孫生禎 傅義娟 游瀟倩 林元清 （青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 青海 西寧 810000）

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青海省豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查

孫生禎 傅義娟 游瀟倩 林元清 （青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 青海 西寧 810000）

本次監(jiān)測(cè)采用ELISA方法對(duì)2012年~2016年青海省西寧市及海東地區(qū)8個(gè)市(縣)規(guī)模豬場(chǎng)(戶)3928份豬血清進(jìn)行了豬偽狂犬病的血清學(xué)檢測(cè)，結(jié)果檢出陽(yáng)性豬271頭，陽(yáng)性率為55.2%，其中海東地區(qū)(平安19.8%、樂(lè)都8.6%、民和13.8%)陽(yáng)性檢出率高于西寧地區(qū)(湟中0.8%、湟源0.8%)，同時(shí)，2014年的陽(yáng)性率最高，為14.5%，表明青海省西寧市及周邊地區(qū)部分規(guī)模化豬場(chǎng)仍存在豬偽狂犬病感染的潛在危害，因此在當(dāng)前的疾病感染壓力下，使用優(yōu)質(zhì)的gE基因缺失疫苗強(qiáng)化免疫是控制和凈化偽狂犬病的重要手段，同時(shí)要加強(qiáng)生物安全措施、注重后備豬的選擇、加強(qiáng)定期監(jiān)測(cè)工作，采取綜合防控才能使我國(guó)偽狂犬病的流行態(tài)勢(shì)得到根本好轉(zhuǎn)。

豬偽狂犬病(Aujeszky’s disease,AD; Pseudorabies, PR)是由偽狂犬病毒(AD virus, ADV; PR virus, PRV)引起的豬的一種高度接觸性傳染病[1]，其典型癥狀為發(fā)熱和腦脊髓炎。豬是偽狂犬病的傳染源和自然宿主。豬偽狂犬病主要引起母豬繁殖障礙，表現(xiàn)為流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎等；新生仔豬發(fā)生感染時(shí)，主要表現(xiàn)為持續(xù)性腹瀉和神經(jīng)癥狀，死亡率可高達(dá)50%~100%；肥育豬多為隱性感染，感染后往往致使其生長(zhǎng)緩慢，種公豬感染則導(dǎo)致精液品質(zhì)下降甚至喪失種用價(jià)值[2]。各種年齡的豬都易感，但隨年齡不同，癥狀和死亡率也有明顯區(qū)別，但一般不呈現(xiàn)瘙癢癥狀。周緒斌等對(duì)我國(guó)9個(gè)省市規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)不同豬群進(jìn)行了偽狂犬病血清學(xué)監(jiān)測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，75個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)中約有一半豬場(chǎng)(52%)偽狂犬病野毒抗體陽(yáng)性，所有血清樣品野毒陽(yáng)性率為16.9%[3]。邢建民等對(duì)青海省西寧市及海東地區(qū)9個(gè)縣(市)30個(gè)規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)(戶)776頭份血清進(jìn)行豬偽狂犬病的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，陽(yáng)性豬35頭，陽(yáng)性率為4.51% (35/776)[1]，雖然陽(yáng)性率不高，但還是反應(yīng)出現(xiàn)階段偽狂犬在中國(guó)各省仍呈流行性，其凈化仍然任重道遠(yuǎn)。近年來(lái)，青海省規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)數(shù)量不斷增多，這也給豬疫病防控力度加大了困難，為進(jìn)一步了解近幾年豬偽狂犬病在青海省規(guī)?；i場(chǎng)的分布和流行情況，為防制豬狂犬病作出合理的評(píng)估，給今后對(duì)該病的防控工作提供依據(jù)，本研究應(yīng)用ELISA方法對(duì)2012~ 2016年青海省西寧市及海東地區(qū)8個(gè)市(縣)規(guī)模豬場(chǎng)(戶)的豬血樣進(jìn)行了豬偽狂犬病的血清學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 血清來(lái)源 青海省西寧市及海東地區(qū)8個(gè)市(縣)規(guī)模豬場(chǎng)(戶)3928頭豬，其中西寧市491頭、大通491頭、湟源491頭、湟中491頭、民和491頭、互助491頭、樂(lè)都491頭、平安491頭。

1.2 樣品采集 無(wú)菌操作，用5ml一次性注射器從被檢豬耳靜脈采集非抗凝血3ml，采集后成斜面置室溫，待血清析出分離血清，在-20℃冷凍保存待檢。

1.3 診斷試劑 美國(guó)愛(ài)德士(IDEXX)生產(chǎn)的豬偽狂犬病ELISA抗體檢測(cè)診斷試劑盒(批號(hào)F451)，包括已包被好抗原的96孔酶聯(lián)反應(yīng)板，標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清，酶標(biāo)二抗，TMB底物溶液，終止液，稀釋液，洗滌液等。

1.4 主要儀器 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、恒溫箱、移液器(0.1~ 20μl、20~200μl、50~1000μl)、與移液器匹配的吸頭等。

1.5 檢測(cè)方法 豬偽狂犬病酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：（1）取出抗原包被板，在記錄表上記錄樣品的位置。（2）在A1，A2和A3孔內(nèi)加入100μl兩倍稀釋(1:2)的陰性對(duì)照。（3）在A4，A5孔內(nèi)加入100μl兩倍稀釋(1:2)的陽(yáng)性對(duì)照。（4）在其余的孔內(nèi)分別加入100μl已稀釋好的被檢樣品。室溫下孵育1h或2~7℃孵育過(guò)夜(可以將微量反應(yīng)板用封條封閉)。（5）用大約300μl洗滌液洗滌板孔，重復(fù)3~5次。每次洗滌時(shí)洗滌液都應(yīng)吸出丟棄。在洗板和加入標(biāo)記物之間應(yīng)避免包被板變干。在最后一次洗滌液吸出后，將板中殘留洗滌液扣拍到吸水材料上。（6）每孔加入100μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗PRV gpI抗體，室溫下孵育20min。（7）重復(fù)步驟5。（8）每孔加入100μl TMB 底物液，室溫下孵育15min。（9）每孔加入50μl終止液，使反應(yīng)終止。（10）分光光度計(jì)調(diào)零，測(cè)量并且記錄被檢樣品和對(duì)照的A(650)。陰性對(duì)照A(650)的平均值減去陽(yáng)性對(duì)照A(650)的平均值必須大于或等于0.3，試驗(yàn)方能有效。

1.6 結(jié)果判斷 通過(guò)計(jì)算樣品與陰性對(duì)照的比例(S/N)來(lái)確定豬偽狂犬病病毒抗體的有無(wú)。S/N=樣本A(650)/陰性對(duì)照平均值，如果S/N值低于或等于0.60，樣品應(yīng)判定為PRV gpI抗體陽(yáng)性。如果S/N值大于0.60但小于或等于0.70，樣品應(yīng)重測(cè)。如果試驗(yàn)結(jié)果不變，間隔一定時(shí)間后重新采樣、檢測(cè)。如果S/N值大于0.70，樣品應(yīng)判定為PRV gpI抗體陰性。

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)豬偽狂犬病感染抗體情況 2012~2016年，對(duì)西寧及海東地區(qū)8個(gè)市(縣)共3928份豬血清樣本進(jìn)行偽狂犬病感染抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示，3928份血清樣本共檢出陽(yáng)性血清271份，陽(yáng)性率為55.2%(表1)。其中，平安、樂(lè)都、民和與其它地區(qū)陽(yáng)性率差異明顯，陽(yáng)性率分別為19.8%、8.6%和13.8%。

2.2 2012~2016年部分地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)偽狂犬病感染情況 2012~2016年，連續(xù)5年對(duì)西寧及海東地區(qū)8個(gè)市(縣)規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行了偽狂犬病感染抗體監(jiān)測(cè)，結(jié)果表明，從2012年到2014年豬偽狂犬病感染陽(yáng)性率呈逐年上升趨勢(shì)，陽(yáng)性率分別為1.9%、5.8%和14.5%，其中2014年陽(yáng)性率最高。從2015~2016年豬偽狂犬病感染陽(yáng)性率又逐漸下降，陽(yáng)性率分別為8.5%和6.5%(表2)。

表1 青海省部分地區(qū)偽狂犬病感染抗體情況 (頭、%)

表2 2012~2016年豬場(chǎng)偽狂犬病感染情況 (頭、%)

3 討論

（1）偽狂犬病病毒為皰疹病毒，而皰疹病毒的最大特性是可以在機(jī)體內(nèi)形成潛伏感染(1atent infectioI1)，從而長(zhǎng)期存在于畜群中。當(dāng)存在應(yīng)激等因素時(shí)，病毒可由潛伏感染變?yōu)榛钚愿腥?，?dǎo)致潛伏感染的帶毒動(dòng)物發(fā)病，并將病毒傳播給其他易感動(dòng)物，因此防止?jié)摲腥疽渤蔀榭刂苽慰袢〉碾y點(diǎn)和關(guān)鍵環(huán)節(jié)[4]。本次對(duì)西寧及周邊8個(gè)地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)3928份豬血清進(jìn)行了偽狂犬感染抗體檢測(cè)，共檢出陽(yáng)性血清271份，陽(yáng)性率為55.2%，其中，平安、樂(lè)都、民和與其它地區(qū)陽(yáng)性率差異明顯，陽(yáng)性率分別為19.8%、8.6%和13.8%。湟中、湟源陽(yáng)性率最低，陽(yáng)性率都是0.8%。海東地區(qū)(平安、樂(lè)都、民和)相比西寧地區(qū)(湟中、湟源)生豬的養(yǎng)殖量大，中小規(guī)模的養(yǎng)殖場(chǎng)也多，但是這些養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)管理混亂、缺少專業(yè)人員、免疫程序不完善，防病意識(shí)薄弱，消毒、滅鼠工作流于形式，疫病監(jiān)測(cè)、診斷的技術(shù)手段滯后，防疫工作顧此失彼，從而導(dǎo)致陽(yáng)性率高。（2）從2012~2016年的5年間的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)可以看出，2014年偽狂犬病感染抗體陽(yáng)性率最高，為14.5%。2014年之前，大多數(shù)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)不注重疫病的檢測(cè)，沒(méi)有健全的豬偽狂犬病免疫計(jì)劃，飼養(yǎng)不規(guī)范，飼養(yǎng)密度比較大豬交易比較頻繁，也沒(méi)有凈化意識(shí)，而從2015年的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)我們看出，偽狂犬病感染抗體陽(yáng)性率開(kāi)始下降，說(shuō)明規(guī)?；i場(chǎng)意識(shí)到偽狂犬病帶來(lái)的危害，加強(qiáng)了豬場(chǎng)的飼養(yǎng)管理，這也與近兩年青海省開(kāi)展規(guī)模豬場(chǎng)豬偽狂犬病疫病凈化的工作是分不開(kāi)的。（3）通過(guò)對(duì)本次調(diào)查結(jié)果的分析，建議對(duì)青海省規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)采取以下防治措施：加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和生物安全操作。實(shí)行嚴(yán)格的清洗消毒措施，限制場(chǎng)內(nèi)豬群流動(dòng)，限制場(chǎng)內(nèi)外人員進(jìn)出并執(zhí)行嚴(yán)格的人員、物品消毒措施；根據(jù)豬場(chǎng)的具體情況因地制宜，制定出合理的免疫計(jì)劃；對(duì)有條件的豬場(chǎng)要求開(kāi)展豬偽狂犬病凈化，全場(chǎng)進(jìn)行豬偽狂犬病基因缺失疫苗(gE基因缺失)免疫；及時(shí)開(kāi)展病原學(xué)檢測(cè)，淘汰確診病例，鼓勵(lì)有條件的養(yǎng)殖場(chǎng)直接淘汰臨床疑似種豬。

[1] 邢建民, 王謝忠, 傅義娟. 規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī), 2009, 12(36).

[2] 王建, 周慶雨, 陸春權(quán)等. 蘇北、魯南5市豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查[J]. 養(yǎng)豬, 2013: 2.

[3] 周緒斌, Danniel Torrents Gil, 葉陽(yáng). 近期中國(guó)規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病野毒血清學(xué)及流行病學(xué)調(diào)查與分析[J]. 吉林畜牧獸醫(yī). 2007, 8(28).

[4] Cheung A K. Investigation of pseudorabies virus DNA and RNA in trigeminal ganglia an d tonsil tissues of latently infected swine[J]. Am J Vet Res, 1995, 56(1): 45-50.

（2017–07–14）

S858.292

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1007-1733(2017)11-0074-02