夏秀東,劉小莉,王 英,李 瑩,范琳琳,臧 泉,周劍忠*

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品加工研究所,江蘇 南京 210014;2.江蘇南京中亮有機(jī)蔬果食品有限公司,江蘇 溧水 211200)

藍(lán)莓人參保健酒中主要人參皂苷的檢測

夏秀東1,劉小莉1,王 英1,李 瑩1,范琳琳1,臧 泉2,周劍忠1*

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品加工研究所,江蘇 南京 210014;2.江蘇南京中亮有機(jī)蔬果食品有限公司,江蘇 溧水 211200)

利用HPLC法,檢測了兩種藍(lán)莓人參保健酒中主要人參皂苷Rg1、Rc、Rb2和Rd的含量。結(jié)果顯示：藍(lán)莓酒中添加人參的保健酒和藍(lán)莓配制酒添加人參的保健酒中的Rg1和Rd含量沒有顯著性差異,而后一種保健酒中的Rc和Rb2含量則均顯著高于前一種保健酒中的；本研究所用的檢測方法可準(zhǔn)確分析兩種藍(lán)莓人參保健酒中的主要人參皂苷含量。

藍(lán)莓酒;藍(lán)莓配制酒;藍(lán)莓人參保健酒;人參;人參皂苷；檢測

藍(lán)莓因含有大量的花青素、酚酸、黃烷醇等多種生物活性物質(zhì)而成為最受歡迎的功能性保健漿果之一。藍(lán)莓具有抗氧化、抗炎、抗癌、抗輻射、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)視力、軟化血管等多種保健功能,有“第三代水果”和“生命之果”的美譽(yù)[1]。隨著人們對功能性保健食品需求量的不斷增加,對保健飲品的需求也不斷增加,其中以藍(lán)莓為原料的保健飲品備受人們的喜愛。

人參為五加科人參屬植物的干燥根或干燥莖,皂苷類及多糖類是其主要的生物活性成分,其中皂苷類更具有廣泛的藥理作用。人參因具有抗疲勞、抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松、抗衰老、調(diào)節(jié)免疫、調(diào)血脂、降血糖、保肝、保護(hù)中樞神經(jīng)及心腦血管系統(tǒng)等功效而被廣泛應(yīng)用于藥品和食品中,在我國有著2000多年的藥用歷史[2]。人參在世界范圍內(nèi)的食品添加劑中得到了廣泛使用,中國政府也批準(zhǔn)了人參為新功能性食品,人參的使用量連年增加。人參具有廣泛的藥理學(xué)活性和臨床應(yīng)用,已應(yīng)用色譜方法從人參根、根莖及其炮制品紅參中分離、鑒定了 130余個皂苷類成分,人參皂苷(ginsenoside)幾乎反映了人參的全部生物學(xué)活性[3]。因此,人參皂苷已作為評價人參質(zhì)量的重要指標(biāo)性成分,人參質(zhì)量的評價已從感官向物質(zhì)基礎(chǔ)分析邁進(jìn),更加科學(xué)化[4]。

本研究將人參添加到藍(lán)莓酒和藍(lán)莓配制酒中,比較分析了它們的主要人參皂苷含量,旨在為開發(fā)新型保健果酒提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試藍(lán)莓、人參由江蘇省南京市中亮有機(jī)蔬果食品有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)儀器與試劑

1.2.1 試驗(yàn)儀器 JT-B均質(zhì)器，河南兄弟儀器設(shè)備有限公司;高效液相色譜系統(tǒng)(HPLC) Waters，Xtimate C18色譜柱，美國Welch公司;DP-SY-360超聲波提取儀，北京亞歐德鵬科技有限公司;DJ300型電子天平，中國輕工業(yè)機(jī)械總公司常熟衡器工業(yè)公司;DJ1型單道打漿機(jī)，靖江中威食品機(jī)械有限公司。

1.2.2 主要試劑 人參皂苷Rg1(貨號:68317)、人參皂苷Rc(貨號:44987)、人參皂苷Rb2(貨號:41868)和人參皂苷Rd(貨號:01518)，均購自Sigma-Aldrich;安琪酵母購自上海穗禾貿(mào)易有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 藍(lán)莓酒的制作 用打漿機(jī)將藍(lán)莓打漿，然后添加0.3 mL/kg的果膠酶，于35 ℃條件下酶解2.5 h；然后添加0.1%(m/m)的釀酒酵母和14%(m/m)的蔗糖，于25 ℃條件下發(fā)酵3周,發(fā)酵酒精度為12%vol。

1.3.2 配制酒的制作 將上述酒精度數(shù)為12%vol的藍(lán)莓酒和酒精度數(shù)為58%vol的白酒按體積比1∶1混合，配制成酒精度數(shù)為35%vol的配制酒。

1.3.3 藍(lán)莓人參保健酒的制作 將人參粉碎后過120目篩子,按照1%(m/v)的添加量將其加入藍(lán)莓酒和配制酒中,先于40 ℃條件下以200 r/min震搖6 h，然后以100000 r/min離心15 min,取上清即得到藍(lán)莓人參保健酒。

1.3.4 人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 分別稱取Rg1、Rc、Rb2和Rd 4種人參皂苷10 mg，溶于1 mL甲醇中，制成10 mg/mL的人參皂苷母液；然后用甲醇稀釋成濃度分別為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.20 mg/mL的以上4種人參皂苷液；最后用0.45 μm濾膜過濾,備用。

1.3.5 藍(lán)莓人參保健酒中人參皂苷的測定[5]將藍(lán)莓人參保健酒經(jīng)0.22 μm濾膜過濾,利用高效液相色譜技術(shù)檢測藍(lán)莓人參保健酒中的主要人參皂苷含量。選用C18色譜柱(規(guī)格為150 mm×4.6 mm,5 μm);采用乙腈-水作為流動相,柱溫35 ℃,進(jìn)樣量20 μL,檢測波長203 nm。采用梯度洗脫,洗脫程序?yàn)?0～40 min,18%～21%乙腈;40～42 min,21%～26%乙腈;42～46 min,26%～32%乙腈;46～66 min,32.0%～33.5%乙腈;66～71 min,33.5%～38.0%乙腈;71～86 min,38%～65%乙腈;86～91 min,65%乙腈;91～96 min,65%～85%乙腈;96～103 min,85%乙腈;103～105 min,85%～18%乙腈;105～106 min,18%乙腈;體積流量1.0 mL/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

在高效液相色譜法檢測中，目標(biāo)物質(zhì)與雜質(zhì)之間以及目標(biāo)物質(zhì)之間的分離效果會直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度。由圖1結(jié)果可見，本研究主要分析的4種人參皂苷Rg1、Rc、Rb2和Rd的保留時間分別為47.483、49.508、52.342和60.249 min,在本研究所用的檢測方法中有很強(qiáng)的響應(yīng)值和分離效果。

圖1 人參皂苷標(biāo)樣Rg1、Rc、Rb2和Rd的色譜圖

為了準(zhǔn)確分析藍(lán)莓人參保健酒中人參皂苷的含量,以標(biāo)準(zhǔn)樣品中人參皂苷含量(Y)對相應(yīng)的人參皂苷峰面積積分值(X)作圖。由表1結(jié)果可見,在所得的各人參皂苷線性回歸方程中Y值和X值均具有很好的相關(guān)性(r≥0.9990),完全滿足藍(lán)莓人參保健酒中主要人參皂苷含量檢測的要求。

表1 Rg1、Rc、Rb2和Rd的回歸方程

2.2 藍(lán)莓人參保健酒中人參皂苷含量

由圖2結(jié)果可見,雖然藍(lán)莓酒添加人參(圖2A)和配制酒添加人參(圖2B)后的保健酒中均含有很多的雜質(zhì),但是由于目標(biāo)人參皂苷與雜質(zhì)之間均能達(dá)到基線分離,有很好的分離效果,所以未出現(xiàn)峰疊加等情況,并沒有對4種目標(biāo)人參皂苷的分析造成影響。這為準(zhǔn)確分析藍(lán)莓人參保健酒中主要人參皂苷的含量奠定了基礎(chǔ)。

基于良好的分析方法,對藍(lán)莓人參保健酒中主要的人參皂苷Rg1、Rc、Rb2和Rd的含量進(jìn)行了分析。由表2可以看出,在藍(lán)莓酒和配制酒添加人參的保健酒中均含有較高的Rg1、Rc、Rb2和Rd,這可能跟人參皂苷易溶于水、甲醇和乙醇等有關(guān)。值得注意的是，藍(lán)莓酒添加人參的保健酒和配制酒添加人參的保健酒中的Rg1和Rd含量沒有顯著性差異,而配制酒添加人參的保健酒中的Rc和Rb2含量則均顯著高于藍(lán)莓酒添加人參的保健酒中的。

3 討論

藍(lán)莓是一種口感獨(dú)特、香味宜人,集營養(yǎng)和保健于一身的小漿果。藍(lán)莓果酒具有酒精度低、營養(yǎng)價值高和健身益腦等功效,具有明目、利尿、激發(fā)肝功能和抗衰老等作用,同時可促進(jìn)機(jī)體新陳代謝、促進(jìn)血液循環(huán)、改善心腦血管功能和調(diào)節(jié)膽固醇水平等。

人參具有很高的藥用價值和保健功能,具有很好的抗氧化、抗炎以及治療胃和肝臟、心血管疾病和神經(jīng)衰弱、腫瘤等疾病的功效,人參皂苷是其最主要的功能性成分,其中原人參二醇型人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd和原人參三醇型人參皂苷Re、Rg1、Rg2等是人參中主要的成分[2]。

A:藍(lán)莓酒+人參;B:配制酒+人參。

表2 藍(lán)莓人參保健酒中Rg1、Rc、Rb2和Rd的含量 mg/mL

Rg1 具有抗氧化、抗衰老、抗疲勞、殺滅腫瘤細(xì)胞和興奮神經(jīng)中樞等作用[7]。有關(guān)研究表明,Rg1具有恢復(fù)由飼喂 D-半乳糖引致的認(rèn)知障礙、促進(jìn)海馬區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增值、改善異氟烷誘導(dǎo)的半胱天冬氨酸特異性蛋白酶 3 的活性、提高造血干細(xì)胞對輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老抵抗力等作用[8-11]。Rc可通過清除自由基來抑制氧化應(yīng)激[12],可通過促進(jìn)谷胱甘肽過氧化物酶類化合物mRNA 的表達(dá)來促進(jìn)胚胎腦發(fā)育[13]；除此之外，Rc還具有通過抑制脂肪形成的主要轉(zhuǎn)錄因子 PPARγ和 C/EBPα的表達(dá)來促進(jìn)3T3-L1脂肪細(xì)胞的抗成脂活性的作用。Rb2 對糖尿病動物的DNA、 RNA 及蛋白質(zhì)的合成代謝均有調(diào)節(jié)作用,因此對糖尿病有很好的治療效果；Rb2 還可通過調(diào)節(jié)糖代謝和脂代謝來預(yù)防高血脂及動脈粥樣硬化,且對視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的增生有顯著的抑制效果[16]；除此以外,Rb2還有增強(qiáng)免疫、降低高血壓及心肌梗塞風(fēng)險和抗骨質(zhì)疏松的功效[17-19]。Rd的藥理活性主要表現(xiàn)在增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力、促進(jìn)副腎皮質(zhì)荷爾蒙分泌、促進(jìn)血液循環(huán)、增強(qiáng)免疫力、鎮(zhèn)痛、抗癌等方面[20-21]。

本研究發(fā)現(xiàn)添加人參后在藍(lán)莓酒和藍(lán)莓配制酒中可檢測到一定量的人參皂苷,這樣可大大增加藍(lán)莓酒的保健功能,提升其品質(zhì)和價值。

本研究所用的人參皂苷檢測方法可準(zhǔn)確檢測添加人參的藍(lán)莓酒和藍(lán)莓配制酒中的Rg1、Rc、Rb2和Rd;添加人參可賦予藍(lán)莓酒和藍(lán)莓配制酒多種人參皂苷,可提升藍(lán)莓酒和藍(lán)莓配制酒的保健功能和商業(yè)價值。

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DetectionofMainGinsenosidesinBlueberry-PanaxGinsengHealth-careWine

XIA Xiu-dong1, LIU Xiao-li1, WANG Ying1, LI Ying1, FAN Lin-lin1, ZANG Quan2, ZHOU Jian-zhong1*

(1. Institute of Agro-product Processing, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China; 2. Nanjing Zhongliang Organic Fruit and Vegetable Food Limited Company in Jiangsu, Lishui 211200, China)

The contents of main ginsenosides (Rg1, Rc, Rb2 and Rd) in two kinds of blueberry-panax ginseng health-care wines were detected by using HPLC method. The results showed that: there was no significant difference in Rg1 and Rd content between blueberry-panax ginseng health-care wine and blueberry-liqueur-panax ginseng health-care wine, while the content of both Rc and Rb2 in the latter health-care wine was significantly higher than that in the former one; the detection method used for this study could accurately analyze the content of main ginsenosides in two kinds of blueberry-panax ginseng health-care wines.

Blueberry wine; Blueberry-liqueur wine; Blueberry-panax ginseng health-care wine; Panax ginseng; Ginsenosides; Detection

2017-07-03

南京市科技計劃項(xiàng)目(201608070)。

夏秀東(1985─),男,博士,研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。*通訊作者:周劍忠。

S663.9

A

1001-8581(2017)11-0091-04

(責(zé)任編輯:黃榮華)