陳武軍

（福建省漳州市中醫(yī)院，福建 漳州 363000）

痛風(fēng)靈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

陳武軍

（福建省漳州市中醫(yī)院，福建 漳州 363000）

目的建立痛風(fēng)靈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜（TLC）法對痛風(fēng)靈膠囊方中的腫節(jié)風(fēng)、紅花、兩面針進(jìn)行定性鑒別，對其中紅花的主要成分羥基紅花黃色素A用高效液相色譜（HPLC）法進(jìn)行含量測定。結(jié)果腫節(jié)風(fēng)、紅花、兩面針的TLC鑒別效果良好，專屬性強(qiáng)，分離度高，且陰性對照無干擾；羥基紅花黃色素A進(jìn)樣量在0.307 2～1.536 0 g范圍內(nèi)與峰面積值線性關(guān)系良好，平均回收率為98.16%，RSD＝0.90%（n＝9）。結(jié)論該方法能快速、準(zhǔn)確地對痛風(fēng)靈膠囊進(jìn)行定性、定量檢測，可作為痛風(fēng)靈膠囊的質(zhì)量控制方法。

痛風(fēng)靈膠囊；腫節(jié)風(fēng)；紅花；兩面針；羥基紅花黃色素A；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

痛風(fēng)靈膠囊是由腫節(jié)風(fēng)、兩面針、紅花等7味中藥組方的醫(yī)院制劑，具有活血化瘀、涼血解毒之功效，對痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有良好的療效[1]。為了較好地控制該制劑的質(zhì)量，本研究中采用薄層色譜（TLC）法對痛風(fēng)靈膠囊中的腫節(jié)風(fēng)、紅花、兩面針進(jìn)行定性鑒別，對痛風(fēng)靈膠囊中紅花的主要成分羥基紅花黃色素A采用高效液相色譜（HPLC）法進(jìn)行含量測定[2]，以建立簡便快捷、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好的質(zhì)量控制方法。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

薄層自動成像系統(tǒng)（Camag TLC Visualizer，Chromatography Planar公司）；KQ－250B型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；BS110S型萬分之一天平（賽多利斯公司）；Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；AE－240型十萬分之一電子分析天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）[3]。

1.2 試藥

羥基紅花黃色素A對照品（批號為111637－201207，供測定含量用)，異嗪皮啶對照品（批號為110837－200304），紅花對照藥材（批號為 120907－201111），兩面針對照藥材（批號為 121014－201003），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈、磷酸為色譜純，其他試劑均為分析純。痛風(fēng)靈膠囊樣品（批號分別為 20161101，20161102，20170101，規(guī)格為每粒 0.45 g），陰性對照樣品，均由本院制劑中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 腫節(jié)風(fēng)

取痛風(fēng)靈膠囊內(nèi)容物2 g，加30 mL水，微熱使其溶解，濾過，每次取續(xù)濾液30 mL，用乙酸乙酯振搖萃取2次，合并2次萃取液，加熱蒸干，殘?jiān)? mL甲醇攪拌溶解，作為供試品溶液[4]。同法制備缺腫節(jié)風(fēng)的陰性對照品溶液。另取異嗪皮啶對照品0.5 mg，加1 mL甲醇制成對照品溶液。按2015年版《中國藥典（四部）》通則0502薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（9 ∶4 ∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置 365 nm 波長紫外光燈下檢視。供試品溶液色譜中，與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)[5]，陰性對照品溶液色譜在此處則無相應(yīng)斑點(diǎn)出現(xiàn)，陰性對照無干擾。結(jié)果見圖1A。

2.1.2 紅花

取痛風(fēng)靈膠囊內(nèi)容物4 g，加80%丙酮溶液20 mL，加塞蓋緊，用超聲波處理30 min，靜置，吸取上清液，作為供試品溶液[6]。同法制備缺紅花的陰性對照品溶液。再取紅花對照藥材 0.5 g，加80%丙酮溶液 5 mL，加塞蓋緊，用超聲波處理30 min，靜置，吸取上清液，作為對照藥材溶液。按2015年版《中國藥典（四部）》通則0502薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述痛風(fēng)靈膠囊供試品溶液、缺紅花的陰性對照品溶液、紅花對照藥材溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇（7 ∶2 ∶3 ∶0.4）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品溶液色譜中，與紅花對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)[7]，陰性對照品溶液色譜在此處無相應(yīng)斑點(diǎn)出現(xiàn)，陰性對照無干擾。結(jié)果見圖1B。

2.1.3 兩面針

取痛風(fēng)靈膠囊內(nèi)容物2 g，加2 mL濃氨試液和30 mL氯仿，加熱回流30 min，放至室溫，濾過，取續(xù)濾液加熱蒸干，殘?jiān)? mL乙醇攪拌溶解，作為供試品溶液。同法制備缺兩面針的陰性對照品溶液。另取兩面針對照藥材1 g，加40 mL乙醇，超聲處理60 min，濾過，取續(xù)濾液加熱蒸干，殘?jiān)? mL乙醇攪拌溶解，作為對照藥材溶液[6]。按2015年版《中國藥典（四部）》通則0502薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述痛風(fēng)靈膠囊供試品溶液、缺兩面針的陰性對照品溶液、兩面針對照藥材溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－甲醇－濃氨試液（30 ∶1 ∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10% 硫酸乙醇溶液，在105℃條件下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365 nm紫外光燈下檢視[8]。供試品溶液色譜中，與兩面針對照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。結(jié)果見圖1C。

2.2 羥基紅花黃色素A含量測定(HPLC法)

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Lichrospher－ C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm，江蘇漢邦科技有限公司）；流動相：甲醇－乙腈－0.7% 磷酸溶液（26 ∶2 ∶72）；檢測波長：403 nm；流速：1 mL ／min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.2 溶液制備

對照品溶液：取對照品羥基紅花黃色素A適量，精密稱定質(zhì)量，用25%甲醇制成每1 mL含0.153 6 mg的溶液，即得[9]。

供試品溶液：稱取裝量差異下的痛風(fēng)靈膠囊內(nèi)容物約2g，精密稱定，置50mL帶塞容量瓶中，精密加入25%甲醇至50mL，加塞蓋緊，精密稱定質(zhì)量，超聲處理40min，在室溫下放冷，再精密稱定質(zhì)量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，振搖混合均勻，離心，取上清液，即得[10]。

陰性對照品溶液：取按痛風(fēng)靈膠囊處方（缺紅花）和工藝制備陰性對照樣品約2 g，精密稱定質(zhì)量，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：分別精密吸取上述羥基紅花黃色素A對照品溶液、痛風(fēng)靈膠囊供試品溶液及缺紅花的陰性對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)保留時(shí)間處有相同的色譜峰，陰性對照品溶液色譜在此處則無吸收峰出現(xiàn)，說明陰性對照無干擾[11－12]。詳見圖 2。

圖1 痛風(fēng)靈膠囊薄層色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密吸取羥基紅花黃色素A對照品溶液（0.153 6 g ／L）2，4，6，8，10 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)、羥基紅花黃色素A進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝2 954.6 X＋0.76，R2＝1.000 0（n＝5）。結(jié)果表明，羥基紅花黃色素A進(jìn)樣量在0.3072～1.536 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好[13]。詳見圖3。

圖2 羥基紅花黃色素A含量測定高效液相色譜圖

圖3 羥基紅花黃色素A標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密度試驗(yàn)：精密吸取對照品溶液（0.153 6 g／L）5 μL，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定。結(jié)果羥基紅花黃色素A峰面積的 RSD為0.26%(n＝6)，表明儀器精密度良好。詳見表1。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號為20170101）樣品6份，每份約2 g，精密稱定質(zhì)量，置50 mL帶塞容量瓶中，依法制備供試品溶液50 mL，按擬訂色譜條件，分別精密吸取10 μL注入液相色譜儀，測定峰面積，并計(jì)算含量。結(jié)果痛風(fēng)靈膠囊中羥基紅花黃色素A的平均含量為0.865 3 μg，RSD 為 0.19%(n ＝ 6)，表明該方法的重復(fù)性良好。詳見表2。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批（批號為20170101）痛風(fēng)靈膠囊內(nèi)容物約2 g，精密稱定質(zhì)量，置50 mL帶塞容量瓶中，依法制備供試品溶液50 mL，按擬訂色譜條件，精密吸取 10 μL 注入液相色譜儀，于 0，2，4，8，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣，測定峰面積。結(jié)果羥基紅花黃色素A含量的 RSD為0.11%(n ＝ 6)，表明供試品溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定[14]。詳見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量（批號為20170101，羥基紅花黃色素A含量為2.163 mg／g）的痛風(fēng)靈膠囊樣品約1 g，平行取9份，精密稱定質(zhì)量，置50 mL帶塞容量瓶中，分別精密加入適量的對照品羥基紅花黃色素A，依法制備供試品溶液50 mL，按擬訂色譜條件，分別精密吸取10 μL注入液相色譜儀，計(jì)算回收率。結(jié)果見表4。

表4 羥基紅花黃色素A加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

2.2.4 樣品測定及含量限度確定

取3個批次的樣品各約2 g，精密稱定質(zhì)量，置50 mL帶塞容量瓶中，依法制備供試品溶液50 mL，分別精密吸取10 μL注入液相色譜儀，測定羥基紅花黃色素A的含量。結(jié)果見表5。我院制劑痛風(fēng)靈膠囊是由腫節(jié)風(fēng)、紅花、兩面針等7味中藥經(jīng)現(xiàn)代工藝加工而制成，因樣品批次較少，根據(jù)上述3批次測定結(jié)果，在最低含量的基礎(chǔ)上再下浮30%，暫定每1 g痛風(fēng)靈膠囊中含紅花以羥基紅花黃色素A計(jì)，不得少于1.4 mg。

表5 3批樣品含量測定結(jié)果（mg／g，n＝3）

3 討論

我院中藥制劑痛風(fēng)靈膠囊原有省局的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較低，且只有顯微鑒別和1個薄層定性鑒別。為了提高內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，使本制劑質(zhì)量能達(dá)到安全、有效、可控的目的，本試驗(yàn)中采用薄層色譜法對腫節(jié)風(fēng)、紅花、兩面針進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法對紅花的羥基紅花黃色素A進(jìn)行定量測定。因?yàn)榧t花的有效成分羥基紅花黃色素A成分明確，標(biāo)準(zhǔn)品容易獲得；且紅花屬于芳香揮發(fā)性中藥，容易在藥材前處理、粉碎、半成品干燥時(shí)使有效成分損失，故需要對紅花進(jìn)行定量測定。

痛風(fēng)靈膠囊中兩面針的定性鑒別，加入氨水預(yù)飽和可提高比移(Rf)值。由于硅膠G板呈酸性，生物堿做薄層鑒別時(shí)易與酸反應(yīng)生成鹽，難以展開。加入氨水預(yù)飽和，相似相溶，展開效果較好，或以一定濃度的NaOH溶液噴硅膠G板使其呈堿性。

參考 2015年版《中國藥典(一部)》中腫節(jié)風(fēng)的含量測定方法，以異嗪皮啶為對照品進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示陰性干擾太大，故該試驗(yàn)結(jié)果不可用。

[1]吳德玲，王艷華，許甜甜，等.新安鼻淵顆粒的質(zhì)量控制[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32（5）：336 －339.

[2]黃愛文，陳 旭，張敏新，等.胃泰顆粒質(zhì)量控制方法研究[J].中國藥業(yè)，2016，25（1）：55 －58.

[3]施惠塤，童曉東，李 松.HPLC－DAD法同時(shí)測定慢前康合劑中芍藥苷、丹酚酸B、川續(xù)斷皂苷Ⅵ、甘草酸的含量[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2017，23（1）：66 －68.

[4]盧忠東，李 松，于 燕.固本平喘顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國醫(yī)藥指南，2012，10（28）：66 － 68.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：57.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：151，169.

[7]李佳杏，孫 蓉.健脾顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2017，26（1）：23 － 25.

[8]張麗珍，周之榮.四味清口含片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2014，4（17）：18 － 22.

[9]周 維，胡昌江，楊 麗，等.紅花配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2012，8（2）：38 －39.

[10]趙曉霞，張清波，李慧勇，等.遼源七厘散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2009，10（3）：196 －199.

[11]德吉措姆，尼 珍，阿 萍，等.HPLC法測定藏藥二十五味珊瑚丸中烏頭堿限量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2011，12（2）：99 － 101.

[12]張慧曄，羅 杰，黃亦南，等.HPLC法同時(shí)測定復(fù)方板藍(lán)根顆粒中的尿苷、腺苷和表告依春的含量[J].今日藥學(xué)，2011，21（6）：337 － 339.

[13]董志濱，姜艷艷，李曉婷，等.HPLC法測定胃能方有效組分中 6種成分的含量[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，33（12）：852 － 855.

[14]楊緒芳，吳 云，韋迎春，等.HPLC法測定山黃膠囊中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量[J].機(jī)電信息，2017(2)：31－35.

Quality Standard of Tongfengling Capsules

Chen Wujun
（Zhangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Zhangzhou，F(xiàn)ujian，China 363000）

Objective To establish the quality standard of Tongfengling Capsules.Methods TLC method was adopted for the qualitative identification of Herba sarcandrae，Carthamus tinctorius and Radix zanthoxyli in Tongfengling Capsules and HPLC method was adopted for the content determination of hydroxysafflor yellow A in Tongfengling Capsules.Results The result of TCL for the identification of Herba sarcandrae， Carthamus tinctorius and Radix zanthoxyli was good with an obvious specificity and good separation，and there was no negative interference.Hydroxysafflor yellow A showed good linear relation in the range of 0.307 2 － 1.536 0 μg，the average recovery was 98.16% and RSD was 0.90% （n ＝ 9）.Conclusion The method is rapid and accurate for the qualitative and quantitative detection of Tongfengling Capsules，which can be used for the quality control of Tongfengling Capsules.

Tongfengling Capsules； Herba sarcandrae； Carthamus tinctorius； Radix zanthoxyli；hydroxysafflor yellow A；quality standard

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2017)20－0021－04

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.20.006

陳武軍（1978－），男，大學(xué)本科，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┥a(chǎn)、工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，（電話）0596－2898923（電子信箱）39975503＠ qq.com。

2017－07－16)