陳振興

【摘要】以無菌播種取得的鐵皮石斛無菌苗作為試驗材料，研究MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的添加物對鐵皮石斛快速壯苗的影響。結(jié)果表明以MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.5g/L+土豆汁100g/L為培養(yǎng)基壯苗效果顯著。

【關(guān)鍵詞】鐵皮石斛；組織培養(yǎng)；添加物

【中圖分類號】S567.239 【文獻標(biāo)識碼】B 【文章編號】2095-3089（2017）17-0291-01

鐵皮石斛為蘭科石斛屬多年生草本植物，是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材，具有益胃生津、滋陰清熱之功效。現(xiàn)代藥理表明石斛具有抗腫瘤、抗衰老、增強免疫力等功能。由于鐵皮石斛生長環(huán)境要求苛刻。

自然條件下種子需與某些真菌共生才能萌發(fā)，很難用實生苗栽培，加上長期過度開采，致使野生鐵皮石斛瀕臨滅絕[1]。根據(jù)本實驗室情況，結(jié)合不同激素和不同的添加物對對鐵皮石斛試管苗快速壯苗的影響，擬研究10種不同培養(yǎng)基對鐵皮石斛試管苗快速壯苗的影響，試圖找出最適合鐵皮石斛試管苗快速壯苗的培養(yǎng)基，有利于實驗室提高皮石斛快速繁殖的質(zhì)量和效率，確保鐵皮石斛資源的保持，為大規(guī)模育苗做準(zhǔn)備。

一、材料與方法

1.試驗材料

組培苗為實驗室鐵皮石斛蒴果，經(jīng)無菌播種萌發(fā)的70d的試管苗。種子培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+活性炭0.5g/L。

2.試驗方法

（1）按照以下組別配制不同培養(yǎng)基配方。原料土豆汁經(jīng)過去皮處理，蘋果未去皮。

（2）接種與培養(yǎng)選取長勢一致且由同一株鐵皮石斛的蒴果繁殖的生長狀況良好的石斛接種到培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基20瓶。培養(yǎng)室培養(yǎng)條件為：溫度22（±2）℃，光照10h/d，光照強度2000lx。培養(yǎng)20d，60d觀察結(jié)果。

二、結(jié)果與分析

1.鐵皮石斛在培養(yǎng)基上生長情況如下表。

2.不同激素比例對石斛生長的影響

本文僅研究了添加NAA0.2mg/L和NAA0.5mg/L的培養(yǎng)基對比。實驗結(jié)果表明添加NAA0.5mg/L的情況下，20d和60d的苗整齊，葉色綠，生長情況均優(yōu)于NAA0.2mg/L。

3.不同添加物培養(yǎng)基成分對石斛生長的影響

添加1/2MS和MS在20d，苗的生長狀況一致，均為生長較快，苗整齊，葉色綠；60d苗在添加MS的培養(yǎng)基比1/2MS的培養(yǎng)基，生長更快，苗更整齊，葉色更綠。苗在添加蔗糖20g/L和蔗糖30g/L的培養(yǎng)基上20d和60d的生長情況無教明顯差異。苗在添加土豆汁100g/L和蘋果汁100g/L的培養(yǎng)基中生長情況均較好，且添加土豆汁的苗生長情況更優(yōu)于添加蘋果汁的。

三、結(jié)論與討論

結(jié)果表明以MS+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭0.5g/L+土豆汁100g/L為培養(yǎng)基壯苗效果顯著。初步得到了一套鐵皮石斛組織培養(yǎng)育苗的技術(shù)方法，利用此方法生產(chǎn)出的組培苗速度快、質(zhì)量好。

從文獻報道可知，在生根培養(yǎng)基中通常加入土豆汁[2]可促進生根壯。在培養(yǎng)基中加入一些天然有機物，如椰汁、蘋果汁、土豆汁等，能提供一些必要的微量營養(yǎng)成分、生理活性物質(zhì)和生長激素等，對鐵皮石斛原球莖的增殖和分化有促進作用[3-4]。蔗糖濃度以3%為分化的臨界值，蔗糖2%為原球莖分化的適宜濃度[5]，但這個兩個濃度的差異對本實驗中壯苗效果影響不明顯。本研究中的培養(yǎng)基都加入0.5g/L的活性炭，在組培過程中適當(dāng)添加活性炭，可以吸附植物代謝過程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，防止褐變，減少對植物生長的影響[6]，對形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好作用。

接種過程需對無菌接種室進行嚴(yán)格的滅菌消毒操作。組培室定期需用不的消毒方法進行滅菌消毒，防止污染菌產(chǎn)生耐藥性大量繁殖切難以消滅。采用甲醛（60～80mL）和高錳酸鉀（40～40g）溶液對無菌室進行熏蒸，或噴灑表面消毒劑可有效降低污染。

參考文獻

[1]徐紅，李曉波，王崢濤，等.海南、廣東省石斛屬植物資源與種質(zhì)保護研究[J].中國野生植物資源，1999（5）：24-26.

[2]陳碧華，張娟，范輝華，等，湖北林業(yè)科技[J]，2013.42（5）：78-80.

[3]侯丕勇，郭順星.懸浮培養(yǎng)的鐵皮石斛原球莖在固體培養(yǎng)基上生長和分化的研究[J].中國中藥雜志，2005，30（10）：729-732.

[4]唐桂香，黃福燈，周偉軍.鐵皮石斛的種胚萌發(fā)及其離體繁殖研究[J].中國中藥雜志，2005，30（20）：1583-1585.

[5]陸兵.鐵皮石斛組織培養(yǎng)研究進展[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009.14（2）：164-167.

[6]王和飛，梁柳，林應(yīng)耀.石斛蘭快繁技術(shù)研究[J].瓊州大學(xué)學(xué)報，2007，14（2）：32-34.