蔡滿紅++++++程青

[摘要] 目的 探討妊娠期糖尿?。℅DM）巨大兒與胎盤組織中胰島素樣生長因子-1（IGF-1）、胰島素樣生長因子-2（IGF-2）表達(dá)水平的相關(guān)性。 方法 選取2014年4月～2016年12月在南京醫(yī)科大學(xué)附屬婦產(chǎn)醫(yī)院產(chǎn)科住院并確診為GDM的初產(chǎn)婦分娩的巨大兒40例為GDM巨大兒組，同期健康初產(chǎn)婦分娩的巨大兒40例為健康巨大兒組，同期健康初產(chǎn)婦分娩的正常體重兒40例為對照組。比較三組新生兒胎盤組織中IGF-1和IGF-2表達(dá)水平，分析IGF-1和IGF-2表達(dá)水平與GDM巨大兒發(fā)生的相關(guān)。 結(jié)果 GDM巨大兒組胎盤組織中IGF-1、IGF-2 mRNA表達(dá)水平均顯著高于健康巨大兒組及對照組（P < 0.01），健康巨大兒組與對照組間胎盤組織中IGF-1、IGF-2 mRNA水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；二元Logistic回歸分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)：IGF-1、IGF-2水平為GDM巨大兒發(fā)生的危險(xiǎn)因素（OR = 3.490，95%CI：2.537～6.928，P = 0.017；OR = 2.077，95%CI：1.098～4.997，P=0.023）。 結(jié)論 GDM巨大兒患者胎盤組織中IGF-1、IGF-2表達(dá)水平顯著增高，IGF-1、IGF-2表達(dá)水平與GDM巨大兒的發(fā)生顯著相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 妊娠期糖尿?。痪薮髢?；胎盤；胰島素樣生長因子-1；胰島素樣生長因子-2

[中圖分類號] R714.256 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）10（c）-0112-04

Correlation between expression of IGF-1 and IGF-2 in placenta and the occurrence of gestational diabetes mellitus

CAI Manhong CHENG Qing▲

Department of Obstetrics and Gynecology， Affiliated Maternity Hospital of Nanjing Medical University， Nanjing Province， Jiangsu 210004， China

[Abstract] Objective To explore the correlation of gestational diabetes mellitus （GDM） macrosomia with the expression of insulin-like growth factor-1 （IGF-1） and insulin-like growth factor-2 （IGF-2）. Methods Forty neonates with macrosomia given birth by primiparas who were admitted to Department of Obstetrics of the Affiliated Maternity Hospital of Nanjing Medical University from April 2014 to December 2016 and confirmed with GDM were assigned to the GDM macrosomia group， 40 neonates with macrosomia given birth by healthy primiparas over the same period were assigned to the healthy macrosomia group， and 40 neonates with normal weigh given birth by healthy primiparas over the same period were assigned to the control group. The expression of IGF-1 and IGF-2 in the neonate′s placenta was compared between the three groups， and the correlation of IGF-1 and IGF-2 expression with the development of GDM macrosomia was analyzed. Results Expression of IGF-1 and IGF-2 mRNA in placenta was significantly higher in GDM macrosomia group than that in healthy macrosomia group and control group （P < 0.01）， and there were no statistically significant differences between healthy macrosomia group and control group in the levels of IGF-1 or IGF-2 mRNA （P > 0.05）； binary Logistic regression analysis identified IGF-1 and IGF-2 levels as the risk factors for macrosomia in GDM （OR = 3.490， 95%CI： 2.537-6.928， P = 0.017； OR = 2.077，95%CI： 1.098-4.997， P = 0.023）. Conclusion Expression of IGF-1 and IGF-2 in placenta is significantly elevated in patients with GDM macrosomia； expression of IGF-1 and IGF-2 is significantly correlated with the development of GDM macrosomia.endprint

[Key words] Gestational diabetes mellitus； Giant children； Placenta； Insulin-like growth factor-1； Insulin-like growth factor-2

妊娠期糖尿?。╣estational diabetes mellitus，GDM）是糖尿病的一種特殊類型，指懷孕期間首次出現(xiàn)或發(fā)生的不同程度的糖代謝異常的現(xiàn)象。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國GDM發(fā)病率在5%左右，且呈現(xiàn)急劇上升趨勢[1-2]。孕婦GDM與巨大兒發(fā)生關(guān)系密切，巨大兒是GDM孕婦臨床上最常見的不良妊娠結(jié)局。目前已有研究發(fā)現(xiàn)，母體血清胰島素樣生長因子（insulin—like growth factors，IGF）在調(diào)節(jié)胎兒發(fā)育及胎盤生長方面有著顯著作用，已逐漸成為近期研究熱點(diǎn)，但基于孕婦胎盤組織中IGF mRNA表達(dá)水平與巨大兒發(fā)生的相關(guān)性報(bào)道較少。本研究擬通過對比分析IGF-1、IGF-2基因mRNA在GDM孕婦分娩的巨大兒、健康孕婦分娩的巨大兒及健康孕婦分娩的正常體重兒胎盤組織中的表達(dá)水平，探討IGF-1及IGF-2在GDM巨大兒發(fā)生中的作用，為臨床上防治GDM及巨大兒的發(fā)生提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年4月～2016年12月在南京醫(yī)科大學(xué)附屬婦產(chǎn)醫(yī)院產(chǎn)科住院并確診為GDM的初產(chǎn)婦分娩的巨大兒40例為GDM巨大兒組，孕婦平均年齡（30.2±1.3）歲，分娩孕齡39～40周。納入標(biāo)準(zhǔn)：①GDM孕婦，即受試者妊娠24～28周口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）[3-4]中，空腹及服糖后1、2 h的血糖值分別達(dá)到或超過5.1 mmol/L（91.8 mg/dL）、10.0 mmol/L（180 mg/dL）、8.5 mmol/L（153 mg/dL）；②新生兒體重≥4000 g[5]；③初次妊娠，足月單胎；④病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病例資料不完整；②孕婦合并其它類型妊娠并發(fā)癥；③孕婦合并其他系統(tǒng)疾病。隨機(jī)選取同期健康初產(chǎn)婦分娩的巨大兒40例為健康巨大兒組，孕婦年齡（28.6±0.3）歲，分娩孕齡39～40周；同時選取同期健康初產(chǎn)婦分娩的正常體重兒40例為對照組（C組），孕婦平均年齡（29.1±0.4）歲，分娩孕齡39～40周。三組孕婦年齡、孕齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05），具有可不行。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)進(jìn)行。

1.2 檢測方法

1.2.1 胎盤組織的取材及處理 胎盤娩出后10 min內(nèi)于近臍根部胎盤母體面中央（避開鈣化、壞死、出血點(diǎn)）取2份體積約1 cm3的絨毛組織，用已滅菌的生理鹽水將其反復(fù)沖洗，去凈血液，裝入1.5 mL EP管封存，標(biāo)記受試者姓名及日期，置于液氮中備用，以待后續(xù)提取RNA等，行RT-PCR檢測。

1.2.2 RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄 應(yīng)用Invitrogen公司生產(chǎn)的Trizol試劑盒，按說明書的步驟分別提取RNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)采用 Fermentas公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒[RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit（K1621）]，按說明書使用。使用NANO DROP 2000試劑盒檢測樣本cDNA的濃度與純度。

1.2.3 RT-PCR反應(yīng)檢測IGF-1、IGF-2 以GAPDH作為內(nèi)參基因，引物由上海生工公司？誖合成，引物序列如下，見表1。用Oligo 6.0評價(jià)引物。建立PCR反應(yīng)體系，先在95℃條件下預(yù)變性10 s，然后95℃條件下正式變性5 s，60℃退火延伸30 s，擴(kuò)增40個循環(huán)；用ABI7500分析軟件定量分析PCR結(jié)果，用各樣品的濃度對數(shù)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中Ct值為反應(yīng)管內(nèi)熒光信號達(dá)到閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，△△Ct表示試驗(yàn)組與對照組△Ct之差，用2^-△△Ct表示目的基因的相對表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，多因素分析采用Logistic回歸分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組新生兒胎盤組織中IGF-1、IGF-2的mRNA表達(dá)水平的比較

GDM巨大兒組胎盤組織中IGF-1、IGF-2 mRNA表達(dá)水平均顯著高于健康巨大兒組及對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；健康巨大兒組與對照組間胎盤組織中IGF-1、IGF-2 mRNA水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

2.2 IGF-1、IGF-2與GDM巨大兒發(fā)生的相關(guān)性

以GDM孕婦是否發(fā)生巨大兒為因變量，以年齡、孕齡、IGF-1、IGF-2為自變量，進(jìn)行二元Logistic回歸分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IGF-1、IGF-2水平為GDM巨大兒發(fā)生的影響因素，且均為危險(xiǎn)因素（OR>1）。

3討論

巨大兒發(fā)生率在GDM的孕婦中顯著高于正常孕婦[6-8]，但具體發(fā)病機(jī)制至今仍不明確。目前主要觀點(diǎn)認(rèn)為，孕婦體內(nèi)持續(xù)代謝紊亂導(dǎo)致的高血糖狀態(tài)與巨大兒的發(fā)生有密切關(guān)系[9-10]。巨大兒是GDM孕婦臨床上最常見的不良妊娠結(jié)局，GDM巨大兒在分娩過程中產(chǎn)婦較易發(fā)生產(chǎn)道損傷、產(chǎn)程延長、產(chǎn)后出血、子宮破裂等；而巨大兒則較易出現(xiàn)肩難產(chǎn)、胎兒窘迫、新生兒鎖骨骨折、新生兒頭顱損傷、臂叢神經(jīng)損傷等并發(fā)癥，且出生后新生兒肺炎、低血糖、高膽紅素血癥等圍生期并發(fā)癥發(fā)生率也有所升高，因此探索預(yù)防GDM巨大兒發(fā)生的有效方法有著重要的意義。

近年來研究證明[11-13]孕婦血清中IGF因子的表達(dá)情況與新生兒體重關(guān)系密切，IGF-l、IGF-2表達(dá)水平降低與胎兒宮內(nèi)生長受限有直接關(guān)系，且孕婦血清中IGF-l、IGF-2表達(dá)增加時巨大兒出生率較正常孕婦高[14]。IGF是一類具有胰島素樣代謝和促有絲分裂功能的多肽，由IGF-1和IGF-2兩種同源多肽組成[15-16]。其中IGF-1主要在出生后及成年期發(fā)揮作用介導(dǎo)生長激素的促生長效應(yīng)，IGF-2是重要的胚胎生長和發(fā)育的調(diào)節(jié)因子。研究表明[17]，胎兒臍血中IGF-1因子的表達(dá)量與母體的身高、體重、產(chǎn)前的體重指數(shù)、懷孕后體重增加的比值均呈正相關(guān)[18-19]，這正是巨大兒形成的重要參數(shù)。IGF-2可與IGF-1R結(jié)合，進(jìn)而調(diào)節(jié)胎盤功能，促進(jìn)胎盤生長，并促進(jìn)胎兒的生長發(fā)育[20]，但目前關(guān)于IGF-2表達(dá)水平與巨大兒發(fā)生的關(guān)系尚存在爭議。endprint

本研究針對孕婦胎盤中IGF-1、IGF-2基因的mRNA表達(dá)水平與GDM巨大兒發(fā)生的相關(guān)性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，GDM巨大兒組胎盤組織IGF-1、IGF-2表達(dá)水平顯著高于于健康巨大兒組及對照組（P < 0.01），而健康巨大兒組胎盤組織IGF-1、IGF-2表達(dá)水平與對照組相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），由此可推測，GDM孕婦胎盤中IGF-1、IGF-2表達(dá)顯著上升。后期通過二元Logistic回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IGF-1、IGF-2水平為GDM巨大兒發(fā)生的影響因素，且均為危險(xiǎn)因素（OR > 1），進(jìn)一步提示GDM孕婦巨大兒發(fā)生與IGF-1、IGF-2表達(dá)水平有著顯著的關(guān)系。

綜上所述，GDM巨大兒患者胎盤組織中IGF-1、IGF-2表達(dá)水平顯著增高，IGF-1、IGF-2表達(dá)水平與GDM巨大兒的發(fā)生顯著相關(guān)。由于本研究樣本量有限，胎盤組織中IGF-1、IGF-2與巨大兒發(fā)生的關(guān)系及其具體機(jī)制有待多樣本的深入研究。

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（收稿日期：2017-08-02 本文編輯：任 念）endprint