鞏仔鵬+侯靖宇 李梅 吳林霖 陳亭亭 李勇軍+王愛(ài)民 蘭燕宇+王永林

[摘要]考察大鼠腸道菌群對(duì)羊耳菊提取物中主要成分的代謝作用，將羊耳菊提取物與大鼠腸道菌液在厭氧條件下共同孵育24 h，通過(guò)正丁醇液液萃取處理后，采用色譜聯(lián)用技術(shù)（UPLCQTOFMS/MS）對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行定性分析，并結(jié)合布魯克公司研發(fā)的數(shù)據(jù)處理工具M(jìn)etabolite Tools，Data Analysis等對(duì)代謝信息進(jìn)行綜合分析。通過(guò)比較空白樣品圖譜，腸菌樣品圖譜以及兩者的差異圖譜，各色譜峰的準(zhǔn)分子離子，碎片離子，分析羊耳菊提取物在大鼠腸道菌群作用下可能產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。結(jié)果提示，羊耳菊提取物在腸道菌群作用下，檢測(cè)到14個(gè)代謝產(chǎn)物，主要包括單咖啡?；鼘幩岬漠悩?gòu)，水解的小分子化合物和咖啡酸的還原，甲基化和乙酰化等代謝產(chǎn)物，同時(shí)僅檢測(cè)到1個(gè)二咖啡?；鼘幩岬募谆x產(chǎn)物。以此推測(cè)，咖啡酰基奎寧酸類成分在腸道菌群的作用下可能多數(shù)水解為分子量小，疏水性更強(qiáng)的代謝產(chǎn)物，使得其更容易被腸道吸收。

[關(guān)鍵詞]羊耳菊提取物； 腸道菌群； 代謝產(chǎn)物； UPLCQTOFMS/MS

Metabolism of Inula cappa extract by rat intestinal bacteria in vitro

GONG Zipeng1，2，3，4， HOU Jingyu1，2，3，4， LI Mei1，2，3，4， WU Linlin1，2，3，4， CHEN Tingting1，2，3，4，

LI Yongjun1，2，3，4， WANG Aimin1，2，3，4， LAN Yanyu1，2，3，4， WANG Yonglin1，2，3，4*

（1. Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China；

2. Engineering Research Center for the Development and Application of Ethnic Medicine and Traditional Chinese Medicine

（Ministry of Education）， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China；

3. School of Pharmacy， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China；

4. National Engineering Research Center of Miao′s Medicines， Guiyang 550004， China）

[Abstract]To investigate the metabolism of major components in Inula cappa by rat intestinal bacteria in vitro I cappa extract was incubated for 24 h with rat intestinal bacteria under anaerobic environment After the samples were precipitated by nbutanol， UPLCQTOFMS/MS was applied for the qualitative analysis of the metabolites， combined with data software such as Metabolite Tools， Data Analysis and so on The potential metabolites in rat intestinal bacteria were analyzed by comparing the total ion current of the test samples and blank samples and analyzing the quasimolecular ion and fragment ion of all chromatograms The results injected that fourteen metabolites were detected in rat intestinal flora Various types of metabolic reactions happen to caffeoylquinic acid in intestinal flora， including isomerization， hydrolyzation， there were also methylation， hydrogenation and acetylation of caffeic acid At the same time， a methylate of dicaffeoylquinic acid was also detected Presumably， caffeoylquinic acids were gradually transformed into more hydrophobic metabolites with smaller molecular mass， which were better absorbed by the intestinal tract.

[Key words]Inula cappa extracts； intestinal bacteria； metabolites； UPLCQTOFMS/MS

中藥及其制劑的給藥方式多數(shù)以口服為主，在胃腸道被吸收后分布到靶器官?gòu)亩l(fā)揮療效，再經(jīng)代謝作用最后排出體外。胃腸道不僅是藥物吸收的主要部位，同時(shí)對(duì)藥物也有一定的代謝作用，部分難以吸收的藥物可能在腸道菌群的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)橐孜盏某煞?，因此腸道菌群對(duì)藥物療效的發(fā)揮起到了重要的作用。并且中藥及其制劑成分復(fù)雜，在體內(nèi)的代謝過(guò)程和作用機(jī)制尚不明確，直接口服給藥后，研究其體內(nèi)過(guò)程和直接藥效物質(zhì)比較困難，因此選擇腸道菌群體外代謝實(shí)驗(yàn)，研究民族藥羊耳菊中主要藥效物質(zhì)的體外代謝規(guī)律，能夠?yàn)樗幉牡捏w內(nèi)過(guò)程研究奠定一定基礎(chǔ)[14]。endprint

羊耳菊為貴州苗族及云南傣族等少數(shù)民族常用藥物，常用于感冒發(fā)熱，咽喉腫痛等癥，有獨(dú)特療效[5]。羊耳菊中含有較多的咖啡酰基奎寧酸酯類化合物[67]，文獻(xiàn)報(bào)道咖啡酰基奎寧酸酯類化合物有突出的抗菌、抗病毒活性[89]。而這類物質(zhì)較不容易被吸收，因此容易可在腸道菌群作用下部分水解，發(fā)生一系列反應(yīng)形成小分子物質(zhì)后被吸收入血發(fā)揮其藥理作用[1011]。盡管國(guó)內(nèi)外有較多研究報(bào)道單體咖啡?；鼘幩犷惓煞值拇x特征，但鮮有羊耳菊提取物中此類成分的體外腸道菌群代謝相關(guān)報(bào)道，且中藥提取物成分復(fù)雜，對(duì)此類成分的代謝過(guò)程可能也有所影響，因此本實(shí)驗(yàn)采用離體法來(lái)研究羊耳菊提取物中的主要代謝產(chǎn)物，研究其在大鼠腸道菌群中的代謝情況，依此來(lái)推測(cè)羊耳菊提取物的腸道菌群代謝途徑，對(duì)指導(dǎo)臨床合理用藥和羊耳菊藥材新劑型的研發(fā)，具有重要的意義。

1材料

11儀器

CDH6000B Ⅱ電熱恒溫培養(yǎng)箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；SWCJ2FD 超凈工作臺(tái)（蘇州蘇潔凈化設(shè)備有限公司）；YXQLS18SI 手提式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）；厭氧產(chǎn)氣袋（AnaeroPackAnaero，MGC，日本三菱瓦斯化學(xué)株式會(huì)社）；厭氧培養(yǎng)罐（PackRectangular Jars，日本三菱瓦斯化學(xué)株式會(huì)社）；超高壓效液相色譜四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀（Agilent Technologies 1290 Infinity液相色譜系統(tǒng)， 布魯克道爾頓四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀）；Allegra 64R低溫高速離心機(jī)（Beckman Coulter）；MTN2800D氮吹儀（天津奧特塞恩斯儀器有限公司）。

12試藥

羊耳菊藥材購(gòu)自貴州龍里縣，由貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室龍慶德副教授鑒定為菊科植物羊耳菊Inula cappa（BuchHam） DC的干燥全草。綠原酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110753201415），新綠原酸（批號(hào)X2020141012）、隱綠原酸（批號(hào)Y5820141012）、1，3O二咖啡酰基奎寧酸（批號(hào)1384101215）、3，4O二咖啡?；鼘幩幔ㄅ?hào)1384101215）、3，5O二咖啡?；鼘幩幔ㄅ?hào)S34110121）、4，5O二咖啡?；鼘幩釋?duì)照品（批號(hào)1384101215）均購(gòu)于中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心。

13動(dòng)物

健康SD大鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量（250±20）g，由重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司提供，合格證號(hào)SCXK （渝）20150001。

2方法

21色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18 RRHD（21 mm×100 mm，18 μm）；柱溫40 ℃；流動(dòng)相為01%甲酸乙腈（A）01%甲酸水（B）；進(jìn)樣體積為5 μL；流速03 mL·min-1。梯度洗脫條件：0～1 min，5% ～10% A；1～13 min，10%～28%A；13～16 min，28%～100% A；16～17 min，100% A；17～18 min，100%～5% A。

22質(zhì)譜條件

電噴霧離子源；掃描方式為負(fù)離子掃描（ESI-，m/z 50～1 000）；毛細(xì)管電壓35 kV；離子源溫度200 ℃；霧化氣（N2）壓力12 bar；干燥氣溫度200 ℃；氣體體積流量6 L·min-1；準(zhǔn)確質(zhì)量測(cè)定采用甲酸鈉校正標(biāo)準(zhǔn)液；校正模式選用Enhanced Quadratic；數(shù)據(jù)分析采用Data Analysis軟件、Metabolite Tools等。

23羊耳菊有效組分提取物的制備

通過(guò)實(shí)驗(yàn)室前期藥效學(xué)篩選試驗(yàn)，確定羊耳菊有效組分的提取方式。取羊耳菊藥材12 kg，充分混勻，取10倍量60%乙醇，回流提取3次，每次1 h，合并3次濾液，減壓濃縮，回收乙醇，得12 L濃縮液。上述濃縮液用D101大孔樹(shù)脂吸附（徑高比1∶4），加水洗脫至流出液無(wú)顏色后，再用60%乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，得浸膏，微波真空干燥即得提取物，得膏率為7%。各主要成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1，3O二咖啡酰基奎寧酸201%，3，4O二咖啡?；鼘幩?82%，3，5O二咖啡?；鼘幩?56%，4，5O二咖啡酰基奎寧酸387%，新綠原酸217%，綠原酸099%，隱綠原酸336%，-4 ℃條件干燥保存，備用。

24供試液樣品的制備

稱取提取物粉末1 g，精密稱定，加入10 mL 50%甲醇水，超聲10 min，15 000 r·min-1離心10 min，取上清液，即得，備用。

25對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取綠原酸等7種對(duì)照品，于10 mL量瓶中，加甲醇超聲溶解，定容。得綠原酸0740 g·L-1、新綠原酸1032 g·L-1、隱綠原酸1026 g·L-1、1，3O二咖啡酰基奎寧酸1064 g·L-1、3，4O二咖啡?；鼘幩?032 g·L-1、3，5O二咖啡?；鼘幩?194 g·L-1、4，5O二咖啡?；鼘幩?204 g·L-1的對(duì)照品溶液。-20 ℃保存，備用。

26樣品處理方法

將腸菌樣品分別轉(zhuǎn)入進(jìn)口50 mL離心管中，每管加入10 mL正丁醇，渦旋混合5 min，萃取3次，合并3次正丁醇層萃取液，6 000 r·min-1離心5 min，上清液37 ℃下N2吹干，殘?jiān)尤? mL正丁醇溶解，渦旋混合3 min，超聲5 min，15 000 r·min-1 離心10 min，上清液37 ℃下N2吹干，殘?jiān)?00 μL 50%甲醇水溶解，渦旋混合3 min，超聲5 min，15 000 r·min-1離心10 min，上清液進(jìn)樣UPLCQTOFMS/MS分析。

27羊耳菊活性部位大鼠腸道菌群代謝[12]endprint

271大鼠腸道菌液的制備健康大鼠脫頸處死后，迅速開(kāi)腹，取結(jié)腸段內(nèi)容物，將其與生理鹽水按1∶4混懸，4 000 r·min-1離心10 min后得到上清液，即為腸道菌液。取80 mL菌液，加入720 mL無(wú)血清厭氧培養(yǎng)液中，得到腸菌培養(yǎng)液。

272腸菌實(shí)驗(yàn)取上述腸菌培養(yǎng)液8 mL，分為4份，再分別加入6 mL已滅菌的厭氧培養(yǎng)液，混勻，置于厭氧條件下培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)好后，向其中3份加入已過(guò)濾除菌的羊耳菊活性部位厭氧培養(yǎng)液溶液（05，10，20 g·L-1），另1份加入空白厭氧培養(yǎng)液作對(duì)照。另取厭氧培養(yǎng)液34 mL，平均分為3份于培養(yǎng)皿中，向其中加入已過(guò)濾除菌的羊耳菊提取物厭氧培養(yǎng)液溶液（05，10，20 g·L-1），作為不加腸菌的空白對(duì)照組。將上述7份培養(yǎng)皿置于37 ℃，厭氧條件下培養(yǎng)24 h，所得樣品按26項(xiàng)下處理，進(jìn)樣UPLCQTOFMS/MS分析。

3結(jié)果

31UPLCQTOFMS/MS色譜采集

根據(jù)建立的方法，首先運(yùn)用布魯克道爾頓公司的Metabolite Predict軟件對(duì)單咖啡?；鼘幩犷悾ňG原酸、新綠原酸、隱綠原酸）和二咖啡?；鼘幩犷悾?，3O二咖啡?；鼘幩?，3，4O二咖啡?；鼘幩?，3，5O二咖啡?；鼘幩幔?，5O二咖啡?；鼘幩幔┑瘸煞诌M(jìn)行代謝產(chǎn)物預(yù)測(cè)，將生成的代謝產(chǎn)物的Masslist導(dǎo)入Metabolite Detect軟件，結(jié)合對(duì)照品，質(zhì)譜碎片信息和相關(guān)文獻(xiàn)得到其可能的代謝產(chǎn)物，推測(cè)羊耳菊提取物中各成分在體內(nèi)可能的代謝途徑。

32羊耳菊提取物在腸道菌群中的代謝

由Metabolite Detect得到空白腸菌孵育樣品，提取物腸菌孵育樣品，厭氧培養(yǎng)液孵育樣品（未加腸菌）及差異圖譜見(jiàn)圖1。由圖1的C圖可知羊耳菊提取物在空白厭氧培養(yǎng)液中不干擾代謝產(chǎn)物的測(cè)定。

33羊耳菊提取物在腸道菌群中代謝產(chǎn)物的鑒定分析

由Metabolite Detect對(duì)樣品及空白圖譜處理后得到的差異圖譜以及響應(yīng)的質(zhì)譜碎片，并結(jié)合文獻(xiàn)[1314]，對(duì)羊耳菊提取物中部分代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，代謝產(chǎn)物見(jiàn)表1，各代謝產(chǎn)物初步分析如下。

M1由差異圖譜中可知，tR=32 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 181051 1[M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C9H9O4，比咖啡酸負(fù)離子多2個(gè)H，丟失1分子CO，產(chǎn)生m/z 137060 2 [M-H-CO]-的碎片，因此推測(cè)M1為咖啡酸雙

鍵還原后的產(chǎn)物二氫咖啡酸。并且咖啡酸可能為咖啡?；鼘幩崴夂蟮漠a(chǎn)物。

M2由差異圖譜中可知，tR=34 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 137025[M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C7H5O3，分子式與羥基苯甲酸一致，故推測(cè)M2可能為咖啡酸的水解產(chǎn)物羥基苯甲酸，本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不能說(shuō)明取代基的位置，有待進(jìn)一步研究。

M3由差異圖譜中可知，tR=39 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 151051 7[M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C8H8O3，分子式與羥基苯乙酸一致，故推測(cè)M3可能為咖啡酸的水解產(chǎn)物羥基苯乙酸，本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不能說(shuō)明取代基的位置，有待進(jìn)一步研究。

M4由差異圖譜中可知，tR=42 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 353088 4 [M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C16H17O9，主要碎片離子為m/z 191055 2[M-H-C9H6O3]-，碎片離子和分子式與單咖啡酰基奎寧酸一致，但保留時(shí)間與綠原酸，新綠原酸，隱綠原酸對(duì)照品均不一致，并且本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不能說(shuō)明取代基的位置，有待進(jìn)一步研究，故推測(cè)M4可能為單咖啡酰基奎寧酸酯鍵位置異構(gòu)的代謝產(chǎn)物。

M5由差異圖譜中可知，tR=53 min，色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 165055 9 [M-H]-，由SmartFormula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C9H9O3，分子式與羥基苯丙酸一致，但本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)無(wú)法確定說(shuō)明取代基的位置，故推測(cè)M5可能為咖啡酸的水解產(chǎn)物羥基苯丙酸。

M6由差異圖譜中可知，tR=58 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 353088 4[M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C16H17O9，主要碎片離子為m/z 191050 [M-H-C9H6O3]-，碎片離子和分子式與M4一致，可能M6與M4互為同分異構(gòu)體，由于本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不能說(shuō)明取代基的位置，有待進(jìn)一步研究，故推測(cè)M6同樣可能為單咖啡酰基奎寧酸酯鍵位置異構(gòu)的代謝產(chǎn)物。

M7由差異圖譜中可知，tR=62 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 529131 3[M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C26H25O12，比二咖啡酰基奎寧酸多14，同時(shí)丟失CH2，產(chǎn)生的主要碎片離子為m/z 515119 7 [M-H-CH2]-，提示有甲基化反應(yīng)，由于本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不能說(shuō)明取代基的位置，無(wú)法判斷M7由哪個(gè)二咖啡酰基奎寧酸甲基化產(chǎn)生，故推測(cè)M7可能為二咖啡?；鼘幩岬膯渭谆a(chǎn)物，具體取代基位置有待進(jìn)一步研究。

M8由差異圖譜中可知，tR=70 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 195066 3[M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C10H11O4，分子式比阿魏酸負(fù)離子m/z 193 （C10H8O4）多2個(gè)H，中性丟失CO2，產(chǎn)生的主要碎片離子為m/z 151076 0 [M-H-COO]-，由于本試驗(yàn)數(shù)據(jù)不能說(shuō)明取代基的位置，且提取物中存在較多單咖啡?；鼘幩岷投Х弱；鼘幩岬耐之悩?gòu)體，無(wú)法判斷阿魏酸由哪個(gè)咖啡?；鼘幩崴舛鴣?lái)，故推測(cè)M8可能為咖啡?；鼘幩崴猱a(chǎn)生的阿魏酸的還原產(chǎn)物二氫阿魏酸。endprint

M9由差異圖譜中可知，tR=76 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 337094 2 [M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C16H17O8，主要碎片離子為m/z 191049 8 [M-H-C9H6O2]-，173044 2 [M-H-C9H8O3]-的碎片，分子式和碎片離子與香豆?？鼘幩嵋恢?，但本試驗(yàn)數(shù)據(jù)無(wú)法確定其取代基的結(jié)合位點(diǎn)，故推測(cè)M9可能為香豆?？鼘幩?，有待進(jìn)一步研究。

M10由差異圖譜中可知，tR=79 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 285041 3 [M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C15H19O6，分子式與木犀草素一致，但提取物中并無(wú)木犀草素原型存在，故推測(cè)M10可能為提取物中木犀草苷類成分水解產(chǎn)生的木犀草素。

M11由差異圖譜中可知，tR=84 min色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 207065 3 [M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C11H11O4丟失CH2，產(chǎn)生的主要碎片離子為m/z 193050 8 [M-H-CH2]-，149060 1 [M-H-COO]-，提示存在甲基化反應(yīng)，而主要碎片離子與阿魏酸一致，故推測(cè)M11可能為阿魏酸甲基化產(chǎn)物。

M12由差異圖譜中可知，tR=90 min，色譜峰的準(zhǔn)分子離子為m/z 225045 4 [M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C11H11O5，丟失42，產(chǎn)生主要碎片離子為m/z 183050 8 [M-H+4HCOCH3]-，表明存在乙?；磻?yīng)，比咖啡酸多4個(gè)H，同時(shí)存在還原反應(yīng)，故推測(cè)M12可能為咖啡酸還原后的乙?；a(chǎn)物。

M13由差異圖譜中可知，tR=93 min，產(chǎn)生的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 165056 0[M-H]-，由Smart Formula軟件預(yù)測(cè)化學(xué)式為C9H9O3，與M5分子式與一致，但保留時(shí)間不同，故推測(cè)M13與M5互為同分異構(gòu)體，但本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)無(wú)法確定其取代基的結(jié)合位點(diǎn)，故推測(cè)M13可能為咖啡酸的水解產(chǎn)物羥基苯丙酸。

34羊耳菊提取物主要成分在腸道菌群中可能的代謝途徑

羊耳菊提取物在腸道菌群中的代謝以提取物中含量較高的咖啡?；鼘幩犷惓煞值拇x為主，但由于提取物中同時(shí)存在單咖啡?；鼘幩岷投Х弱；鼘幩岬耐之悩?gòu)體，本試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)無(wú)法準(zhǔn)確明確其具體取代基的位置。因此，以綠原酸和3，4O二咖啡?；鼘幩釣槔?，分析提取物中主要成分可能的代謝產(chǎn)物及代謝途徑，見(jiàn)圖2～4。

4結(jié)論

本試驗(yàn)采用UPLCQTOFMS/MS技術(shù)方法，較于一般的四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，在負(fù)離子模式下對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，具有靈敏度高，掃描范圍廣，快速簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，同時(shí)針對(duì)不同化合物產(chǎn)生不同的質(zhì)譜碎片，使檢測(cè)更具有精度，大大降低了基質(zhì)干擾。同時(shí)采用布魯克公司的Metabolite ToolsTM對(duì)代謝信息進(jìn)行分析。其中Metabolite Predict含有Metabolite Rules（代謝途徑庫(kù)），根據(jù)藥物中原型成分的結(jié)構(gòu)特征及其在體內(nèi)可能發(fā)生的代謝變化，選擇相應(yīng)的代謝途徑，由此Metabolite Predict則會(huì)預(yù)測(cè)出龐大的代謝產(chǎn)物Masslist；將Masslist導(dǎo)入至Metabolite Detect中，與差異圖譜進(jìn)行匹配，通過(guò)差異分析并結(jié)合MDF技術(shù)來(lái)尋找到可能的代謝產(chǎn)物并對(duì)其進(jìn)行定性[15]。

在本試驗(yàn)中，腸菌孵育樣品中檢測(cè)13個(gè)代謝產(chǎn)物，主要包括單咖啡?；鼘幩岬漠悩?gòu)化，水解的小分子化合物和單咖啡酰基奎寧酸水解后產(chǎn)生的咖啡酸的還原，甲基化和乙酰化等代謝產(chǎn)物。在代謝產(chǎn)物中僅檢測(cè)到二咖啡?；鼘幩犷惓煞值募谆a(chǎn)物，可能是由于其在腸道菌群的作用下水解成單咖啡酰基奎寧酸或者咖啡酸等小分子的物質(zhì)再進(jìn)行進(jìn)一步的代謝反應(yīng)。綜合腸道菌群實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說(shuō)明在中藥提取物中的咖啡?；鼘幩犷愇镔|(zhì)，在體內(nèi)吸收的過(guò)程中，可能會(huì)被腸道菌群代謝為小分子量的物質(zhì)，如苯甲酸、苯乙酸等，再被吸收進(jìn)入體內(nèi)，從而影響咖啡?；鼘幩犷愇镔|(zhì)的生物利用度。

咖啡?；鼘幩犷惣淳G原酸類物質(zhì)作為多種中藥的主要活性物質(zhì)，因其具有廣泛的生物活性，一直以來(lái)是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)[10]，研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸在人體內(nèi)通過(guò)腸道微生物如大腸桿菌、雙歧桿菌和加氏乳桿菌產(chǎn)生的酯酶的作用下發(fā)生水解形成咖啡酸和奎尼酸，還會(huì)發(fā)生酯基位置異構(gòu)，再經(jīng)腸道微生物作用脫羥基形成香豆酸，也可經(jīng)還原酶（RA）發(fā)生氫化作用。二氫咖啡酸也可能會(huì)發(fā)生C4位脫羥基作用生成3（3′羥苯基）丙酸，或經(jīng)輔酶 A（CoA）介導(dǎo)脫去1個(gè)亞甲基形成3，4二羥基苯乙酸。3，4二羥基苯乙酸迅速脫亞甲基轉(zhuǎn)化為 3，4二羥基苯甲酸等。人體中腸道菌群的分布與大鼠相類似，提取物中的綠原酸類成分也發(fā)生了相類似的代謝反應(yīng)，生成了苯丙酸，苯乙酸，苯甲酸等代謝產(chǎn)物，說(shuō)明羊耳菊提取物在腸道菌群中的代謝，可能與大腸桿菌、雙歧桿菌等菌類和輔酶A等酶密切相關(guān)。

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[責(zé)任編輯張燕]endprint