常超越 , 張召興 , 龐洪澤 , 李蘊玉 , 張香齋 , 賈青輝 , 李佩國

(河北科技師范學院 河北省預防獸醫(yī)學重點實驗室 ， 河北 秦皇島 066604)

23味中藥對雞白痢沙門菌地方株體外抑菌試驗

常超越 , 張召興 , 龐洪澤 , 李蘊玉 , 張香齋 , 賈青輝 , 李佩國

(河北科技師范學院 河北省預防獸醫(yī)學重點實驗室 ， 河北 秦皇島 066604)

為了研究23種中藥對雞白痢沙門菌地方株S1、S2及標準株的體外抑菌試驗效果。方法：利用平板瓊脂打孔法和試管二倍梯度稀釋法分別測定抑菌圈直徑大小、最小抑菌濃度(MIC)。結(jié)果表明：雞白痢沙門菌地方株S1、S2對黃芩、連翹、五倍子等8種藥物極度敏感;對其他的藥物存在不同程度的敏感性。本試驗研究為雞白痢沙門菌地方株中藥防治提供理論基礎。

雞白痢 ； 沙門菌 ；中藥 ； 體外抑菌試驗

雞白痢是由雞白痢沙門菌(SalmonellaPullrum)引起不同階段的雞的一種細菌性疾病，尤其對雛雞易感，該菌通過水平傳播，嚴重危害著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展[1-3]。該菌易產(chǎn)生耐藥性，在養(yǎng)雞過程中抗生素的不合理使用，使SalmonellaPullrum的抗藥性問題日漸上升，嚴重威脅人們的健康[4]。中藥具有抗菌消炎、無殘留、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點[5]。中藥的使用可以降低抗生素類藥物殘留，減少耐藥性。

本試驗對從臨床分離的致病性雞白痢沙門菌地方株代表株S1、S2進行體外抑菌試驗，以標準菌株ATCC13313作為質(zhì)控菌株。利用平板瓊脂打孔法和試管二倍稀釋法，篩選出對雞白痢沙門菌地方株敏感的中藥，為致病性雞白痢沙門菌中藥防治提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 菌株 致病性雞白痢沙門菌S1、S2為秦皇島地區(qū)流行株，標準質(zhì)控菌株ATCC13313由河北省預防獸醫(yī)學重點實驗室保存。

1.2 黃芩、訶子、蘇木、厚樸、五倍子、紫花地丁、夏枯草、五味子、烏梅、秦皮等23種中藥，均購自秦皇島民樂醫(yī)藥有限公司；S.S.營養(yǎng)培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯，均購自上海華美生物技術(shù)有限公司；常規(guī)試劑及儀器由河北省預防獸醫(yī)學重點實驗室提供。

1.3 菌液的制備及計數(shù) 雞白痢沙門菌地方代表株S1、S2及標準菌株ATCC13313的菌種復蘇，接種于S.S.培養(yǎng)基上，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～16 h，挑取菌落接種于營養(yǎng)肉湯中，37 ℃震蕩培養(yǎng)12 h。利用平板菌落計數(shù)器進行菌落計數(shù)。

1.4 中藥藥液的制備 參考相關文獻制備中草藥藥液[6]，稱量各單味中藥50 g后，加入5～10倍蒸餾水浸泡1 h，煮開后文火煎0.5 h左右，8層紗布過濾；中藥殘渣加入5倍蒸餾水煮開后文火煎0.5 h左右，8層紗布過濾；把兩次藥液文火濃縮量到50 mL，即每毫升含原生藥1 g，離心取上清，調(diào)整pH值為7.3，121 ℃高壓滅菌后，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 單味中藥抑菌圈直徑的測定 參考文獻[5],采用平板瓊脂打孔法，確定中藥抑菌圈的直徑的大小。通過平板菌落計數(shù)法將菌液的濃度調(diào)至到107～108CFU/mL，取0.1 mL均勻進行涂板，待菌液完全被吸收，用6 mm打孔器，進行打孔，每孔內(nèi)加滿中藥藥液。置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～16 h，測量抑菌圈直徑，每種藥物的藥敏試驗重復3次，取其平均值。判定標準：抑菌直徑≥20 mm為極敏；20 mm>抑菌直徑≥15 mm為高敏；15 mm>抑菌直徑≥10 mm為中敏；10 mm以下為低敏[8]。

1.6 單味中草藥最小抑菌濃度(MIC)測定 按照采用試管二倍稀釋法進行，確定中藥最小抑菌濃度(MIC)[9]。取無菌的試管10支進行編號，每管加入營養(yǎng)肉湯4 mL,在第1管內(nèi)加入中藥液4 mL，取出4 mL放入第2管，以此類推，稀釋到第9管，棄去4 mL，即藥物的濃度依次為1 g/mL、500 mg/mL、250 mg/mL、125 mg/mL、62.5 mg/mL、31.25 mg/mL、15.63 mg/mL、7.81 mg/mL，第10管為空白對照管，在1～10管加入菌液10 μL(107～108CFU/mL),每種藥做3個平行，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。用無菌棉簽分區(qū)劃線法將個稀釋不同梯度的試驗菌液接種于普通培養(yǎng)基上，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。無菌生長的區(qū)域為該藥的最小的抑菌濃度(MIC)。

2 試驗結(jié)果分析

2.1 單味中藥抑菌圈直徑的大小結(jié)果 由表1可知，雞白痢沙門菌地方株S1對黃芩、連翹、厚樸、五倍子、夏枯草、烏梅、秦皮、訶子、蘇木8種藥物極度敏感；地方株S2對白頭翁、連翹、厚樸、五倍子、夏枯草、五味子、烏梅、秦皮、訶子、蘇木8種藥物極度敏感；地方株S1、S2對紫花地丁、黃連2種藥物高度敏感；其余的藥物對雞白痢沙門菌地方株S1、S2及標準菌株均沒有效果。

表1 中藥對雞白痢沙門菌體外抑菌試驗 /mm

2.2 單味中藥最小抑菌濃度(MIC)測定結(jié)果 由表2可知，雞白痢沙門菌地方株S1對五味子、五倍子、烏梅3種藥物的MIC在15.65～31.25 mg/mL之間，對黃芩、連翹、夏枯草、秦皮、訶子、黃連、厚樸、蘇木8種藥物的MIC在62.5～125 mg/mL之間，對紫花地丁、白頭翁2種藥物效果較差，MIC在250～500 mg/mL之間；地方株S2對五倍子、夏枯草、五味子、烏梅4種藥物的MIC的均是 31.25，對黃芩、連翹、厚樸、秦皮、訶子、蘇木6種藥物的MIC在62.5～125 mg/mL之間，對白頭翁、黃連、紫花地丁3種藥物的藥物效果較差，MIC在250～500 mg/mL之間；雞白痢沙門菌地方株S1、S2及標準菌株均沒有效果

表2 中藥對雞白痢沙門菌地方株的MIC (mg/mL)

3 討論

雞沙門菌病是由沙門菌屬中的一種或多種沙門菌所引起的禽類急性或慢性疾病的總稱[10]。雞白痢可引起不同日齡的級發(fā)病，主要侵害10～20日齡的雛雞，雛雞主要表現(xiàn)白色的下痢，導致大批的雛雞死亡[11]。成年雞感染后可以長期帶毒和排毒，不僅可以通過水平傳播，也可以通過垂直傳播，導致雞白痢廣泛流行[12]。感染后的禽及其產(chǎn)品經(jīng)過食物鏈形式傳染給人，引起人類食品源性疾病，危害著人們的健康[13]。目前采用抗生素來有效控制雞沙門菌病，根據(jù)該菌易產(chǎn)生耐藥性的特點，大大降低了抗生素的治療效果。

本試驗通過對雞白痢沙門菌地方流行株S1、S2進行了體外抑菌試驗。結(jié)果顯示，S1、S2對白頭翁、黃芩、連翹、厚樸、五倍子、烏梅、秦皮、訶子、蘇木9種藥物極度敏感。夏美玲等[14]報道了黃連、秦皮對傷寒沙門菌高度敏感，與本試驗存在一定的差異性，可能由于不同病原體感染，存在著差異性。代如意等[15]報道了采用二倍試管稀釋法分別測定各中藥提取物對雞白痢沙門菌的MIC，結(jié)果顯示，訶子、紫花地丁、夏枯草等提取物對雞白痢沙門菌的MIC在62.5～125mg/mL之間，與本試驗結(jié)果一致，其他藥物的MIC也存在一定的差異性，可能由于中藥的制備工藝不同。張德顯等[16]等報道了黃連、黃芩和烏梅3種中藥對雞白痢沙門菌的抑菌效果最好。本試驗為臨床應用中藥防治雞白痢沙門菌地方流行株提供理論基礎。

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TheinvitroantibacterialeffectofsingleChineseherbalmedicineontheLocalstrainsofSalmonellaPullruminchicken

CHANG Chao-yue , ZHANG Zhao-xing , PANG Hong-ze ， LI Yun-yu , ZHANG Xiang-zhai , JIA Qing-hui , LI Pei-guo

(KeyLaboratorry of preventive Veterinary Medicine in Heibei Province, Hebei Normal University of Science and Technology, Qinhuangdao 066604, China)

In this study, the in vitro antibacterial effect of 23 Chinese herbal medicines on the local strains ofSalmonellaPullrumisolated from chicken, was analyzed. Methods: The diameter of the inhibition zone was measured by the agar diffusion plate method. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by the tube serial two-fold dilution method. The results showed that the local strains ofSalmonellaPullrumwas extremely sensitive to 8 kinds of Chinese medicines, such asBaikalSkullcap,ForsythiaandGallnut. Other drugs had different degree of sensitivity to the local strains ofSalmonellaPullrum. Eight kinds of Chinese medicines have good antibacterial effects onSalmonellaPullrumand it provides a theoretical basis on prevention and control ofSalmonellaPullrumby Chinese medicines.

Pullorosis;Salmonella; Chinese herbal medicine ; In vitro antibacterial test

LI Pei-guo

S853.72

A

0529-6005(2017)09-0031-03

2016-11-03

河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系技術(shù)研究崗位項目(HBCT2013090203)

常超越(1991-)，女，碩士生，主要從事動物病原微生物及其防控方面的研究，E-mail: changchaoyue2016@163.com

張召興(1988-)，男，碩士生，主要從事動物病原微生物及其防控方面的研究，E-mail：keshiyjszzx0224@126.com

注：張召興與常超越對本文具有同等貢獻

李佩國，E-mail: lpeiguo@163.com