周繼剛 付婷婷 汪鋆植 王海燕 容麗霞

(1. 三峽大學(xué) 中醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)院(宜昌市中醫(yī)醫(yī)院)，湖北 宜昌 443003；2.三峽大學(xué) 中醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)院，湖北 宜昌 443002；3. 天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(三峽大學(xué))，湖北 宜昌 443002；4.湖北省藥物安全性評(píng)價(jià)中心，武漢 430061)

海棠凝膠家兔單次皮膚給藥毒性實(shí)驗(yàn)

周繼剛1付婷婷2汪鋆植3王海燕1容麗霞4

(1. 三峽大學(xué) 中醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)院(宜昌市中醫(yī)醫(yī)院)，湖北 宜昌 443003；2.三峽大學(xué) 中醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)院，湖北 宜昌 443002；3. 天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(三峽大學(xué))，湖北 宜昌 443002；4.湖北省藥物安全性評(píng)價(jià)中心，武漢 430061)

通過家兔皮膚急性毒性實(shí)驗(yàn)，初步評(píng)價(jià)海棠凝膠對(duì)動(dòng)物完整皮膚及破損皮膚所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，為后續(xù)毒性試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)提供參考信息．采用最大給藥量法，家兔16只，分為4組，即海棠凝膠完整皮膚組及破損皮膚組、賦形劑完整皮膚組及破損皮膚組，每組4只(♀、♂各半)，給藥前24 h用電推剪推去背部?jī)蓚?cè)毛(約150 cm2)，破損皮膚制作：在脫毛區(qū)用9號(hào)針頭劃“#”字狀，以劃破表皮滲血為度，給藥量均為2 g/kg凝膠，給藥組主藥劑量為0.05 g/kg，將供試品和賦形劑涂于脫毛區(qū)，用一層稱樣紙覆蓋及兔固定衣固定，并用兔脖套將兔固定，24 h后用生理鹽水洗去受試物及賦形劑，仔細(xì)觀察和記錄動(dòng)物出現(xiàn)的毒性反應(yīng)情況，連續(xù)觀察14 d，并記錄體重和進(jìn)食量情況．結(jié)果表明：海棠凝膠完整皮膚組及破損皮膚組無動(dòng)物死亡，動(dòng)物體重、進(jìn)食量與賦形劑組比較無顯著性差異(P>0.05)，呼吸、自主活動(dòng)等均未見中毒反應(yīng)，動(dòng)物處死后經(jīng)對(duì)各組家兔系統(tǒng)剖檢，對(duì)皮膚給藥部位及其它組織臟器進(jìn)行觀察，未見明顯病理性改變．結(jié)論：海棠凝膠單次皮膚給藥2 g/kg凝膠(主藥劑量為0.05 g/kg)，家兔未見明顯毒性反應(yīng)．

海棠凝膠； 單次給藥； 毒性實(shí)驗(yàn)

海棠凝膠已用于臨床多年，由三峽大學(xué)天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、宜昌市中醫(yī)醫(yī)院聯(lián)合制備而成，其成分主要由湖北海棠提取物多酚、根皮苷及白芨多糖組成．李楠[1]通過對(duì)DPPH、ABTS自由基清除能力和對(duì)鐵離子還原能力的測(cè)定，以及對(duì)牛血清白蛋白氧化損傷的保護(hù)作用研究，來評(píng)定海棠提取物多酚的體外抗氧化活性強(qiáng)弱，結(jié)果表明:海棠提取物多酚具有較強(qiáng)的抗氧化活性作用；另外，通過測(cè)試海棠提取物對(duì)大腸桿菌、糞鏈球菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用及其最小抑菌濃度，結(jié)果表明：海棠多酚具有良好的抑菌活性．張宏岐等[2]利用DPPH自由基、羥基自由基的反應(yīng)體系，檢測(cè)湖北海棠提取物的體外抗氧化活性，其中根皮苷消除DPPH自由基的EC50是0.75 mg/ml，50%乙醇洗脫物消除DPPH自由基的 EC50是0.38 mg/ml，20%乙醇洗脫物消除DPPH自由基的EC50是1.2 mg/ml，結(jié)果表明湖北海棠提取物根皮苷、20%乙醇洗脫物、50%乙醇洗脫物、總提物都有抑制羥基自由基產(chǎn)生的能力，其中根皮苷的抗氧化活性最強(qiáng)．陳德利等[3]通過對(duì)白芨的研究表明白芨能促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的游走，加速創(chuàng)傷愈合．多年臨床觀察結(jié)果也表明，海棠凝膠能有效治療皮膚干燥、裂口導(dǎo)致的出血、疼痛，用于治療皮膚皸裂癥、慢性濕疹、手足癬等皮膚病．為了對(duì)其安全性作出客觀、科學(xué)的評(píng)價(jià)，進(jìn)一步指導(dǎo)臨床用藥，本文對(duì)海棠凝膠的的皮膚過敏性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究，為其臨床安全應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)．

1 材 料

1.1 海棠凝膠

由宜昌市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，為黃棕色稠厚固體，批號(hào)：20121101，含量或純度：2.5%，規(guī)格：20 g/瓶，避光、密封、陰涼處保存．

海棠凝膠空白(賦形劑) 由宜昌市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批號(hào)：20121101，純度、規(guī)格、保存同上．

1.2 動(dòng)物

日本大耳白兔，普通級(jí)，購入20只，實(shí)驗(yàn)用16只，雌雄各半，購入年齡為110 d左右，體重為2.12～2.66 kg，實(shí)驗(yàn)用年齡為120 d左右，體重為2.5～2.85 kg，均由河南康達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(豫)2011-0001，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(鄂)2009-0023．每天給實(shí)驗(yàn)家兔喂兔生長(zhǎng)繁殖顆粒飼料，飼料購于北京科澳協(xié)力飼料有限公司，批號(hào)為13024111，自由飲用凈化水．實(shí)驗(yàn)室溫度為20～25.4℃，相對(duì)濕度為37%～70%，光照為12 h明暗交替．

2 方 法

2.1 實(shí)驗(yàn)方法

家兔16只，于給藥前24 h家兔背部去毛，范圍約相當(dāng)于體表面積的10%左右(約150 cm2)，將家兔分為4組，每組4只，一組為供試品完整皮膚，二組為供試品破損皮膚，三組為賦形劑完整皮膚，四組為賦形劑破損皮膚．破損皮膚的制作：在脫毛區(qū)用9號(hào)針頭劃“#”字狀，以劃破表皮滲血為度．將供試品和賦形劑按2 g/kg涂于脫毛區(qū)，然后用一層稱樣紙覆蓋，用無刺激性膠布或繃帶固定，再加兔脖套固定和兔固定衣，24 h后用生理鹽水洗去受試物及賦形劑，藥后每日觀察，連續(xù)14d．給藥后觀察動(dòng)物的全身中毒表現(xiàn)和死亡情況，包括動(dòng)物體重、皮毛、眼睛和粘膜的變化，呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動(dòng)等的變化．若在實(shí)驗(yàn)過程中有死亡動(dòng)物則進(jìn)行尸檢，及實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)全部動(dòng)物處死進(jìn)行大體解剖，當(dāng)肉眼可見病變時(shí)，則進(jìn)行病理學(xué)檢查．

2.2 觀察指標(biāo)與觀察頻度

2.2.1 一般臨床癥狀觀察

給藥后連續(xù)觀察6 h，以后每天觀察一次，記錄皮毛、眼睛和粘膜的變化、自主活動(dòng)等中毒表現(xiàn)．

2.2.2 體重觀察

給藥前和給藥后3、7、10、14 d稱體重．

2.2.3 食量觀察

給藥前和給藥后7、14 d稱食量，共稱3次．

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

體重及進(jìn)食量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用單因素方差t檢驗(yàn)分析．

3 結(jié) 果

3.1 一般癥狀觀察

海棠凝膠及賦形劑完整皮膚組和破損皮膚組經(jīng)家兔皮膚2g/kg凝膠給藥后，無動(dòng)物死亡，體態(tài)、呼吸、自主活動(dòng)等也未見異常．

3.2 體重觀察

海棠凝膠完整皮膚組和破損皮膚組的體重變化情況與賦形劑完整皮膚組和破損皮膚組相近，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無顯著性差異(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1．

表1 對(duì)家兔皮膚給藥的體重變化情況

*與賦形劑組比較：P>0.05.

3.3 食量觀察

海棠凝膠完整皮膚組、破損皮膚組的進(jìn)食量與賦形劑完整皮膚組及破損皮膚組相近，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無顯著性差異(P>0.05)，結(jié)果見表2．

表2 對(duì)家兔皮膚給藥進(jìn)食量變化情況

*與賦形劑組比較：P>0.05.

3.4 肉眼尸檢

給藥后14 d，處死家兔，對(duì)家兔的心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、前列腺、子宮、卵巢、腦、骨髓、甲狀腺、乳腺、膀胱、胰腺、膽囊、胃、直腸、十二指腸、氣管、食管、唾液腺、主動(dòng)脈、坐骨神經(jīng)、淋巴結(jié)、給藥部位眼睛等主要臟器進(jìn)行全面肉眼尸檢，結(jié)果海棠凝膠及賦形劑完整皮膚組和破損皮膚組家兔肉眼觀察全身組織未見明顯病變．

3.5 病理檢查報(bào)告

將16只家兔全部送檢，經(jīng)對(duì)各組家兔系統(tǒng)剖檢，對(duì)皮膚給藥部位及其它組織臟器進(jìn)行觀察，未見明顯病理性改變．

4 討 論

海棠凝膠及賦形劑經(jīng)家兔完整皮膚和破損皮膚單次給藥2 g/kg凝膠(主藥劑量為0.05 g/kg)，藥后連續(xù)觀察14 d，無動(dòng)物死亡，體態(tài)、呼吸、自主活動(dòng)等也未見異常；海棠凝膠完整皮膚組、破損皮膚組的體重、進(jìn)食量變化情況與賦形劑完整皮膚組、破損皮膚組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無顯著性差異；觀察期結(jié)束全部動(dòng)物進(jìn)行大體解剖，海棠凝膠及賦形劑完整皮膚組和破損皮膚組家兔肉眼觀察全身組織未見明顯病變，病檢結(jié)果正常，表明各組動(dòng)物均未見明顯毒性反應(yīng)．

綜上所述，海棠凝膠的毒性實(shí)驗(yàn)是按國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局編寫“新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則”[4]和化學(xué)藥物急性毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則[5]設(shè)計(jì)的．在本試驗(yàn)條件下，2.5%海棠凝膠單次皮膚給藥2 g/kg凝膠(主藥劑量為0.05 g/kg)，家兔未見明顯毒性反應(yīng)，其用藥安全可靠．

[1] 李 楠.海棠多酚的種類及其體外抗氧化活性和抑菌活性研究[D]．楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2014．

[2] 張宏岐，汪鋆植，鄒 坤，等．湖北海棠提取物的體外抗氧化活性研究[J]．食品科技，2008，33(11)：183-186．

[3] 陳德利，施偉民，徐 倩，等．中藥白芨促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的游走[J]．中華皮膚科雜志，1999，32(3):161-162．

[4] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編[S]．1993：204-205．

[5] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.化學(xué)藥物急性毒性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則[S]．2005．

ToxicitytestofBegoniaGelatinRabbitsinSingleDermalAdministration

Zhou Jigang1Fu Tingting2Wang Junzhi3Wang Haiyan1Rong Lixia4

(1. Chinese Medicine Hospital & Yichang City Traditional Chinese Medicine, China Three Gorges Univ., Yichang 443003, China; 2. Traditional Chinese Medicine College, China Three Gorges Univ., Yichang 443002, China; 3. Key Labotory of Natural Products Development & Research of Hubei Province, China Three Gorges Univ., Yichang 443002, China; 4. Hubei Province Drug Safety Evaluation Center, WuHan 430061, China)

Through the acute toxicity test of rabbits, the toxicity of Begonia gel to the skin and damaged skin of the animals was evaluated, which provided reference information for the subsequent toxicity test and clinical trial. A total of 16 rabbits were divided into four groups: namely Begonia gel complete skin group and damaged skin group, excipient complete skin group and damaged skin group; each group has 4 rabbits (♀, ♂ half). Before the administration of 24 hours, using the clippers to push the back of the hair on both sides of the hair (about 150 cm2), damaged skin production：in the hair removal area with #9 needle plan “#” shape to break the epidermal oozing for the degree of administration for amount of 2g/kg gel, the main dose of 0.05 g/kg, the test sample and excipients applied to the hair removal area, covered with a layer of paper and fixed rabbit fixed clothing, and rabbit neck The rabbits were fixed overnight. After 24 hours, the test substance and excipients were washed with physiological saline. The toxicities of the animals were observed and recorded; and the weight and food intake were recorded for 14 days. The results show that there was no significant difference in animal body weight, food intake and excipient group (P>0.05). There was no poisoning reaction in the respiratory and autonomic activities. After the animals were sacrificed, the animals were sacrificed. The septum of the rabbits in each group was examined; and the organs of the skin and other tissues were observed. No obvious pathological changes were observed. It is concluded that the Begonia gel single skin administration 2g/kg gel (the main dose of 0.05g/kg), no significant toxic effects in rabbits.

Begonia gelatin; single dose; toxicity test

10.13393/j.cnki.issn.1672-948X.2017.05.021

2017-03-29

湖北省科技廳重大專項(xiàng)(項(xiàng)目編號(hào)：2016ABA107)

周繼剛(1958-)，男，主任醫(yī)師，教授，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)藥防治皮膚病．E-mail：71094314@qq.com

R285

A

1672-948X(2017)05-0106-03

[責(zé)任編輯周文凱]