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(1.寧波市食品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院,浙江寧波 315000;2.中國(guó)計(jì)量大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,浙江杭州 310018)

邢家溧1,2,陳珊珊2,周子焱1,沈堅(jiān)1,傅曉1,馬超毅2,陸昭君2,施悅嵐2,汪藝2,戴賢君2,鄭睿行1,*

(1.寧波市食品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院,浙江寧波 315000;2.中國(guó)計(jì)量大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,浙江杭州 310018)

為了研究3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮(3,4-dibromo-2(5H)-furanone,DF)對(duì)熒光假單胞菌生物膜形成的抑制作用。通過在24孔板和硅膠片上構(gòu)建生物膜模型,CFU計(jì)數(shù)法測(cè)定DF對(duì)熒光假單胞菌的最低抑制濃度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)和最低殺菌濃度(Minimum Bacterial Concentration,MBC)以及生物膜生長(zhǎng)曲線,在1倍MIC和5倍MIC的DF作用下的熒光假單胞菌生物膜形成率和細(xì)菌群集運(yùn)動(dòng)能力,并探討DF對(duì)熒光假單胞菌總蛋白合成及多糖含量的影響。結(jié)果表明,DF對(duì)熒光假單胞菌作用的MIC和MBC值分別為12.5 μg/mL和800 μg/mL;在DF濃度為1 MIC和5 MIC時(shí),作用于熒光假單胞菌24 h生物膜形成抑制率分別為20.59%±2.91%和99.54%±1.83%,并能明顯抑制熒光假單胞菌的群集運(yùn)動(dòng)能力,干擾熒光假單胞菌群體感應(yīng)(Quorum sensing,QS)系統(tǒng)而影響其總蛋白合成及多糖的含量,24 h時(shí)5 MIC的DF對(duì)熒光假單胞菌總蛋白和菌多糖合成量的抑制率分別為8.04%±0.37%和51.08%±2.71%。本研究對(duì)DF影響熒光假單胞菌生物膜形成的原因,DF對(duì)熒光假單胞菌生物膜形成的抑制作用及其對(duì)QS通路的干擾具有良好的理論和實(shí)踐參考。

3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮,熒光假單胞菌,生物膜,抑制作用

細(xì)菌生物膜(Biofilm,BF)的形成是細(xì)菌在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺乏時(shí),通過群體感應(yīng)(Quorum sensing,QS)系統(tǒng)在信號(hào)分子的調(diào)控下分泌的細(xì)胞外基質(zhì)物質(zhì)如多糖、蛋白質(zhì)和DNA等多聚物質(zhì)[1],BF將細(xì)菌本身包裹于其中,從而使細(xì)菌易粘附于惰性或活性材料表面,如加工設(shè)備等[2]。據(jù)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(National Institutes of Health,NIH)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),超過八成的細(xì)菌性疾病是由于菌體生物膜的形成[3]。在食品工業(yè)中,由于生物膜的普遍性、形態(tài)結(jié)構(gòu)和生化特性的特殊性,食源性病原菌和腐敗菌往往能黏附于廠房地板和天花板、輸送管道、不銹鋼等材料表面形成生物膜,有效避開宿主免疫作用、抗生素殺傷作用,并且產(chǎn)生耐藥性,成為潛在的食品污染源,是食品安全的重大隱患[4]。

熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)屬于假單胞菌屬的無(wú)芽孢、無(wú)莢膜、有極端鞭毛的革蘭氏陰性菌[5],作為嗜冷菌,在生活生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛,能產(chǎn)生抗生素、水解酶等代謝產(chǎn)物,可以通過形成生物膜減少來自外界的影響,是冷藏食品腐敗的優(yōu)勢(shì)菌,是牛奶中危害最大的微生物,此外熒光假單胞菌在生產(chǎn)設(shè)備表面形成的生物膜難以清除,對(duì)食品生產(chǎn)可能帶來持續(xù)污染[6]。因此,防治熒光假單胞菌生物膜的形成及其相關(guān)危害成為目前研究的前沿和熱點(diǎn)。

研究表明,3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮(3,4-dibromo-2(5H)-furanone,DF)可以與細(xì)菌分泌的自誘導(dǎo)物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合自誘導(dǎo)物受體,通過作用于細(xì)菌的QS系統(tǒng)影響細(xì)菌生物膜的形成,是一種QS通路抑制劑[5,7]。本研究旨在通過研究DF對(duì)熒光假單胞菌生物膜形成的影響,探究其對(duì)熒光假單胞菌生物膜形成的抑制作用和效果及其對(duì)QS通路的干擾。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

熒光假單胞菌 由本實(shí)驗(yàn)室分離鑒定并保存于中國(guó)計(jì)量大學(xué)生物檢測(cè)與食品安全研究所;L-肉湯培養(yǎng)基(LB) 杭州百思生物技術(shù)有限公司;DF Sigma公司;醫(yī)用硅膠片、移液槍、0.45 μm微孔濾膜、24孔板、二甲亞砜、0.4%結(jié)晶紫、PBS(pH7.3)、2.5%戊二醛PBS溶液、飽和氯化鈣溶液、5%硝酸銀溶液 杭州米克化工有限公司。

CR60DF立式自動(dòng)壓力蒸汽滅菌器 廈門致薇儀器有限公司;BJ-2CD超凈工作臺(tái) 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;I3型紫外可見分光光度計(jì) 濟(jì)南荷能儀器股份有限公司;LT-BIX低溫生化培養(yǎng)箱 上海立德泰勀科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌株的活化和硅膠引導(dǎo)片的處理

1.2.1.1 菌株的活化 熒光假單胞菌在含30%(v/v)甘油的LB培養(yǎng)基中,-80 ℃凍存。使用前按1%(v/v)接種量接于LB液體培養(yǎng)基,28 ℃靜置培養(yǎng)18 h,連續(xù)活化2次。

1.2.1.2 硅膠引導(dǎo)片的處理 將1 cm×1 cm醫(yī)用硅膠引導(dǎo)片先用去離子水沖洗,再于丙酮中60 W超聲15 min;然后把它們放在75%的乙醇中浸泡30 min,洗滌劑清洗,并用蒸餾水沖洗干凈,最后121 ℃滅菌20 min。

1.2.2 DF作用熒光假單胞菌的最低抑制濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)的測(cè)定 采用二倍稀釋法,將不同濃度的DF(6.25、12.5、25、50、100、200、400、800和1000 μg/mL,50 μg)加入到含熒光假單胞菌(初始OD為0.05,50 μL)的5 mL LB液體培養(yǎng)基的試管中,28 ℃下培養(yǎng)24 h后,測(cè)其OD600,平行測(cè)定3次。

1.2.3 DF對(duì)熒光假單胞菌生物膜影響

1.2.3.1 DF對(duì)熒光假單胞菌浮游菌生長(zhǎng)曲線及生物膜生長(zhǎng)曲線的影響 取培養(yǎng)24 h處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的熒光假單胞菌液稀釋成菌懸液,OD600為0.5,取1%接種于5 mL培養(yǎng)液中,并分別加入0.05 mL的1MIC與5MIC的DF,以不加DF的為對(duì)照組,28 ℃恒溫振蕩培養(yǎng),每隔4 h測(cè)菌落OD600,繪制浮游菌菌落生長(zhǎng)曲線,平行實(shí)驗(yàn)3次;

取培養(yǎng)24 h處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的熒光假單胞菌液稀釋成菌懸液,OD600為0.5,24孔板每孔接種1 mL 1%菌液,分別加入0.05 mL的1MIC與5 MIC的DF,同等大小硅膠片一片。28 ℃培養(yǎng),分別于0、6、12、24、36、48、72 h取出硅膠引導(dǎo)片置于試管中,加3 mL無(wú)菌水超聲20 min,渦旋3 min,測(cè)OD600,并在倍比稀釋后進(jìn)行CFU計(jì)數(shù),平行實(shí)驗(yàn)3次,繪制生物膜曲線。

1.2.3.2 群集運(yùn)動(dòng)能力測(cè)定 制備測(cè)定群集運(yùn)動(dòng)能力平板,添加0.05 mL 5 MIC的DF為實(shí)驗(yàn)組,以不含DF的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。用滅菌牙簽挑取固體LB培養(yǎng)基上過夜培養(yǎng)的單菌落,扎透培養(yǎng)基,將細(xì)菌接種到培養(yǎng)基下面的塑料平皿上,28 ℃下恒溫培養(yǎng)24 h。

1.2.3.3 DF作用下的熒光假單胞菌生物膜銀染鑒定及抑制率 向24孔板中每孔加入1 mL LB培養(yǎng)基、滅菌硅膠引導(dǎo)片、10 μL菌液(OD600為0.5),分別加入10 μL的1MIC與5MIC的DF為實(shí)驗(yàn)組,以不含DF的培養(yǎng)基作為對(duì)照組,28 ℃培養(yǎng)24 h后取出菌懸液,測(cè)其OD600,然后輕輕洗孔,室溫干燥30 min,加入1 mL 1%結(jié)晶紫染色,室溫放置15 min后取出染液,蒸餾水洗孔兩次,室溫干燥30 min,加入1 mL的95%乙醇進(jìn)行溶解,測(cè)其OD600,用銀染法鑒定熒光假單胞菌生物膜的狀態(tài)[8]。

1.2.4 DF對(duì)細(xì)菌總蛋白合成、生物膜胞外多糖含量的影響 取培養(yǎng)24 h處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的熒光假單胞菌液稀釋成菌懸液,OD600為0.5,取1%接種于5 mL培養(yǎng)液中,加入0.05 mL的1MIC與5 MIC的DF,28 ℃恒溫振蕩培養(yǎng),每隔4 h提菌總蛋白并用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定[9],繪制總蛋白含量曲線;取培養(yǎng)24 h處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的熒光假單胞菌液稀釋成菌懸液,OD600為0.5,取1%接種于5 mL培養(yǎng)液中,加入0.05 mL的1MIC與5MIC的DF,28 ℃恒溫振蕩培養(yǎng),每隔4 h用EDTA溶劑法提取多糖,采用苯酚硫酸法測(cè)定多糖含量[10],繪制多糖含量曲線。

表1 溴代呋喃酮對(duì)熒光假單胞菌的1MIC和MBC值Table 1 1MIC and MBC values of bromo-furanone inhibiting the growth of Pseudomonas fluorescens

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2003和SPSS 13.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。采用SPSS的單因素方差分析(ANOVA)樣品的顯著性差異。單因素ANOVA分析用SPSS和Fisher’s least significant difference(LSD)表明樣品間顯著差異,只有當(dāng)p<0.05時(shí)被認(rèn)定為數(shù)據(jù)具有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 溴代呋喃酮對(duì)熒光假單胞菌抑制作用的MIC和MBC值

通過溴代呋喃酮對(duì)熒光假單胞菌抑制作用的MIC和MBC值測(cè)定,從表1可以看出,當(dāng)DF濃度低于12.5 μg/mL時(shí),6.25 μg/mL的OD600與對(duì)照組無(wú)顯著差異(p>0.05),而12.5 μg/mL的OD600顯著(p<0.05)低于對(duì)照組,這表明低于12.5 μg/mL的DF對(duì)熒光假單胞菌無(wú)抑制作用,當(dāng)DF濃度高于800 μg/mL時(shí),DF對(duì)熒光假單胞菌的抑制作用不再增強(qiáng),因此可以確定DF對(duì)熒光假單胞菌的MIC值為12.5 μg/mL,MBC值為800 μg/mL。在郭嘉亮等[11]的研究中采用1/2 MIC溴代2-(5H)-呋喃酮的化合物濃度對(duì)綠膿桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn),而在本實(shí)驗(yàn)中探索到1MIC(12.5 μg/mL)、5 MIC(800 μg/mL)DF對(duì)熒光假單胞菌的作用,因此在后續(xù)實(shí)驗(yàn)分別選擇1MIC和5 MIC作為工作濃度。

2.2 DF對(duì)生物膜的抑制作用

2.2.1 DF作用下的熒光假單胞菌生物膜與浮游菌生長(zhǎng)曲線 生物膜生長(zhǎng)為非線性生長(zhǎng)模型,易黏附在硅膠引導(dǎo)片上[12]。如圖1A所示,0～12 h為生物膜菌落數(shù)快速增長(zhǎng)期。12～48 h為生物膜快速增長(zhǎng)期,形成成熟的生物膜,此時(shí)菌落形態(tài)良好,最接近最大活菌數(shù)。48～72 h生物膜生長(zhǎng)的停滯期,菌落分泌大量胞外聚合物,出現(xiàn)菌落融合成片現(xiàn)象,導(dǎo)致可數(shù)菌落數(shù)不再增多甚至減少,這也與前人研究結(jié)果相似[13]。通過對(duì)比熒光假單胞菌生長(zhǎng)曲線可以看出,1MIC組熒光假單胞菌與對(duì)照組趨勢(shì)基本一致,在48 h后出現(xiàn)生長(zhǎng)顯著降低(p<0.05),而5 MIC組從6 h開始細(xì)菌總量就明顯低于1MIC組和對(duì)照組,表明DF能夠抑制熒光假單胞菌的生長(zhǎng),這種抑制作用隨DF的作用時(shí)間和濃度而改變。

圖1B為熒光假單胞菌的浮游細(xì)菌數(shù)變化,在1MIC濃度DF作用下,浮游細(xì)菌數(shù)增長(zhǎng)趨勢(shì)與對(duì)照組基本一致,但在5 MIC濃度作用下,DF延緩了細(xì)菌進(jìn)入快速增長(zhǎng)期與平穩(wěn)期的時(shí)間點(diǎn),可見5 MIC濃度DF的抑菌效果較明顯。

QS系統(tǒng)全程調(diào)節(jié)細(xì)菌生物膜的形成,根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在1MIC和5 MIC時(shí),DF作用于熒光假單胞菌72 h的生物膜形成抑制率(9.63%±0.46%,23.5%±4.32%)均明顯高于其對(duì)浮游細(xì)菌24 h的抑制率(8.48%±0.42%,18.02%±2.49%),這表明作為QS通路抑制劑的DF可通過干擾其QS系統(tǒng)而影響細(xì)菌生物膜的形成。

圖1 溴代呋喃酮作用下熒光假單胞菌生物膜細(xì)菌與浮游菌生長(zhǎng)曲線Fig.1 Growth curve of Pseudomonas fluorescens biofilm and planktonic colonies on the effect of bromo-furanone注：A為生物膜細(xì)菌,B為浮游細(xì)菌。

2.2.2 DF作用下的熒光假單胞菌群集運(yùn)動(dòng)能力 細(xì)菌的群集運(yùn)動(dòng)是其依賴鞭毛以及強(qiáng)大的生物膜表面活性物質(zhì)的遷移運(yùn)動(dòng),是細(xì)菌表面遷移的最快形式[11],QS系統(tǒng)通過對(duì)鞭毛操縱子的調(diào)控來調(diào)控細(xì)菌的群集運(yùn)動(dòng)[14]。DF通過抑制QS系統(tǒng)來抑制菌體的群集能力,從而影響菌體的運(yùn)動(dòng)能力[15]。根據(jù)圖2A與2B對(duì)比發(fā)現(xiàn),DF能夠顯著的抑制熒光假單胞菌菌體群集運(yùn)動(dòng),進(jìn)而破壞菌體生物膜的形成。這表明DF通過對(duì)熒光假單胞菌群集運(yùn)動(dòng)能力的抑制作用進(jìn)一步影響了其生物膜的形成。

圖2 溴代呋喃酮對(duì)熒光假單胞菌群集運(yùn)動(dòng)能力的影響Fig.2 The effect of bromo-furanone on swarming motility capacity of Pseudomonas fluorescens注：A:對(duì)照;B:5MIC組。

2.2.3 DF作用下的熒光假單胞菌生物膜銀染法鑒定 由圖3A可見,培養(yǎng)24 h的硅膠片經(jīng)銀染后,硅膠表面形成密集的菌落,可以觀察到有黑色的棉絮樣團(tuán)塊狀物,表明此時(shí)熒光假單胞菌生物膜形成較為成熟。當(dāng)加入1MIC的DF(圖3B),細(xì)菌多以分散的較為密集的形式存在;加入5 MIC的DF(圖2C),其抑制菌體生長(zhǎng)較為顯著,部分區(qū)域只發(fā)現(xiàn)稀少的塊狀分布,以單個(gè)菌落或碎片形式存在。在郭嘉亮等[16]的研究中發(fā)現(xiàn)DF對(duì)綠膿桿菌也有同樣的抑制作用,DF通過抑制熒光假單胞菌信號(hào)聯(lián)導(dǎo)分子的產(chǎn)生,阻止細(xì)菌聚集在一起,從而阻止生物膜的形成。通過OD值比較細(xì)菌群落總數(shù)計(jì)算1MIC和5 MIC的DF對(duì)熒光假單胞菌生物膜形成,抑制率分別為20.59%±2.91%和99.54%±1.83%。

圖3 不同濃度DF作用下的熒光假單胞菌生物膜Fig.3 Biofilms of Pseudomonas fluorescens at different concentrations of bromo-furanone注：A、B、C分別為對(duì)照組、DF的1MIC組、DF的5MIC組。

2.3 DF對(duì)熒光假單胞菌生物膜總蛋白、生物膜胞外多糖含量的影響

菌體在QS過程中產(chǎn)生一類信息素AHLs,能與LuxI蛋白和LuxR蛋白結(jié)合并激活細(xì)胞基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)[4,17]。DF為AHLs的類似物,在其低濃度時(shí)就能影響受體蛋白與信號(hào)分子結(jié)合,抑制QS系統(tǒng)啟動(dòng)它所調(diào)控的基因表達(dá),從而對(duì)菌分泌蛋白的合成起到一定的抑制作用,且濃度越大抑制效果越明顯。如圖4對(duì)照組所示,熒光假單胞菌菌體在8 h后進(jìn)入了快速生長(zhǎng)期,細(xì)菌大量繁殖,總蛋白合成量增多;20 h后,菌體進(jìn)入穩(wěn)定期,細(xì)菌數(shù)達(dá)到最大值,總蛋白合成量最大。隨著時(shí)間的變化,熒光假單胞菌總蛋白合成波動(dòng)起伏,但總體呈現(xiàn)增長(zhǎng)的趨勢(shì),加入DF后,假單胞菌總蛋白合成總體呈現(xiàn)增長(zhǎng)的趨勢(shì),但是增長(zhǎng)幅度明顯低于對(duì)照組,而且濃度越高抑制效果越明顯,24 h時(shí)5 MIC的DF對(duì)熒光假單胞菌總蛋白合成量的抑制率(8.04%±0.37%)顯著高于(p<0.05)1MIC的(2.77%±0.08%),這表明DF可以抑制熒光假單胞菌總蛋白合成。

QS通過刺激細(xì)菌胞外多糖分泌影響細(xì)菌生物膜形成[18]。胞外多糖通過降解一些高分子物質(zhì)以被菌體利用進(jìn)而包裹細(xì)菌提高生物膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,QS可以調(diào)控胞外多糖的產(chǎn)生量及成分變化,從而對(duì)細(xì)菌粘附性產(chǎn)生影響,繼而影響生物膜結(jié)構(gòu)[19]。結(jié)果顯示,DF具有明顯抑制胞外多糖分泌的效果,這表明DF通過抑制QS系統(tǒng)的胞外多糖分泌來抑制細(xì)菌生物膜的形成。如圖5對(duì)照組所示,熒光假單胞菌多糖的分泌與蛋白的分泌趨勢(shì)是一致的,都是隨著時(shí)間延長(zhǎng),分泌量呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)。從8 h開始細(xì)菌進(jìn)入快速增長(zhǎng)期;20 h后多糖含量穩(wěn)定,菌體增長(zhǎng)速度減緩,生物膜形成漸趨成熟,與對(duì)照組相比,24 h時(shí)1MIC和5 MIC濃度DF對(duì)細(xì)菌多糖分泌具有抑制效果,5 MIC(51.08%±2.71%)抑制熒光假單胞菌多糖的分泌強(qiáng)于MIC(25.51%±1.54%),表明DF濃度越高,對(duì)熒光假單胞菌多糖的分泌抑制作用就越強(qiáng),但是多糖和蛋白并不能代表DF抑制QS系統(tǒng)的全部抑制因子,這也就是1MIC組雖然對(duì)多糖和蛋白都有明顯抑制作用,但是在細(xì)菌生物膜形成的抑制中作用并不明顯,但是當(dāng)1MIC濃度達(dá)到5 MIC時(shí),抑制作用就非常明顯,這表明細(xì)菌生物膜的抑制作用與DF的濃度有關(guān)。

圖4 不同濃度溴代呋喃酮作用下熒光假單胞菌蛋白含量的變化曲線Fig.4 Total protein content of Pseudomonas fluorescens under the effect of BF

圖5 不同濃度溴代呋喃酮作用下熒光假單胞菌總糖含量的變化曲線Fig.5 Polysaccharide content of Pseudomonas fluorescens under the effect of BF

3 結(jié)論

細(xì)菌生物膜是一種具有協(xié)調(diào)性、功能性和高度結(jié)構(gòu)性的膜狀復(fù)合物[20],其表面包被多聚糖基質(zhì),內(nèi)部包含眾多輸送養(yǎng)料的管道,適應(yīng)能力強(qiáng),是細(xì)菌對(duì)抗生素耐藥的主要原因,據(jù)估計(jì)超過60%的微生物感染是由細(xì)菌的生物被膜引起的[21]。本文通過DF對(duì)熒光假單胞菌生物膜形成研究和定性觀察,探討了DF影響熒光假單胞菌生物膜的形成規(guī)律和外部條件,研究發(fā)現(xiàn)DF濃度為MIC和5 MIC時(shí),DF作用于熒光假單胞菌24 h,銀染法鑒定生物膜形成抑制率分別為20.59%±2.91%和99.54%±1.83%,并能明顯抑制熒光假單胞菌的群集運(yùn)動(dòng)能力,干擾熒光假單胞菌QS系統(tǒng)而影響其總蛋白合成及多糖的含量,可為預(yù)防或抑制生物膜在食品中的形成提供參考,為尋找新型抗菌藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),但DF改變QS抑制生物膜形成的具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

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Effectof3,4-dibromo-2(5H)-furanoneasanaturalquorumsensinginhibitoronbiofilmformationofPseudomonasFluourcens

XINGJia-li1,2,CHENShan-shan2,ZHOUZi-yan1,SHENJian1,MAChao-yi2,LUZhao-jun2,SHIYue-lan2,WANGYi2,DAIXian-jun2,ZHENGRui-hang1,*

(1.Ningbo Institute for Food Control,Ningbo315000,China;2.College of Life Science,China Jiliang University,Hangzhou310018,China)

In order to research the inhibiting effect of3,4-dibromo-2(5H)-furanone(DF)on biofilm formation ofPseudomonasFluourcens.The effect of DF on minimum inhibitory concentration(MIC),minimum bacterial concentration(MBC)values and growth curve ofPseudomonasfluorescensaccording the biofilm model of24orifice plate and silicon rubber were calculated by CFU counting method.The biofilmand the cluster movement ability of bacteria was studied at MIC and5MIC of DF,and the inhibiting rate of formation the contents of total protein synthesis and polysaccharide were examined. The results showed that the MIC and MBC values of DF onPseudomonasfluorescenswere12.5μg/mL and800μg/mL,respectively. The inhibitting rates of biofilm formation ofPseudomonasfluorescenswere20.59%±2.91% and99.54%±1.83% on24h at the concentration of1MIC and5MIC of DF. DF could inhibite the cluster movement and disturb the quorum sensing,there by had an effect on the total protein and extracellular polysaccharides content ofPseudomonasfluorescens. The inhibitting rates of total protein and extracellular polysaccharides content ofPseudomonasfluorescenswere8.04%±0.37% and51.08%±2.71% on24h at the concentration of5MIC of DF.In this paper,the reason of DF’s effect on the formation ofPseudomonasfluorescensbiofilm was studied.The inhibition of DF onPseudomonasaeruginosabiofilm formation and its interference with QS pathway have good theoretical and practical reference.

3,4-dibromo-2(5H)-furanone;Pseudomonasfluorescen;biofilm;inhibiting effect

2017-05-02

邢家溧(1988-)，女，博士，研究方向：食品質(zhì)量安全檢驗(yàn)，E-mail:hellojiali77@gmail.com。

*通訊作者:鄭睿行(1982-)，男，碩士，高級(jí)工程師，研究方向：食品質(zhì)量安全檢驗(yàn)，E-mail:13865867@qq.com。

浙江省食品藥品監(jiān)管系統(tǒng)科技計(jì)劃項(xiàng)目(SP201617)；浙江省科技項(xiàng)目(2012C03009-2)。

TS201.3

A

1002-0306(2017)23-0114-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.23.023