魏明琳

（內(nèi)蒙古通遼市疾病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 通遼 028000）

流感病毒分型與亞型實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果分析

魏明琳

（內(nèi)蒙古通遼市疾病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 通遼 028000）

目的驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)室對(duì)流感病毒分型能力，以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)能力，提高本實(shí)驗(yàn)室的管理水平以及技術(shù)人員的檢測(cè)水平。方法組建檢測(cè)小組，為本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員發(fā)放制備樣品，對(duì)流感病毒進(jìn)行分型，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行檢測(cè)，分析比較檢測(cè)的結(jié)果。結(jié)果經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，抽取所有樣品均勻性和穩(wěn)定性都比較好（P＞0.05）。本實(shí)驗(yàn)室發(fā)放的總樣品數(shù)是384個(gè)，經(jīng)檢測(cè)后結(jié)果與指定判定結(jié)果相同的樣品有350個(gè)，合格率為91.14%。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)室對(duì)流感病毒分型能力，以及亞型實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)能力都比較好，相關(guān)技術(shù)人員的檢測(cè)水平達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，能夠?yàn)橛嘘P(guān)部門分析和預(yù)防流感提供有力的依據(jù)。

流感病毒；時(shí)熒光定量PCR；檢測(cè)能力

流感又稱流行性感冒，是一種比較常見的傳染性疾病，該病傳播速度快，傳染的范圍廣，在我國發(fā)病率比較高。流感是由流感病毒引起，流感病毒一般分為甲、乙、丙三型[1]。流感在我國發(fā)病率高，主要癥狀是發(fā)燒發(fā)熱、頭疼畏寒、全身酸痛等，一旦患者感染流感病毒，則嚴(yán)重影響其生命安全和生活質(zhì)量。流感病毒不僅類型眾多，且極易發(fā)生變異，雖然分子生物學(xué)技術(shù)早就應(yīng)用于對(duì)流感病毒的檢測(cè)，但仍需提高監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，針對(duì)流感病毒建立一個(gè)行之有效的檢測(cè)方法，提高實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)能力，對(duì)治療和控制流感有相當(dāng)重要的意義。本研究主要對(duì)本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)能力的分析，研究的結(jié)果和詳細(xì)說明如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究所需儀器實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，PCR儀來自于Applied Biosystems AB美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司，所需材料為制備樣品、保存試管以及冰袋等。

1.2 一般方法

1.2.1 制備研究樣品 選擇世界衛(wèi)生組織推薦的疫苗株雞胚培養(yǎng)液，使用相關(guān)儀器驗(yàn)證后制成毒株，并添加穩(wěn)定劑、保護(hù)劑等基礎(chǔ)緩沖液[2]。樣品均勻性檢測(cè)方法：在各組樣品中隨機(jī)抽取10份進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，若CT值基本無差異，則表示均勻性比較好。樣品穩(wěn)定性檢測(cè)方法：①將每種類型、每種稀釋度的病毒樣品抽取1支，置于室溫中每天檢測(cè)1次，待基本檢測(cè)不出RNA指數(shù)為止。②將樣品以冰袋密封，運(yùn)送至合作單位進(jìn)行檢測(cè)，以觀察運(yùn)輸途中樣品的呈現(xiàn)的穩(wěn)定性[3]。

1.2.2 樣品的發(fā)放和運(yùn)輸 將所有樣品進(jìn)行編號(hào)，錄入資料信息，按照流感病毒的分型和甲型亞型檢測(cè)制定樣品，隨機(jī)發(fā)放給實(shí)驗(yàn)室。將樣品放置與滅菌凍存管中保存，以冰袋密封，貼好項(xiàng)目名稱、樣品類型、實(shí)驗(yàn)室管理者等相關(guān)資料標(biāo)簽，運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。采用核酸提取方法檢測(cè)樣品。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)和判定標(biāo)準(zhǔn) 將本次研究檢測(cè)的樣品分為3種類型，陰性樣品有4份，強(qiáng)陽性樣品有3份，弱陽性樣品有3分，共10份。實(shí)驗(yàn)室若樣品的檢測(cè)結(jié)果和定性判定結(jié)果相同，則判定為合格。若樣品的檢測(cè)結(jié)果和定性判定結(jié)果相同，則判定為不合格。弱陽性樣品排除本次檢測(cè)之外。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選用軟件SPSS 13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 樣品的均勻性和穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果 在各組樣品中，隨機(jī)抽取10份-15份進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示，所有樣品的CT值無組間差異、無組內(nèi)差異（P＞0.05），說明樣品的均勻性達(dá)到要求。對(duì)樣品的穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)過實(shí)際運(yùn)輸和室溫放置等過程之后，有樣品的CT值基本無變化，說明樣品的穩(wěn)定性比較好。

2.2 樣品檢測(cè)后的合格率情況 本次檢測(cè)中，發(fā)放的總樣品數(shù)是384個(gè)，經(jīng)檢測(cè)后結(jié)果與指定判定結(jié)果相同的樣品有350個(gè)，合格率為91.14%，見表1。

表1 所有樣品檢測(cè)后的合格率情況比較

3 討論

流感病毒屬于RNA病毒，潛伏期短傳染性強(qiáng)，且容易發(fā)生變異，因此加強(qiáng)對(duì)流感的預(yù)防和控制相當(dāng)重要。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)是一種比較高效的檢測(cè)手段，主要應(yīng)用于檢測(cè)各種臨床疾病，如禽流感、麻疹、手足口病等傳染病診斷，在食品安全、科學(xué)研究等領(lǐng)域也發(fā)揮著重要作用。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)法操作簡單，能夠通過絕對(duì)的定量檢測(cè)出令人滿意的效果，反應(yīng)速度快，擁有較強(qiáng)的敏感性和直觀性，可以對(duì)流感病毒進(jìn)行快速準(zhǔn)確的檢測(cè)，應(yīng)用前景廣闊[4]。本實(shí)驗(yàn)室采用的熒光PCR儀檢測(cè)效果較好，實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員具有合格的操作技術(shù)，管理到位，檢測(cè)能力達(dá)到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，抽取所有樣品均勻性和穩(wěn)定性都比較好（P＞0.05）。本實(shí)驗(yàn)室發(fā)放的總樣品數(shù)是384個(gè)，經(jīng)檢測(cè)后結(jié)果與指定判定結(jié)果相同的樣品有350個(gè)，合格率為91.14%。因此，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)流感病毒分型能力，以及亞型實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)能力都比較好，相關(guān)技術(shù)人員的檢測(cè)水平達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，能夠?yàn)橛嘘P(guān)部門分析和預(yù)防流感提供有力的依據(jù)。

[1]王季秋,趙欣,王照,等.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)及其在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用[J].中國地方病防治雜志,2016,16(5):517-519.

[2]邸紅芹,楊永輝,朱桂云,等.改良多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)流感A型和B型病毒[J].河北醫(yī)藥,2016,38(23): 3529-3532.

[3]方盛藩,鄭夔,李小波,等.甲型H1N1流感病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)陽性模板的構(gòu)建[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2015,15(1):1-3.

[4]劉麗娟,馬雪征,甄維,等.流感病毒分型及亞型實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2015,25(23):4131-4132.