別比較不同總量（101.4、71.4、91.4、121.4 mg）HPMC所制拉莫三嗪緩釋片（記為F2、F7、F8、F9）與原研制劑在含0.5%SDS的pH 6.8的PBS中釋藥曲線的相似性。結(jié)果顯示，HPMC總量越大，自制制劑的釋放速率越慢。F2、F7、F8、F9與原研制劑釋藥曲線的f2分別為70.86、38.69、43.03、35.22（n＝6），故確定每片101.4 mg為HPMC的總量。F2、F7、F8、F9中骨架片芯的處方組成見表1，釋藥曲線見圖1。

2.4.4 包衣增質(zhì)量包衣層厚度過大會(huì)減慢包衣膜的溶解速度而減緩藥物釋放，厚度過小則無法保證其耐酸能力。因此以表1中F2處方，按“2.1”項(xiàng)下方法制備包衣增質(zhì)量分別為2%、3%、4%、5%的拉莫三嗪緩釋片。比較其與原研制劑在含0.5%SDS的pH 6.8的PBS中釋藥曲線的相似性。結(jié)果顯示，上述自制制劑與原研制劑釋藥曲線的f2分別為31.96、68.86、59.41、49.11（n＝6），故確定包衣增質(zhì)量為3%。自制制劑與原研制劑的釋藥曲線見圖1。

2.5 緩釋片在不同介質(zhì)中的釋藥曲線測(cè)定

以表1中F2為片芯處方，包衣增質(zhì)量為3%，按“2.1”項(xiàng)下方法制備拉莫三嗪緩釋片（批號(hào)：160310）。按“2.3”項(xiàng)下方法考察自制制劑與原研制劑在含0.5%SDS的pH 6.8的PBS、pH 4.5乙酸-乙酸鈉緩沖液和水中的釋藥曲線。結(jié)果顯示，自制制劑與原研制劑在含0.5%SDS的pH 6.8的PBS中釋藥曲線的f2為69.01（n＝6），表明自制制劑和原研制劑釋藥行為相似。在pH 4.5乙酸-乙酸鈉緩沖液和水中自制制劑與原研制劑的體外釋放行為基本一致。由于二者的24 h累積釋放度均小于20%，而f2法計(jì)算相似標(biāo)準(zhǔn)是每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的累積釋放度差異不超過10%，因此計(jì)算f2值意義不大。因此，確定拉莫三嗪緩釋片的片芯處方為表1中F2，包衣增質(zhì)量為3%。自制制劑與原研制劑在3種介質(zhì)中的體外釋放曲線見圖2。

圖2 自制制劑與原研制劑在不同介質(zhì)中的體外釋藥曲線（±s，n＝6）Fig 2The in vitro release curves of original and self-made preparations in 3 kinds of media（±s，n＝6）

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

根據(jù)片芯處方為拉莫三嗪50 mg、HPMC K100LV CR 40 mg、HPMC E4M CR 61.4 mg、乳糖128 mg、包衣增質(zhì)量為3%，按“2.1”項(xiàng)下方法制備拉莫三嗪緩釋片3批（批號(hào)：20160313、20160316、20160319），每批1 000片?？疾?批自制制劑與原研制劑在含0.5%SDS的pH 6.8的PBS中的累積釋放度，并計(jì)算其RSD。繪制原研制劑與自制制劑在含0.5%SDS的pH 6.8的PBS、pH 4.5乙酸-乙酸鈉緩沖液和水中24 h內(nèi)的釋藥曲線，計(jì)算批號(hào)20160313自制制劑與原研制劑在3種介質(zhì)中的f2。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果見表2，原研制劑與自制制劑在3種介質(zhì)中的釋藥曲線見圖3。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 2Results of repetitive test（n＝6）

圖3 原研制劑與自制制劑在3種介質(zhì)中的體外釋藥曲線（±s，n＝6）

Fig 3The in vitro release curves of original and self-made preparations in 3 kinds of media（±s，n＝6）

Fig 3The in vitro release curves of original and self-made preparations in 3 kinds of media（±s，n＝6）

7 12 15 24 56.10 87.67 95.01 99.57 6.42 6.69 3.99 8.31 54.58 88.45 98.57 98.92 7.59 7.41 8.37 2.72 59.23 82.74 98.49 100.16 9.38 8.54 7.10 3.19 4.18 3.59 2.09 0.62

由表2結(jié)果顯示，3批自制制劑在含0.5%SDS的pH 6.8的PBS中2 h時(shí)累積釋放度的RSD均未超過20%，5 h（不包括5 h）之后累積釋放度的RSD均未超過10%，符合緩釋制劑要求[10]。

20160313 批自制制劑與原研制劑在含0.5%SDS的pH 6.8的PBS、pH4.5乙酸-乙酸鈉緩沖液和水中的f2均大于50。這表明自制制劑與原研制劑的體外釋藥行為基本一致。

3 討論

本研究還對(duì)比了尤特奇?和雅克宜?兩類包衣材料，二者制成的包衣膜耐酸能力相似，但在水介質(zhì)中雅克宜?包衣材料迅速溶解，與原研制劑差異過大，故選擇尤特奇?進(jìn)行后續(xù)研究。梁福萍等[5]將致孔劑SDS添加入包衣液處方中，以此來模擬“DiffCORE”釋藥技術(shù)制備拉莫三嗪緩釋片，也得到了體外釋放行為與原研制劑相似的制劑。對(duì)比雙方研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，梁福萍等[5]的最佳處方需要將包衣增質(zhì)量提高到6.4%時(shí)才能與原研制劑釋放行為最為接近；而本研究所得的拉莫三嗪緩釋片制備方法未添加致孔劑并僅將包衣增質(zhì)量控制為3%即可得到相一致的釋藥效果。相關(guān)研究結(jié)果也顯示，減小包衣膜厚度與加入致孔劑均能提高藥物的釋放，達(dá)到類似效果[11]，但相對(duì)而言，減小包衣膜厚度更簡單易行。

本研究參考了原研制劑專利[8]中的處方信息并經(jīng)試驗(yàn)篩選，通過調(diào)整骨架片芯和包衣膜厚度，獲得了與原研體外釋放行為相一致的自制品。自制制劑在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下規(guī)模放大制備3批，其批間差異符合規(guī)定，處方重復(fù)性良好，且與原研制劑在不同介質(zhì)中的釋放行為相似性良好。制備采用完整的腸溶包衣方式，避免了原研“DiffCORE”釋藥技術(shù)中的包衣膜鉆孔工藝，有效簡化了操作流程，適合國內(nèi)工業(yè)化生產(chǎn)，具有較好的開發(fā)前景。此外，制劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)仍在進(jìn)行中，同時(shí)由于自制制劑在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下制備，還有待中試放大以進(jìn)一步驗(yàn)證處方工藝的可靠性。

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Preparation of Lamotrigine Sustained-release Tablets and Study on the in vitro Release Behavior

ZHU Xuanyu1，ZHANG Yan2，DING Ziying1，CAO Feng1（1.Dept.of Pharmacy，School of Pharmacy，China Pharmaceutical University，Nanjing 211198，China；2.Center for Drug Evaluation，China Food and Drug Administration，Beijing 100089，China）

OBJECTIVE：To improve the original preparation technology，imitate Lamotrigine sustained-release tablets，and study its in vitro release behavior.METHODS：Hydroxypropylmethylcellulose（HPMC）E4M CR and HPMC K100LV CR were used to prepare the sustained-release matrix core.Using Eudragit?L30D-55 as enteric coating material，Lamotrigine sustained-release tablets were prepared.Using the similar factor f2of in vitro release rate of original preparation as index，single factor was used to screen the amount of lactose，mass ratio of HPMC E4M CR and HPMC K100LV CR，amount of HPMC and weight of coating layer in the formulation.RESULTS：The formulation of matrix core was as follow as lamotrigine 50 mg，HPMC K100LV CR 40 mg，HPMC E4M CR 61.4 mg，lactose 128 mg，and the optimal weight of coating layer of 3%.The in vitro release of self-made and original preparations were similar in pH 6.8 phosphate buffer containing 0.5%sodium dodecyl sulfate，pH 4.5 acetic acid sodium acetate buffer and water.CONCLUSIONS：Lamotrigine sustained-release tablets are successfully imitated，and the technology is more simple and feasible than original preparation.

Lamotrigine；Sustained-release tablet；Enteric coating layer；in vitro release

R943

A

1001-0408（2017）34-4872-04

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.34.31

＊碩士研究生。研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)。電話：025-83271092。E-mail：sinn_zhu@163.com

#通信作者：副教授，博士。研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)。電話：025-83271092。E-mail：cpufengc@gmail.com

2017-05-15

2017-09-07）

（編輯：鄒麗娟）