北京市宣武中醫(yī)醫(yī)院（100050）李長萍

北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院（100102）姜丹 陳銘陽 劉春生

近年來，中藥市場中以次充好的現(xiàn)象呈增加趨勢，質(zhì)量不合格的中藥如果流入醫(yī)院藥房，不但會影響病人用藥的有效性，長此以往還會影響醫(yī)生對處方中用藥劑量的判斷。而在醫(yī)院藥房中藥材驗收工作中，驗收品種多、數(shù)量大，效率較低，因此建立一種快速有效、操作簡便的評價中藥質(zhì)量的方法具有一定的現(xiàn)實意義。

在《中國藥典》中，評價多數(shù)中藥飲片的質(zhì)量主要依靠浸出物和指標性成分含量兩個標準[1]，其中含量測定標準能夠反映中藥中單個或數(shù)個指標性成分含量是否合格，醇溶性浸出物含量標準則能夠反映中藥中所有醇溶性成分總含量是否達標。目前有文獻報道的評價防風(fēng)質(zhì)量的方法多數(shù)是基于各種指標性成分或活性成分如升麻素苷、升麻素、5-0-甲基維斯阿米醇苷、色原酮等，李碩等建立了一種基于灰色關(guān)聯(lián)度法評價商品防風(fēng)藥材質(zhì)量的方法，但卻鮮有關(guān)于醇溶性浸出物含量的報道?！吨袊幍洹分幸?guī)定的測定醇溶性浸出物及指標性成分含量的步驟繁瑣，耗時較長，為保證藥品質(zhì)量，確保臨床用藥的安全有效，同時節(jié)省人力物力，筆者現(xiàn)結(jié)合工作實踐，將一種快速評價防風(fēng)質(zhì)量的方法報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；METTLER AE 240電子分析天平(d=0.1mg 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市華峰儀器有限公司）；島津LC20A型高效液相色譜儀（LC-20AT高效泵，SPD-20A檢測器，LC solution工作站，日本島津公司）。

1.2 試劑與飲片乙醇（分析純，北京化工廠），甲醇（色譜純，美國Fisher公司），升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷標準品（上海將來生化試劑有限公司）。所用防風(fēng)飲片經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定系主任劉春生教授鑒定，基原均為傘形科植物防風(fēng)。

2 實驗方法

2.1 醇溶性浸出物含量測定 依《中國藥典》2015版所述，防風(fēng)采用醇溶性浸出物測定法下的熱浸法測定。取供試品2g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，精密加醇50mL，密塞，稱定重量，靜置1小時后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用醇補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。以干燥品計算供試品中醇溶性浸出物的含量(%)[1]。

2.2 指標性成分含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 取升麻素苷對照品及5-0-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1mL各含60mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備取防風(fēng)細粉約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，稱定重量，水浴回流2小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 HPLC分析條件 色譜柱：Agilent ZORBAXEclipse XDB C18色譜柱（25cm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水(40:60)，流速1 mL/min；檢測波長254nm。

2.2.4 測定方法 分別精密吸取對照品溶液各3μL與供試品溶液2μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3 制備醇浸液供試品的方法學(xué)考察 影響供試品溶液的因素有藥材飲片的粉碎度，浸泡時的溫度和浸泡時間，基于此，設(shè)計如附表1所示正交試驗確定獲得供試品溶液的最佳方法。

根據(jù)《中國藥典》中規(guī)定的飲片和醇的比例，取防風(fēng)飲片（粉末）1g，精密稱定，置100mL錐形瓶中，精密加入無水乙醇25mL，置室溫下浸泡（水浴鍋中加熱）指定時間后過濾，測定濾液在特定波長下的吸光度。

2.4 供試品溶液吸光度測定

2.4.1 最大吸收波長的測定 取2.1項下獲得的濾液在190～700nm做紫外可見全波長掃描，確定其最大吸收波長。

2.4.2 吸光度測定 取2.3項下的濾液，稀釋10倍后在2.3.1項得到的最大吸收波長下分別測定吸光度。

3 結(jié)果與分析

3.1 制備供試品溶液方法學(xué)考察結(jié)果 紫外-可見全波長掃描顯示防風(fēng)醇浸液的最大吸收波長在228nm。依據(jù)附表1設(shè)計的正交試驗結(jié)果如附表2所示。根據(jù)附表2得到的結(jié)果繪制不同條件下防風(fēng)醇浸液的吸光度隨浸泡時間的變化曲線，如下面附圖1～4所示。

附表1 防風(fēng)醇溶性浸出物正交試驗因素水平表

附表2 防風(fēng)醇浸液正交試驗結(jié)果表

附表3 22批防風(fēng)的醇浸液吸光度及各組分含量測定結(jié)果

從4個附圖中可以看出防風(fēng)飲片無論是在室溫還是在50℃水浴加熱下浸泡，醇浸液的吸光度均難以在1h內(nèi)達到一個穩(wěn)定的值；而防風(fēng)粉末在室溫和50℃水浴加熱下浸泡，醇浸液的吸光度均能在20min以內(nèi)時達到一個穩(wěn)定的值。故此選用室溫浸泡防風(fēng)粉末20min的條件獲取醇浸液。

3.2 防風(fēng)醇浸液吸光度與各組分含量相關(guān)性分析 按上述方法獲得的22批防風(fēng)的醇浸液吸光度及其醇溶性浸出物含量測定結(jié)果如附表3所示。

附圖1 室溫下浸泡防風(fēng)飲片醇浸液吸光度隨浸泡時間變化圖

附圖2 水浴加熱下浸泡防風(fēng)飲片醇液吸光度隨浸泡時間變化圖

附圖3 室溫下浸泡防風(fēng)粉末醇浸液吸光度隨浸泡時間變化圖

附圖4 水浴加熱下浸泡防風(fēng)粉末醇液吸光度隨浸泡時間變化圖

使用SAS8.2軟件分析三組變量兩兩之間的相關(guān)性，各組數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，因此選用pearson相關(guān)系數(shù)。

醇浸液吸光度（x）與醇溶性浸出物（y）的相關(guān)性計算結(jié)果如下：rs=0.449 P=0.036＜0.05證明防風(fēng)醇浸液吸光度與醇溶性浸出物含量之間有顯著正相關(guān)關(guān)系。

醇浸液吸光度（x）升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷總含量（z）的相關(guān)性計算結(jié)果如下：rs=0.288 P=0.194＞0.05證明防風(fēng)醇浸液吸光度與其指標性成分總含量之間無顯著相關(guān)關(guān)系。

由此可知，根據(jù)3.1中確定的方法獲得的防風(fēng)醇浸液的吸光度與其醇溶性浸出物含量具有顯著正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），但與《中國藥典》中規(guī)定的指標性成分總含量并無顯著相關(guān)關(guān)系。因此，通過該方法獲得的醇浸液的吸光度雖然可反映防風(fēng)醇溶性浸出物含量，但并不能體現(xiàn)藥典中的指標性成分總含量。

4 討論

本研究建立了一種快速、簡便且較為準確地檢測防風(fēng)飲片醇溶性浸出物含量是否合格的方法。利用本法，可快速篩選出醇溶性浸出物含量不合格的防風(fēng)，它們的醇浸液吸光度值顯著低于其他大多數(shù)合格產(chǎn)品。

在方法學(xué)考察中，防風(fēng)飲片在不打粉的情況下，醇浸液的吸光度在1 h 內(nèi)不能達到一個穩(wěn)定的值，究其原因是因為防風(fēng)飲片與醇的接觸面積遠小于粉末與醇的接觸面積，如果方法中改用飲片進行實驗，無法達到快速檢測的預(yù)期，并且防風(fēng)飲片大小不一，很難找到吸光度穩(wěn)定的極值點。在是否水浴加熱的選擇中我們發(fā)現(xiàn)，無論是在室溫下還是在5 0 ℃水浴加熱，醇浸液的吸光度均在10min左右到達極限，為了在檢測過程中節(jié)省成本，簡化步驟，故此選擇在室溫下浸泡防風(fēng)粉末的方法。

《中國藥典》中規(guī)定防風(fēng)飲片醇溶性浸出物含量低于13%或升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷總含量低于0.24%均為不合格[1]，這22批防風(fēng)中醇溶性浸出物含量低于合格限有16批，而升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷總含量全部合格，可見市場上防風(fēng)飲片的指標性成分大多數(shù)高于合格限，而另一指標醇溶性浸出物含量則大多不合格，因此對市場上防風(fēng)醇溶性浸出物含量的檢測和控制是十分必要的。本研究中報道的方法所獲得的醇浸液吸光度值雖然不能反映防風(fēng)飲片中升麻素苷和5-0-甲基維斯阿米醇苷的總含量，但可以一定程度上反映飲片中的醇溶性浸出物含量，具有一定實際意義。

綜上所述，本方法能為藥房工作人員節(jié)省下大量的檢測時間，且能將此法擴展到其它中藥飲片的快速質(zhì)量評價中，具有較高的實際應(yīng)用價值，能為中藥飲片的快速質(zhì)量評價提供有力的技術(shù)支持。