楊輝，王建升，郭寶林，韓博，劉俊玲，冀建寧

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院 廣安門醫(yī)院，北京 100053；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；3.北京中醫(yī)藥大學(xué) 東直門醫(yī)院，北京 101100)

·基礎(chǔ)研究·

野生和家種蒲公英質(zhì)量比較研究

楊輝1，王建升1，郭寶林2*，韓博1，劉俊玲1，冀建寧3

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院 廣安門醫(yī)院，北京 100053；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；3.北京中醫(yī)藥大學(xué) 東直門醫(yī)院，北京 101100)

目的比較家種和野生蒲公英的質(zhì)量。方法選擇了4個(gè)產(chǎn)地的野生和家種蒲公英樣品，高效液相色譜法測定其中咖啡酸和綠原酸含量，紫外-可見分光光度法測定其中多糖和總黃酮含量。結(jié)果與結(jié)論咖啡酸、綠原酸和總黃酮在野生品和家種品之間沒有顯著差異，野生品的多糖含量顯著高于家種品，因?yàn)橐吧穾Ц?，根中多糖含量顯著高于其他部位；咖啡酸作為蒲公英的質(zhì)量控制成分可能不適合，建議增加蒲公英有效成分之一多糖的含量測定作為質(zhì)量控制指標(biāo)。

蒲公英；咖啡酸；綠原酸；多糖；總黃酮

蒲公英為菊科植物蒲公英TaraxacummongolicumHand.-Mazz.、堿地蒲公英TaraxacumborealisinenseKitam.或同屬數(shù)種植物的干燥全草，古稱仆公罌、黃花地丁等，其味苦性寒，具有清熱解毒、消腫散結(jié)的功能，是清熱解毒藥的代表之一。現(xiàn)代研究證實(shí)，蒲公英富含酚酸、黃酮、多糖、膽堿等化學(xué)成分，具有廣譜抑菌、利膽保肝、抗內(nèi)毒素、健胃、抗炎、抗腫瘤和免疫促進(jìn)等作用[1]。《中華人民共和國藥典》(《中國藥典》)2015版規(guī)定蒲公英咖啡酸含量不得少于0.020%[2]353。

蒲公英及近源多種植物是田間常見雜草，野生資源非常豐富。但是從20世紀(jì)90年代起，各地大量種植蒲公英主要作為畜牧飼料和特種蔬菜使用[3-4]，在2005年前后種植蒲公英進(jìn)入藥材市場(家種蒲公英)，家種蒲公英每年收割地上部分2～3次，由于其具有生長迅速、再生力強(qiáng)的特點(diǎn)，故產(chǎn)量高、收益好[4]；而野生蒲公英由于勞動力成本的提高價(jià)格偏高，家種蒲公英逐漸成為市場主流。從藥材部位上看，為了追求利益最大化，藥材市場上的家種蒲公英只是地上部分入藥，不符合《中國藥典》對于蒲公英需全草入藥的規(guī)定；而野生蒲公英則是全草入藥，根的重量約占全草的30%～50%，且常帶花序，故兩者用藥部位相差較大。因此，筆者在藥材市場購買收集了4個(gè)主產(chǎn)地的家種和野生蒲公英藥材，測定咖啡酸、綠原酸、多糖及總黃酮的含量，以期研究家種和野生蒲公英的質(zhì)量差異。

1 儀器與材料

1.1 儀器

上海精科LC-210型高效液相色譜儀(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；UItra-3660紫外可見分光光度計(jì)(北京普源精電科技有限公司)；HANGPING JA1003電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；FW-100高速粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)；HH-6 型恒溫水浴鍋(江蘇國華電器有限公司)。

1.2 試劑與對照品

綠原酸(批號：110753-201415)、咖啡酸(批號：110885-200102)、D-無水葡萄糖(批號：110833-201604)、蘆丁(批號：100080-201409)購于中國食品藥品檢定研究院。甲醇(批號：20161013)、乙醇(批號：20161016)、磷酸(批號：20160922)等化學(xué)試劑均為分析純(北京化工廠)；娃哈哈純凈水；色譜級乙腈(Fisher)。

1.3 蒲公英藥材

野生、家種樣品購于河北安國藥材市場和安徽亳州藥材市場，經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院藥檢室王建升主任藥師鑒定均為菊科植物蒲公英TaraxacummongolicumHand.-Mazz.的干燥地上部分或干燥全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 咖啡酸和綠原酸含量測定

2.1.1 色譜條件 Waters SymmetryC18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.3%磷酸水溶液，梯度洗脫(0～15 min，10%乙腈；16～30 min，10～25%乙腈)，柱溫：30 ℃，流速：1 mL·min-1，進(jìn)樣量：10 μL；檢測波長：323 nm。

2.1.2混合對照品溶液的制備 分別取咖啡酸、綠原酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含咖啡酸、綠原酸分別為51.2、64 μg的溶液。

2.1.3供試品溶液的制備 取本品粗粉約0.5 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入5%甲酸的甲醇溶液10 mL，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，取出，放冷，再稱定重量，用5%甲酸的甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，過0.45 μm微孔濾膜，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取上述混合對照品溶液2、5、10、15、20 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，記錄峰面積。以對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得出2個(gè)化合物的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)，見表1。

表1 咖啡酸、綠原酸的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍

2.1.5精密度試驗(yàn) 取蒲公英藥材0.5 g，精密稱定，按上述方法制備成供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次測定分析，進(jìn)樣量10 μL，記錄峰面積。結(jié)果顯示咖啡酸、綠原酸峰面積的RSD分別為0.42%、0.73%，表明儀器精密度良好。

2.1.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12 h進(jìn)行進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示不同時(shí)間咖啡酸和綠原酸峰面積的RSD分別為0.56%、0.83%，表明供試品溶液在室溫條件下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.7重復(fù)性試驗(yàn) 取同一蒲公英藥材粉末0.5 g，共6份，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，按2.1.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量10 μL。計(jì)算得咖啡酸的RSD為1.23%，綠原酸的RSD=1.45%，表明本方法的重現(xiàn)性良好。

2.1.8加樣回收率試驗(yàn) 取同一蒲公英藥材粉末0.25 g，共6份，精密稱定，分別加入適量的咖啡酸和綠原酸對照品，按上述方法制成供試品溶液，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果咖啡酸平均加樣回收率為100.64%，RSD=2.03%；綠原酸平均加樣回收率為101.13%，RSD=2.25%；結(jié)果表明本方法的加樣回收率符合要求。

2.1.9 樣品測定 取不同來源的蒲公英藥材，粉碎成粗粉，分別取粉碎后的樣品適量，精密稱定，按2.1.3項(xiàng)下條件制備成供試品溶液，過0.45 μm微孔濾膜，注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量為10 μL，以干燥品計(jì)算樣品的含量。具體情況見圖1和表2。

注：A.混合對照品；B.供試品；1.綠原酸；2.咖啡酸。圖1 蒲公英與混合對照品溶液 HPLC圖

編號樣品來源樣品產(chǎn)地咖啡酸/mg·g-1綠原酸/mg·g-11野生湖北003200262野生安徽005300153野生遼寧004000144野生河北003400115家種湖北002900136家種安徽003300087家種遼寧005500208家種河北00450016

結(jié)果顯示，湖北和安徽產(chǎn)的野生蒲公英中咖啡酸和綠原酸含量高于家種品，而遼寧和河北產(chǎn)的家種蒲公英的兩成分含量高于野生品。

2.2 多糖與總黃酮含量測定

2.2.1 多糖含量測定 參照《中國藥典》2015年版“枸杞子”項(xiàng)下多糖的測定方法進(jìn)行測定[2]249，結(jié)果見表3。

2.2.2 總黃酮含量測定 參照《中國藥典》2015年版“槐花”項(xiàng)下總黃酮的測定方法進(jìn)行測定[2]355，結(jié)果見表3。

多糖含量結(jié)果顯示，4個(gè)產(chǎn)地的野生樣品均顯著高于家種品；單獨(dú)取產(chǎn)于遼寧的兩個(gè)根樣品，測定其中多糖的含量，可看出二者的差異可能來自于家種蒲公英藥材不含有根，這4份野生藥材的根重量占比分別為：湖北43%、安徽32%、遼寧50%、河北45%。黃酮含量結(jié)果顯示：湖北和遼寧產(chǎn)野生品低于家種品；而安徽和河北產(chǎn)野生品高于家種品。

表3 蒲公英中多糖和總黃酮的含量(n=6)

3 討論

對4個(gè)不同產(chǎn)地野生和家種蒲公英樣品中多成分含量比較，發(fā)現(xiàn)野生藥材的多糖含量顯著高于相應(yīng)地區(qū)的家種藥材，可能因?yàn)榧曳N藥材不帶根，而根中的多糖含量顯著高于其他部位，有研究報(bào)道蒲公英多糖具有抗氧化、抗腫瘤、降血糖及抗炎等功效，是蒲公英的重要有效成分[5]，因此蒲公英藥材使用不符合《中國藥典》要求的不帶根的家種產(chǎn)品，可能帶來臨床療效的下降，有待開展深入的功效比較研究。

咖啡酸、綠原酸等酚酸類成分在蒲公英中是含量較低的成分，在家種和野生品之間差異不明顯，總黃酮含量在野生品和家種品之間無明顯差異，《中國藥典》2015年版規(guī)定蒲公英中咖啡酸含量不低于0.020%，從本文的檢測結(jié)果看，所有野生和家種樣品均達(dá)到該標(biāo)準(zhǔn)，因此該指標(biāo)成分不能有效地控制蒲公英的質(zhì)量，建議增加其他的質(zhì)量指標(biāo)，如多糖含量。

[1] 林云，江林，蔣健，等.蒲公英的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代中藥，2011，13(8)：42-47.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[3] 田永生，趙曉明.蒲公英二倍體與四倍體的幾個(gè)生理指標(biāo)比較[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2007，23(6)：345-348.

[4] 郭文場，廣德，高柏成.特種保健蔬菜蒲公英的栽培技術(shù)[J].特種經(jīng)濟(jì)動植物，1998(2)：25.

[5] 謝沈陽，楊曉源，丁章貴，等.蒲公英的化學(xué)成份及其藥理作用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24(增刊1)：141-151.

ComparativeStudyofWildandCultivatedTaraxacummongolicum

YANG Hui1，WANG Jiansheng1，GUO Baolin2*，HAN Bo1，LIU Junling1，JI Jianning3

(1.Guang'anmenHospital，ChinaAcademyofChineseMedicalSciences，Beijing100053，China；2.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，PekingUnionMedicalCollege，ChinaAcademyofChineseMedicalScience，Beijing100193，China；3.DongzhimenAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicineBeijing101100，China)

Objective：To compare the quality of the wild and cultivatedTaraxacummongolicum.MethodsThe content of chlorogenic acid and caffeic acid was determined by a rapid HPLC method.The content of total flavonoids and polysaccharide was determined by UV-visible spectrophotometry.ResultsandConclusionThere was no significant difference in the contents of caffeic acid，chlorogenic acid and flavonoids between the wild and cultivatedT.mongolicum，but the content of polysacharide in the wild was significantly higher than in the cultivated，for the content of polysaccharide specially in the root was higher than that in other parts.The coffee acid may not be suitable as a quality control factor.It is suggested to have the content of polysaccharide as a quality control index.

Taraxacummongolicum；caffeic acid；chlorogenic acid；polysaccharide；total flavonoids

*

郭寶林，研究員，研究方向：藥用植物資源、鑒定、分類；E-mail：guobaolin010@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.10.010

2017-07-01)