吳黎明+蔣迎春+何利剛+王志靜+仝鑄+孫中海+許淼+吳述勇+廖勝才+王菊平

摘要：通過在宜昌秭歸桃葉橙試驗基地群體選優(yōu)，從桃葉橙18號中選育出一個少核優(yōu)良品種金峽桃葉橙。為揭示該品種的來源，對其在秭歸進(jìn)行了連續(xù)3年的品比試驗研究。結(jié)果表明，該品種在果實種子數(shù)量上顯著少于桃葉橙18號，且在枝、葉、花、果和產(chǎn)量等方面都與對照品種桃葉橙18號在部分?jǐn)?shù)量性狀上存在一定的差異，但其生物學(xué)特性和結(jié)果習(xí)性則基本與對照相同，通過對兩個品種的性狀描述比較和DNA分子鑒定，可以證明金峽桃葉橙為桃葉橙18號的大果型少核芽變品種，它既保持了桃葉橙18號的優(yōu)良品質(zhì)，又具備了少核性狀，是桃葉橙18號比較理想的優(yōu)良芽變品種。

關(guān)鍵詞：桃葉橙[Citrus sinensis （Linn.） Osbeck cv. Taoyecheng]；少核；芽變；結(jié)果習(xí)性；生物學(xué)特性

中圖分類號：S666.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）21-4076-05

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.21.020

Variety Comparative Test on Jinxia Taoye Orange

WU Li-ming1，JIANG Ying-chun1，HE Li-gang1，WANG Zhi-jing1，TONG Zhu1，SUN Zhong-hai1，

XU Miao1，WU Shu-yong2，LIAO Sheng-cai2，WANG Ju-ping2

（1.Institute of Fruit and Tea，Hubei Academy of Agricultural Sciences/Fruit and Tea Branch，Hubei Innovation Center of Agricultural Science and Technology，Wuhan 430064，China； 2.Zigui Specialty Technology Extension and Service Center，Zigui 443600，Hubei，China）

Abstract： Through large-scale bud mutant selection in citrus test demonstration base of Zigui county，Yichang city，a new few-seediness sweet orange strain named Jinxia Taoye orange was selected from Taoye orange No. 18. To reveal the source of the new sweet orange，variety comparative test on the new strain had been conducted for three years in Zigui area. The results showed that seed numbers of the new strain were significantly less than that of the control，and the fractional quantitative trait performance of shoots，leaves，flowers，fruits and yield of the new strain were founded some differences with those of the control. However，the biological characteristic and bearing habit were almost the same between them. Through the cultivar character comparison and DNA molecular identification， it can be proved that the new strain is probably a bud mutant of large few-seediness-fruited cultivar. Because of its excellent fruit quality and large & few-seediness character，it should be a rather ideal new strain of sweet orange germplasm.

Key words： Taoye orange[Citrus sinensis （Linn.） Osbeck cv. Taoyecheng]； few seediness； bud mutant； bearing habit； biological characteristics

桃葉橙是湖北省的一個優(yōu)良地方柑橘良種資源，葉片狹長似桃葉，與其他普通甜橙品種的葉片迥異，故名“桃葉橙”。早在20世紀(jì)50-60年代，湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所科研人員就在秭歸縣龍馬溪村開展了實生甜橙的選育工作，鑒定和選育出多個桃葉橙優(yōu)良單株，這些優(yōu)良單株通過嫁接擴(kuò)繁，逐步形成了現(xiàn)今生產(chǎn)中的桃葉橙品系，其中桃葉橙18號品系果實肉質(zhì)細(xì)膩，高糖低酸，汁多化渣，富玫瑰香氣，具有甜、香、脆的獨(dú)特風(fēng)味，鮮食品質(zhì)極佳[1]。一直以來，秭歸桃葉橙深受廣大種植者和消費(fèi)者的青睞，但其美中不足的是果實種子偏多，平均每果種子14.4粒。為了改良桃葉橙品種，有必要進(jìn)行桃葉橙的選優(yōu)，從中選育出保持其原有優(yōu)良性狀的少核或無核甜橙新優(yōu)系。金峽桃葉橙為2008年從桃葉橙18號中發(fā)現(xiàn)的少核芽變單株，近幾年來，以桃葉橙18號為對照，在秭歸屈原鎮(zhèn)長江村建立了金峽桃葉橙品比試驗示范園，并對其少子性狀、植物學(xué)特性、生物學(xué)特性、結(jié)果習(xí)性、綜合品質(zhì)以及該品系的分子鑒定進(jìn)行了研究。endprint

1 材料與方法

1.1 試驗材料及立地條件

試驗地選擇在秭歸縣屈原鎮(zhèn)長江村清灘滑坡遺址桃葉橙試驗園，選高接換種的四年生金峽桃葉橙和對照品種桃葉橙18號各30株，其中中間砧為普通甜橙，基砧為紅橘。試驗園地處長江三峽河谷地區(qū)。海拔220 m，亞熱帶濕潤季風(fēng)氣候，年平均溫度17 ℃，年平均日照時數(shù)1 620 h，≥10 ℃年積溫5 500 ℃，年平均降雨量1 200 mm，年無霜期310 d。沙壤土，pH 5.8，肥力中等。株行距為2.0 m×3.0 m，果園間作綠肥，樹盤清耕，配方施肥，整形修剪及病蟲害等綜合栽培技術(shù)參照DB 42-T077-2011[2]實施。

1.2 調(diào)查和測定方法

1.2.1 植物學(xué)性狀觀察 參照文獻(xiàn)[3]以及文獻(xiàn)[4]的方法進(jìn)行。

1.2.2 生物學(xué)特性觀察 采用機(jī)械抽樣法測定各品種的生物學(xué)特性，即每小區(qū)每品種選取長勢相當(dāng)?shù)拇碇?株，高接樹齡均為四年生，調(diào)查試驗園內(nèi)各品種生長發(fā)育規(guī)律和樹體的結(jié)構(gòu)狀況，調(diào)查內(nèi)容包括物候期、樹形、樹高、冠幅、干粗和新梢生長量。

1.2.3 結(jié)果習(xí)性觀察 選擇樹體長勢一致的金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號試驗高接樹，高接樹齡為4年，單株小區(qū)，每小區(qū)每品種隨機(jī)選取3株，于當(dāng)年生枝梢（春、夏、秋梢）頂芽自剪后隨機(jī)選取30個，調(diào)查并記載各季抽生的枝數(shù)及其長度、粗度和葉數(shù)，統(tǒng)計各次梢比例。同時于定果后調(diào)查各品種（系）結(jié)果母枝類型及比例，并進(jìn)行結(jié)果枝類別的記載，統(tǒng)計兩個品種有葉結(jié)果枝和無葉結(jié)果枝著果數(shù)及其占總果數(shù)的比例。

1.2.4 品質(zhì)分析 金峽桃葉橙和桃葉橙18號果實品質(zhì)分析于果實成熟后進(jìn)行，連續(xù)分析測定3年。主要測定果實的可溶性固形物（TSS）、可滴定酸（TA）、固酸比（TSS/TA）、可食率、平均單果重、果形指數(shù)、平均每果種子數(shù)等，參照有關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)，可溶性固形物用手持測糖儀測定，可測定酸含量以0.1 mol/L標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液滴定，再換算為檸檬酸含量[5]。

1.2.5 遺傳穩(wěn)定性分析及品種鑒定 對桃葉橙群體資源進(jìn)行篩選評價[6]，采用AFLP分子標(biāo)記方法[7]對金峽桃葉橙進(jìn)行遺傳鑒定，與桃葉橙18號進(jìn)行指紋圖譜比較分析，以進(jìn)一步確定其芽變親本。

2 結(jié)果與分析

2.1 金峽桃葉橙母株的發(fā)現(xiàn)及高接擴(kuò)繁

2009-2010年在秭歸屈原鎮(zhèn)桃葉橙基地進(jìn)行大規(guī)模群體選優(yōu)，并通過廣大群眾的參與尋找較好芽變單株，共初選了具有優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀的單株3個，表現(xiàn)出少核性狀，命名為WSF40、DYL63和WGH01，通過進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)，編號WSF40表現(xiàn)更為優(yōu)良，屬于桃葉橙中的少核大果類型，命名為金峽桃葉橙。其母樹樹齡30余年生，樹高3.35 m，冠幅3.65 m×4.25 m。果實平均單果重152.9 g，每果平均種子數(shù)4.3粒，大大低于桃葉橙18號的種子數(shù)每果14.4粒，其果實品質(zhì)較優(yōu)，保持了桃葉橙18號的優(yōu)良風(fēng)味，初步推斷為桃葉橙18號芽變。確定優(yōu)系后，隨后進(jìn)行了高接擴(kuò)繁，在秭歸屈原鎮(zhèn)長江村清灘滑坡遺址建立了金峽桃葉橙2 000 m2的品比試驗示范園，并連續(xù)3年進(jìn)行了觀察記載和品質(zhì)測定，結(jié)果表明該品系少核性狀遺傳穩(wěn)定，品質(zhì)優(yōu)良，確定為甜橙中的優(yōu)良芽變品種。

2.2 植物學(xué)特性比較

在高接品比示范園，于2011年和2012年對金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號的花、春梢、春葉及果實縱橫徑進(jìn)行測量，結(jié)果見表1。金峽桃葉橙和桃葉橙18號樹姿均直立，樹勢均強(qiáng)，樹冠自然圓頭形。從表1中可見，金峽桃葉橙春梢粗度、春梢節(jié)間較對照桃葉橙18號大，果形指數(shù)稍大，果實高樁形。另外，據(jù)觀察，在花的類型中，金峽桃葉橙有正?；ê吐吨▋煞N，并均占有一定比例，有的年份露柱花比例占到20%左右，這與對照桃葉橙18號以正常花占據(jù)絕對優(yōu)勢有很大不同。因此，金峽桃葉橙在葉、花、果數(shù)量性狀方面均與對照存在一些差異。

2.3 生物學(xué)特性比較

2.3.1 物候期 金峽桃葉橙和桃葉橙18號的物候期大致相近，在秭歸地區(qū)，通過連續(xù)3年的觀察，均在3月中下旬開始萌芽生長，春梢開始生長在4月初，現(xiàn)蕾期在4月中旬，初花期在4月21-24日，盛花期在4月25-29日，末花期在4月30日至5月4日，第一次生理落果期在5月中旬，第二次生理落果期在6月中旬至7月上旬，夏梢開始生長在6月下旬，秋梢開始生長在8月中旬，果實著色期在11月上旬，成熟期在12月上旬。

2.3.2 生長發(fā)育特性 通過調(diào)查金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號樹體生長情況包括各次梢生長量（表2、表3），結(jié)果表明，四年生金峽桃葉橙的樹體生長勢和生長量各項指標(biāo)比對照桃葉橙18號略高或相當(dāng)，尤其春梢生長量（18.94 cm）明顯高于對照（12.61 cm），表現(xiàn)出初結(jié)果樹較旺的生長勢。新品種金峽桃葉橙生長量較大，抽發(fā)新梢能力較強(qiáng)，每大枝抽發(fā)秋梢數(shù)為12.9個，高于桃葉橙18號抽枝力（10.2個/枝）。在著果數(shù)和產(chǎn)量方面，金峽桃葉橙高于對照，顯示了優(yōu)良單株的優(yōu)良結(jié)果能力。

2.4 結(jié)果習(xí)性比較

在秭歸品比試驗園，于2012年通過調(diào)查金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號品種的各次梢數(shù)量和比例、春秋梢成為結(jié)果母枝數(shù)量和比例、結(jié)果枝類型和比例以及坐果率。結(jié)果表明，金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號在結(jié)果母枝類型方面，均以春秋梢作結(jié)果母枝（表4），尤其以當(dāng)年生秋梢為主，其中秋梢占總結(jié)果母枝數(shù)的比例分別達(dá)到61.9%和65.0%，春梢比例分別為38.1%和35.0%，當(dāng)年抽發(fā)的夏梢基本不作次年的結(jié)果母枝。春梢結(jié)果母枝長度以10～20 cm、粗度0.2～0.4 cm為好，秋梢結(jié)果母枝長度以20～25 cm、粗度0.3～0.5 cm為好。成花能力強(qiáng)，一般為單花，少數(shù)花為傘形花序。在結(jié)果枝類型方面，據(jù)觀察，金峽桃葉橙有兩種結(jié)果枝：有葉結(jié)果枝和無葉結(jié)果枝，其中以有葉結(jié)果枝（有葉頂花枝和有葉花序枝）為主（表5），所占總果枝數(shù)比例達(dá)到70.4%，與對照桃葉橙18號（65.9%）相當(dāng)。且著果率高，特別著生葉片的春梢有葉頂花枝著果率更高，可達(dá)到5.0%以上，無葉花枝和花序枝著果率較低，在1%以下，平均著果率2.80%，與桃葉橙18號（2.81%）相近。endprint

2.5 果實主要經(jīng)濟(jì)性狀比較

2.5.1 產(chǎn)量性狀比較 從表2可以看出，四年生金峽桃葉橙高接樹平均株產(chǎn)達(dá)到30.50 kg，而對照桃葉橙18號平均株產(chǎn)為24.18 kg，前者顯著高于后者，表明金峽桃葉橙新品種具有較好的豐產(chǎn)性能。

2.5.2 品質(zhì)性狀比較 于2011-2013年連續(xù)3年對金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號進(jìn)行果實品質(zhì)測定和方差分析（表6），結(jié)果表明，金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號的外在品質(zhì)方面，前者平均單果重為152.9 g，果形指數(shù)為0.98，均高于后者（兩項指標(biāo)分別為127.4 g和0.94），且單果重差異達(dá)顯著水平；另外，兩者每果種子數(shù)相比，金峽桃葉橙為4.3粒，顯著低于對照（14.4粒），比對照減少了70.1%。在內(nèi)在品質(zhì)方面，兩個品種（系）的可食率、可溶性固形物（TSS）含量、可滴定酸（TA）含量、固酸比（TSS/TA）均相當(dāng)，差異不顯著，兩者TSS含量高，均在12%以上，可滴定酸含量平均0.6%左右，低酸，固酸比高，保持著較好的風(fēng)味，綜合比較，兩者內(nèi)在品質(zhì)均較優(yōu)良。通過內(nèi)外品質(zhì)性狀比較和分析發(fā)現(xiàn)，金峽桃葉橙較對照桃葉橙18號果實顯著增大，種子數(shù)顯著減少，并保持和具備了對照桃葉橙18號優(yōu)良的內(nèi)在品質(zhì)和濃郁的風(fēng)味，屬于大果、少子、高品質(zhì)甜橙類型，為甜橙中的優(yōu)良芽變。

2.6 品種性狀描述比較

通過對金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號植株、葉片、果實、種子的觀察，并進(jìn)行其主要形態(tài)特征的描述（表7），可以看出，金峽桃葉橙與對照桃葉橙18號大部分品種性狀描述一致，只在種子的數(shù)量和質(zhì)量、果重、果形指數(shù)、果皮厚度、果實品質(zhì)等數(shù)量性狀方面存在變異，另外，花的類型也存在少量變異（表1），因此，從外觀形態(tài)上可以鑒定金峽桃葉橙品種為甜橙的優(yōu)良變異。

2.7 金峽桃葉橙的芽變AFLP分子鑒定

在對金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號進(jìn)行AFLP指紋圖譜分析時，從64對引物組合中進(jìn)行篩選，共篩選出6對合適的引物組合：E-ACT/M-CAA、E-ACT/M-CTT、E-ACC/M-CAA、E-ACG/M-CAA、E-AGC/M-CAA、E-AGC/M-CAC，對其進(jìn)行擴(kuò)增，部分引物擴(kuò)增結(jié)果如圖1、圖2所示，在286個位點(diǎn)擴(kuò)增出條帶，平均每對引物組合擴(kuò)增位點(diǎn)為47.7個，其中多態(tài)性位點(diǎn)48個（表8），占總擴(kuò)增位點(diǎn)比例為16.78%，平均每對引物組合擴(kuò)增多態(tài)性位點(diǎn)為8個，兩個品種存在遺傳上的差異。對參選的23份桃葉橙資源擴(kuò)增結(jié)果應(yīng)用Ntsys軟件進(jìn)行UPGMA聚類（圖3），結(jié)果表明，桃葉橙各單株（包括雜交親本及子代）在相似系數(shù)為0.28～0.67水平上聚類，新品種金峽桃葉橙與桃葉橙18號較為臨近，具有較近的遺傳關(guān)系，可以證明金峽桃葉橙為桃葉橙18號的營養(yǎng)系后代。

3 小結(jié)與討論

通過多年調(diào)查和測定新品種金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號的植物學(xué)性狀和生長結(jié)果習(xí)性，研究表明，金峽桃葉橙為桃葉橙18號的芽變品系，在種子數(shù)、果實形狀大小及花的部分?jǐn)?shù)量性狀存在變異，即種子數(shù)顯著減少，果實等器官較大，花器官中露柱花比例較高，初結(jié)果樹的樹體生長勢和生長量較強(qiáng)。但兩者主要物候期和植物學(xué)性狀相近，結(jié)果習(xí)性相似，產(chǎn)量無顯著差異，豐產(chǎn)性好，果實品質(zhì)與對照基本相當(dāng)。兩者通過AFLP分子標(biāo)記鑒定，進(jìn)一步證實了金峽桃葉橙為桃葉橙18號的芽變后代。

金峽桃葉橙和對照桃葉橙18號均以春秋梢作結(jié)果母枝，從數(shù)據(jù)上看，以當(dāng)年生秋梢為主，其中秋梢占總結(jié)果母枝數(shù)量超過60%，但春梢也占據(jù)一定比例，因此管理上要求在春梢萌芽前施適量催芽肥，培養(yǎng)適量的優(yōu)質(zhì)春梢，以促進(jìn)形成立體結(jié)果，提高產(chǎn)量。在結(jié)果枝方面，金峽桃葉橙存在有葉結(jié)果枝和無葉結(jié)果枝兩種結(jié)果枝，其中以有葉結(jié)果枝（有葉頂花枝和有葉花序枝）為主，所占總果枝數(shù)比例超過70%，著果率較高（5%以上），因此在花量較大的年份，針對這種花序狀果枝較多時，可以疏剪一部分，也可以在7月定果后采取疏果技術(shù)[8]，以減少著果數(shù)量，增加果實單果重量，提高果實品質(zhì)。

另外，金峽桃葉橙在栽培過程中，采取規(guī)?；N植方式，區(qū)域化發(fā)展，避免品種混栽，有利于該品種少核特性的發(fā)揮，同時可以保證品種純度，提高品種市場競爭力。老舊果園可以采取高接換種方式快速推廣，兩年結(jié)果，3年投產(chǎn)。果實在12月上旬可完全成熟，推薦完熟采收或果實留樹保鮮，可以充分體現(xiàn)味甜、清香、質(zhì)脆化渣以及果面橙紅光潔的優(yōu)良遺傳特性。

參考文獻(xiàn)：

[1] 向長海.秭歸開展桃葉橙優(yōu)良單株選育[J].中國果業(yè)信息，2009（12）：44.

[2] DB 42/T 077-2011，甜橙栽培技術(shù)規(guī)程[S].

[3] NY/T 2435-2013，植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測試指南 柑橘[S].

[4] 江 東，龔桂芝，洪棋斌.柑橘種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006.53-66.

[5] 李錫香.新鮮果蔬的品質(zhì)及其分析法[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1994.208-209.

[6] 何利剛，蔣迎春，吳黎明，等.桃葉橙資源篩選評價及分子鑒定[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，51（21）：4823-4826.

[7] 廖振坤，張秋明，劉衛(wèi)國，等.利用AFLP鑒定柑橘芽變[J].果樹學(xué)報，2006，23（3）：486-488.

[8] 吳黎明，蔣迎春，何利剛，等.疏果對桃葉橙果實品質(zhì)的影響及效益分析[J].中國南方果樹，2015，44（6）：34，37.endprint