李云玲，侯沁文，劉瑞祥，任嘉紅，張 易

(1.長治學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)系，山西 長治 046011； 2.太行山生態(tài)與環(huán)境研究所，山西 長治 046011)

草木樨中華根瘤菌CHW10B溶磷特性及其對南方紅豆杉的促生作用

李云玲1, 2，侯沁文1, 2，劉瑞祥1, 2，任嘉紅1, 2*，張 易1

(1.長治學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)系，山西 長治 046011； 2.太行山生態(tài)與環(huán)境研究所，山西 長治 046011)

目的探討南方紅豆杉根際微生物草木樨中華根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti)CHW10B的溶磷特性及促生作用。方法利用液體發(fā)酵試驗(yàn)比較不同時(shí)間、碳源、氮源、碳氮比、培養(yǎng)溫度等條件下CHW10B菌株的溶磷量，采用溫室盆栽法研究該菌株對南方紅豆杉生長的影響，并分析該菌株產(chǎn)嗜鐵素、精氨酸脫羧酶、ACC脫氨酶及有機(jī)酸等成分的能力。結(jié)果該菌株分別在培養(yǎng)時(shí)間4 d、磷酸鈣5.00 g·L-1、初始pH值 7.0、裝液量1/2、NaCl為0.0 g·L-1、溫度30℃、碳源為葡萄糖、氮源為硫酸銨、碳氮比100∶1時(shí)溶磷能力最強(qiáng)。將該菌株接種于1年生南方紅豆杉實(shí)生苗360 d后，苗木的地徑、苗高、生物量比對照分別增長了19.53%、20.14%、25.39%。該菌株能夠產(chǎn)嗜鐵素、精氨酸脫羧酶、ACC脫氨酶(0.922 U·mg-1)和IAA(8.908 mg·mL-1)，并可分泌大量有機(jī)酸—葡萄糖酸(5 704.92 μg·L-1)。結(jié)論草木樨中華根瘤菌CHW10B溶磷能力強(qiáng)，對南方紅豆杉促生作用顯著，適用于多種不同酸堿性土壤，可高效應(yīng)用于南方紅豆杉的人工栽培，具有被開發(fā)為生物肥料的潛力。

草木樨中華根瘤菌；南方紅豆杉；溶磷；促生作用

Abstract:[Objective] A phosphate-solubilizing bacterium,SinorhizobiummelilotiCHW10B, was selected fromTaxuschinensisvar.mairei. Its phosphate-solubilizing characteristics and growth-promoting effect onT.chinensisvar.maireiwere studied. [Method] The effects of culture time, Ca3(PO4)2concentration, carbon sources, nitrogen sources, initial pH, liquid filling volume, salt ions and other environment factors on phosphate solubilizing ability of strain CHW10B were studied by liquid fermentation experiment. Pot experiment was conducted to evaluate the role of strain CHW10B in promoting the growth ofT.chinensisvar.mairei. Some growth-promoting mechanism such as producing ACC deaminase, siderophore, indoleacetic acid, arginine decarboxylase and organic acid were determined. [Result]The results showed that CHW10B strain displayed the highest phosphate-dissolving capacity when the cultivation period was 4 days, the amount of calcium phosphate was 5.00 g·L-1, the initial pH reached 7.0，the volume of liquid was 1/2, the NaCl concentration was 0.0 g·L-1and the temperature was 30℃. The phosphate solubilizing capacity of the strain got the highest when using glucose as carbon source and ammonium sulfate as nitrogen source. Moreover, the ratio of carbon to nitrogen (100∶1) is optimum for strain CHW10B. After being inoculated with strain CHW10B, the ground diameter, seedling height and biomass of 1-year-oldT.chinensisvar.maireiseedlings increased by 19.53%, 20.14% and 25.39% in 360 days’ post-inoculation, respectively. The strain could produce siderophore, arginine decarboxylase, ACC deaminase (0.922 U·mg-1) and IAA (8.908 mg·mL-1), and secrete a large amount of gluconic acid (5 704.92 μg·L-1). [Conclusion]S.melilotiCHW10B has strong phosphorus-solubilizing capability, and plays a significant promoting role in the growth ofT.chinensisvar.mairei. The strain can be applied to a variety of soils of different acidity-alkalinity. The result would be an important reference for further exploring of the CHW10B strain in production of bio-fertilizer and high efficient cultivation onT.chinensisvar.mairei, etc.

Keywords:Sinorhizobiummeliloti;Taxuschinensisvar.mairei; phosphate-solubilization; growth-promoting effect

南方紅豆杉(Taxuschinensis(Pilger) Rehd. var.mairei(Lemee et Levl.) Cheng et L. K. Fu)是我國一級保護(hù)野生瀕危藥用植物，采取人工栽培措施，在一定程度上能夠克服南方紅豆杉天然林生長緩慢、資源緊缺的問題[9]。本課題組前期從南方紅豆杉根際分離篩選到1株高效溶無機(jī)磷細(xì)菌——草木樨中華根瘤菌(Sinorhizobiummeliloti)CHW10B，經(jīng)初步研究發(fā)現(xiàn)，該菌株對南方紅豆杉60 d實(shí)生苗幼苗期生長有明顯的促生作用[8]，并能穩(wěn)定地定殖于南方紅豆杉根際和根部[10]。本研究在前期工作的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討該菌株產(chǎn)IAA、ACC脫氨酶、嗜鐵素及精氨酸脫羧酶等促生長特性，分析比較其溶磷特性及對1年生南方紅豆杉的促生效果，旨在完善該菌株的系統(tǒng)研究，為高效利用該菌株以更好提高南方紅豆杉人工栽培效率、豐富生物肥料菌種資源奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1供試菌株

高效溶磷草木樨中華根瘤菌CHW10B，由本課題組前期從南方紅豆杉根際分離篩選得到。

1.2供試植物

南方紅豆杉1年生盆栽實(shí)生苗，栽培于長治市林業(yè)局苗圃。

1.3供試培養(yǎng)基

2 研究方法

2.1CHW10B菌株溶磷動(dòng)態(tài)

2.2磷酸鈣濃度對CHW10B菌株溶磷能力的影響

向滅菌的NBRIP培養(yǎng)基中分別加入終濃度為0.63、1.25、2.50、5.00、10.00g·L-1的磷酸鈣，按1%接種量接入CHW10B種子液。各處理均設(shè)3個(gè)重復(fù)和1個(gè)空白對照，在30℃、180r·min-1培養(yǎng)最適天數(shù)(4d)后，取適量發(fā)酵液測定可溶性磷含量，方法同2.1。

2.3碳源、氮源、碳氮比對CHW10B菌株溶磷能力的影響

將葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇、麥芽糖和可溶性淀粉分別按1%比例加入到NBRIP液體培養(yǎng)基中作為唯一碳源；將(NH4)2SO4、NH4NO3、KNO3、牛肉膏、酵母膏、蛋白胨分別按0.1‰的比例加入NBRIP液體培養(yǎng)基中作為唯一氮源；以最適的碳源和氮源，將NBRIP培養(yǎng)基的C/N調(diào)到150/1、125/1、100/1、75/1、50/1和25/1。每處理設(shè)3個(gè)重復(fù)和1個(gè)空白對照，按1%接種量進(jìn)行接種，在30℃、180r·min-1培養(yǎng)最適天數(shù)(4d)后，測定可溶性磷含量，方法同2.1。

2.4溫度、pH值、裝液量、NaCl濃度對CHW10B菌株溶磷能力的影響

按1%的接種量將CHW10B種子液接入到NBRIP液體培養(yǎng)基中，設(shè)置培養(yǎng)溫度分別為20、25、30、35、40℃；將NBRIP液體培養(yǎng)基pH值分別調(diào)至4、5、6、7、8、9、10；分別將20、40、50、60、80mLNBRIP培養(yǎng)基加入到100mL三角瓶中，使其體積比分別為1/5、2/5、1/2、3/5、4/5；調(diào)節(jié)NBRIP培養(yǎng)基的NaCl濃度為0.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0g·L-1。各處理設(shè)3個(gè)重復(fù)和1個(gè)空白對照，30℃、180r·min-1培養(yǎng)最適天數(shù)(4d)后，測定可溶性磷含量，方法同2.1。

2.5CHW10B菌株產(chǎn)有機(jī)酸、ACC脫氨酶、IAA、ADC、嗜鐵素能力測定

參考Saleh等[11,13]的研究方法進(jìn)行CHW10B菌株ACC脫氨酶活性測定，IAA含量測定采用Salkowski比色法[14]，產(chǎn)精氨酸脫羧酶(ADC)能力測定參照Sun等[15]的方法，產(chǎn)嗜鐵素參照Yu等[16]的方法采用CAS平板進(jìn)行定性檢測。

2.6CHW10B菌株對1年生南方紅豆杉的促生作用

3 結(jié)果與分析

3.1CHW10B菌株溶磷量動(dòng)態(tài)變化

從圖1可看出：前4dCHW10B菌株培養(yǎng)液的可溶磷含量逐漸增加，到第4天時(shí)達(dá)到峰值(757.752mg·L-1)，此時(shí)溶磷能力最強(qiáng)；4d后該菌的溶磷能力明顯降低，但到第7天卻有所回升，回升原因可能是培養(yǎng)后期營養(yǎng)耗盡，菌體細(xì)胞大量死亡裂解導(dǎo)致可溶性磷釋放。以上結(jié)果說明，該菌株溶磷的最佳培養(yǎng)時(shí)間為4d。

3.2磷酸鈣濃度對CHW10B菌株溶磷能力的影響

3.3碳源、氮源、碳氮比對CHW10B菌株溶磷能力的影響

3.3.1碳源對CHW10B菌株溶磷能力的影響 圖3表明：不同碳源明顯影響CHW10B菌株溶解磷酸鈣的能力；以葡萄糖為唯一碳源時(shí)，該菌株溶磷能力最強(qiáng)，溶磷量達(dá)740.310mg·L-1；其次為果糖(79.457mg·L-1)；以麥芽糖、甘露醇、蔗糖和可溶性淀粉為碳源時(shí)，溶磷量大幅降低，尤其以可溶性淀粉為碳源時(shí)，溶磷量最小(2.907mg·L-1)。由此可知，葡萄糖為CHW10B菌株充分發(fā)揮其溶磷功能的最適碳源。因此，在CHW10B菌株的實(shí)踐應(yīng)用中，應(yīng)考慮與可以降解土壤中多糖的菌株結(jié)合使用。

圖2 不同磷酸鈣濃度下CHW10B菌株培養(yǎng)液可溶磷含量的變化Fig.2 Changes of soluble phosphate content in culture liquid of strain CHW10B cultivated under different calcium phosphate contents

圖3 不同碳源下CHW10B菌株培養(yǎng)液可溶磷含量的變化Fig.3 Changes of soluble phosphate content in culture liquid of strain CHW10B cultivated under different carbon sources

圖4 不同氮源下CHW10B菌株培養(yǎng)液可溶磷含量的變化Fig.4 Changes of soluble phosphate content in culture liquid of strain CHW10B cultivated under different nitrogen sources

3.3.2氮源對CHW10B菌株溶磷能力的影響 圖4表明：不同氮源條件下，CHW10B菌株溶磷能力差異顯著；以(NH4)2SO4為氮源時(shí)，CHW10B菌株的溶磷能力最強(qiáng)，溶磷量為738.372mg·L-1；以NH4NO3為氮源時(shí)，該菌株的溶磷能力比以(NH4)2SO4為氮源時(shí)略低(溶磷量為720.504mg·L-1)，但二者差異不顯著。以牛肉膏、酵母膏和蛋白胨為氮源時(shí)，該菌株的溶磷能力明顯下降，而以KNO3為氮源時(shí)，該菌株的溶磷能力最弱(溶磷量為179.201mg·L-1)。說明該菌株以NH4+為氮源時(shí)的溶磷能力明顯比以NO3-為氮源時(shí)的強(qiáng)，NH4+適合該菌株溶磷能力的充分發(fā)揮。因此，CHW10B菌株溶磷作用最適氮源為(NH4)2SO4，在實(shí)踐應(yīng)用中與(NH4)2SO4沒有顯著差異的NH4NO3也可以考慮。

3.3.3碳氮比對CHW10B菌株溶磷能力的影響 以最適碳源(葡萄糖)和最適氮源(硫酸銨)分別作為碳源和氮源，比較不同C/N對CHW10B菌株溶磷能力的影響。圖5表明：不同C/N對CHW10B菌株的溶磷能力影響顯著；C/N≤100/1時(shí)，C/N越大，CHW10B菌株的溶磷能力越強(qiáng)；C/N>100/1，隨著C/N升高，該菌株的溶磷能力反而減弱。C/N為25/1時(shí)，該菌株的溶磷量最低(318.542mg·L-1)，C/N為100/1時(shí)，該菌株的溶磷量最高(684.108mg·L-1)，此時(shí)溶磷能力最強(qiáng)。

圖5 不同C/N下CHW10B菌株培養(yǎng)液可溶磷含量的變化Fig.5 Changes of soluble phosphate content in culture liquid of strain CHW10B cultivated under different C/N

3.4環(huán)境條件對CHW10B菌株溶磷能力的影響

3.4.1初始pH值對CHW10B菌株溶磷能力的影響 圖6表明：隨著pH值的升高，CHW10B菌株的溶磷能力表現(xiàn)為先增長后降低；當(dāng)初始pH值為10時(shí)，該菌株的溶磷能力最差，但可溶性磷含量仍達(dá)521.318mg·L-1；初始pH值為7時(shí)，該菌株的溶磷能力最強(qiáng)(727.713mg·L-1)。以上結(jié)果表明，CHW10B菌株對不同的pH值具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力，但中性條件最利于其溶磷功能的發(fā)揮，這也暗示了該菌株可以應(yīng)用于多種不同酸堿性土壤中。

圖6 不同初始pH值下CHW10B菌株培養(yǎng)液可溶磷含量的變化.6 Changes of soluble phosphate content in culture liquid of strain CHW10B cultivated under different initial pH

3.4.2裝液量對CHW10B菌株溶磷能力的影響 溶氧量對微生物的生長有重要作用，不同微生物對溶解氧需求也不同。裝液量是影響溶氧量的一個(gè)重要因素，裝液量越少，溶氧系數(shù)越大，溶氧量越多。圖7表明：CHW10B菌株在不同裝液量下均有一定的溶磷能力，但溶磷能力的強(qiáng)弱不同：裝液量400mL·L-1(2/5)和800mL·L-1(4/5)時(shí)，CHW10B菌株的溶磷能力差異不顯著；裝液量600mL·L-1(3/5)時(shí)，CHW10B菌株的溶磷能力最差；裝液量500mL·L-1(1/2)時(shí)，CHW10B菌株的溶磷能力最強(qiáng)，溶磷量高達(dá)750.001mg·L-1。由此可知，裝液量500mL·L-1(1/2)為本研究條件下CHW10B菌株溶磷的最適裝液量。

圖7 不同裝液量下CHW10B菌株培養(yǎng)液可溶磷含量的變化Fig.7 Changes of soluble phosphate content in culture liquid of strain CHW10B cultivated under different liquid volume in flask

圖8 不同NaCl濃度下CHW10B菌株培養(yǎng)液可溶磷含量的變化Fig.8 Changes of soluble phosphate content in culture liquid of strain CHW10B cultivated under different concentration of Nacl

圖9 不同溫度下CHW10B菌株培養(yǎng)液可溶磷含量的變化Fig.9 Changes of soluble phosphate content in culture liquid of strain CHW10B cultivated under different temperature

3.5CHW10B菌株產(chǎn)有機(jī)酸能力

表1表明：CHW10B菌株發(fā)酵液產(chǎn)生有機(jī)酸，且有機(jī)酸總量為5710.82μg·L-1，比對照組的665.05μg·L-1高758.70%。CHW10B菌株分泌的有機(jī)酸為草酸和葡萄糖酸，與對照相比，雖然少了甲酸和檸檬酸，但其葡萄糖酸的產(chǎn)生量遠(yuǎn)大于對照，分泌草酸的量與CK的相差不大。葡萄糖酸一方面能降低pH值從而溶解難溶性磷，另一方面還能與Al3+等螯合釋放磷酸根[17]。由此可見，CHW10B菌株發(fā)酵液良好的分泌葡萄糖酸的能力促進(jìn)了其高效溶磷作用。

表1 CHW10B菌株分泌的有機(jī)酸種類和含量

注：“-”代表未檢測到。Note：“-” represents not detected.

3.6CHW10B菌株產(chǎn)ACC脫氨酶、IAA、嗜鐵素及精氨酸脫羧酶能力

經(jīng)測定，CHW10B菌株可以產(chǎn)生吲哚乙酸(IAA)和ACC脫氨酶，產(chǎn)IAA量為8.908mg·mL-1，其ACC脫氨酶比活力為0.922U·mg-1。采用CAS平板對CHW10B菌株進(jìn)行產(chǎn)鐵載體定性測定，結(jié)果表明：CHW10B菌株能產(chǎn)生鐵載體(圖10)。圖11表明：該菌株還具有產(chǎn)精氨酸脫羧酶的能力。以上結(jié)果說明，CHW10B菌株具有多種植物促生特性。

圖10 CHW10B菌株的CAS平板檢測Fig.10 Siderophore production of strain CHW10B on CAS agar plates

圖11 CHW10B菌株產(chǎn)精氨酸脫羧酶定性測定結(jié)果Fig.11 Qualitative determination results of strain CHW10B on producing Arginine decarboxylase

3.7CHW10B菌株對南方紅豆杉的促生作用

南方紅豆杉1年生實(shí)生苗接種CHW10B菌株后360d的生長情況(表2)表明：接種CHW10B菌劑對南方紅豆杉生長具促進(jìn)作用，與對照相比，南方紅豆杉實(shí)生苗地徑、苗高和生物量的增長率分別為19.53%、20.14%和25.39%。CHW10B菌株對南方紅豆杉實(shí)生苗生物量和苗高的促生作用達(dá)極顯著(P<0.01)，而對地徑的促生作用達(dá)顯著(P<0.05)。

表2 CHW10B菌株對南方紅豆杉生長的影響

注：同行不同小寫字母表示差異顯著，P<0.05。

Note：The different small letters in the samerow mean the significant difference atP<0.05．

4 討論

溶磷微生物的溶磷作用并非一成不變，隨著外界環(huán)境或營養(yǎng)物質(zhì)的變化，其溶磷效果也發(fā)生改變[19]。許多研究表明，碳是影響溶磷菌生長繁殖和生理生化代謝包括溶磷作用等的最主要因素，不同溶磷菌株的最佳碳源及利用碳源的廣泛性存在明顯區(qū)別，如節(jié)桿菌1TCRi7只有以葡萄糖為碳源時(shí)才具有溶磷能力[20]；而洋蔥伯克霍爾德氏菌C5-A[17]、耳假單胞菌WB38[7]、泛菌屬溶磷菌D2[18]、熒光假單胞菌JW-JS1[21]和本研究中的草木樨中華根瘤菌CHW10B溶磷碳源較廣，以葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等分別作為碳源時(shí)皆具有溶磷能力；在后4株菌中，除洋蔥伯克霍爾德氏菌C5-A以麥芽糖為碳源時(shí)溶磷作用最強(qiáng)外，其余均以葡萄糖為碳源時(shí)溶磷能力最強(qiáng)。草木樨中華根瘤菌CHW10B溶磷最佳碳源為葡萄糖也可能與其溶磷過程中產(chǎn)生大量的葡萄糖酸有關(guān)[19,22]。

不同溶磷微生物對不同氮源利用效率也不盡相同。本研究中，草木樨中華根瘤菌CHW10B以NH4+為氮源時(shí)的溶磷能力明顯比以NO3-為氮源時(shí)的強(qiáng)，以硫酸銨為氮源時(shí)溶磷能力最強(qiáng)，以硝酸銨為氮源時(shí)溶磷能力次之，而以硝酸鉀為氮源時(shí)的溶磷能力明顯降低，這與耳假單胞菌WB38[7]溶磷氮源情況相似，不同的是后者以硝酸銨為氮源時(shí)溶磷能力最強(qiáng)，硫酸銨次之。本研究結(jié)果與趙小蓉等[20]和范丙全等[23]發(fā)現(xiàn)的溶磷菌通常以NO3-為氮源時(shí)的溶磷量高于以NH4+為氮源時(shí)的溶磷量相反。另外，范丙全等[23]認(rèn)為，使用銨態(tài)氮時(shí)主要分泌蘋果酸、檸檬酸、乙酸、琥珀酸、丙酸，而硝態(tài)氮條件下幾乎不產(chǎn)生這些有機(jī)酸。本研究中，CHW10B菌株以(NH4)2SO4為氮源時(shí)產(chǎn)生大量的葡萄糖酸，并沒有產(chǎn)生其他有機(jī)酸，其具體原因有待進(jìn)一步研究。

有研究表明，適當(dāng)調(diào)整C/N值，溶磷微生物可能會(huì)釋放更多磷[21]，不同菌株對培養(yǎng)基中C/N值反應(yīng)差異顯著。本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)C/N<100/1時(shí)，隨培養(yǎng)基的C/N值升高，草木樨中華根瘤菌CHW10B的溶磷能力逐漸增強(qiáng)；當(dāng)C/N=100/1時(shí)，草木樨中華根瘤菌CHW10B菌株溶磷能力最強(qiáng)，這與劉輝等[21]關(guān)于熒光假單胞菌JW-JS1菌株和趙小蓉等[20]關(guān)于歐文氏桿菌的研究結(jié)果相同；當(dāng)C/N>100/1時(shí)，CHW10B菌株的溶磷能力逐漸減弱，與青霉和腸桿菌的結(jié)果[20]不一致，可能是因?yàn)椴煌曜陨硭m宜的C/N有所不同。

本研究中的草木樨中華根瘤菌CHW10B是分離自南方紅豆杉根際的高效溶磷菌株，具有在南方紅豆杉根際發(fā)展成優(yōu)勢種群的前提，該菌株除產(chǎn)生葡萄糖酸具有較強(qiáng)溶磷能力外，還可產(chǎn)ACC脫氨酶、IAA、鐵載體和精氨酸脫羧酶，具有多種植物促生特性。將該菌株制成菌劑作用于1年生南方紅豆杉實(shí)生苗后，具有良好的促生效應(yīng)。在本課題組的前期研究中，CHW10B對60 d南方紅豆杉幼苗生長也表現(xiàn)出明顯的促生作用。可以看出，該菌株有望被制成生物肥料，應(yīng)用于南方紅豆杉等的人工栽培，具有較高的應(yīng)用潛力。若將該菌株更好應(yīng)用于農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)中，還需進(jìn)一步結(jié)合實(shí)踐中土壤和周圍環(huán)境的實(shí)際情況，進(jìn)行深入驗(yàn)證。

5 結(jié)論

碳源、氮源、碳氮比和溫度等環(huán)境條件均對CHW10B菌株的溶磷能力有一定的影響，以葡萄糖為碳源，硫酸銨為氮源，且碳氮比為100/1時(shí)，該菌株的溶磷能力最強(qiáng)。該菌株溶磷能力最強(qiáng)的其他環(huán)境條件分別為培養(yǎng)時(shí)間4 d、磷酸鈣5.00 g·L-1、初始pH值7.0、裝液量1/2、NaCl為0.0 g·L-1、溫度30℃。將該菌株接種于1年生南方紅豆杉根部360 d后，發(fā)現(xiàn)其對南方紅豆杉有明顯的促生作用。經(jīng)檢測，該菌株除產(chǎn)生大量葡萄糖酸外，還產(chǎn)生可促進(jìn)植物生長的IAA、ACC脫氨酶、嗜鐵素和精氨酸脫羧酶。鑒于該菌株對南方紅豆杉良好的促生作用，結(jié)合其溶磷特性，可將該菌株應(yīng)用于南方紅豆杉的種植。

[1] 張希濤, 康麗華, 馬海賓, 等. 具有解磷能力的相思根瘤菌的篩選[J]. 林業(yè)科學(xué)研究, 2008, 21(5): 619-624.

[2] 張玉蘭, 王俊宇, 馬星竹, 等. 提高磷肥有效性的活化技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 土壤通報(bào), 2009, 40(1): 194-202.

[3] 王 舒, 張林平, 郝菲菲, 等. 油茶根際高效溶磷細(xì)菌的篩選、鑒定及其安全性測試[J]. 林業(yè)科學(xué)研究, 2015, 28(2): 166-172.

[4] Babita K J, Monhandass G P,etal. Simultaneous phosphate solubilization potential land antifungal activity of new fluorescent pseudomonad strains,Pseudomonasaeruginosa,P.plecoglossicidaandP.mosselii[J]. World J Microbiol Biotechnol, 2009, 25: 573-581.

[5] 梅新蘭, 閃安琪, 蔣 益, 等. 適應(yīng)玉米的溶磷細(xì)菌篩選及其對玉米生長的影響[J]. 土壤學(xué)報(bào), 2016, 53(2): 502-509.

[6] 史發(fā)超, 殷中偉, 江紅梅, 等. 一株溶磷真菌篩選鑒定及其溶磷促生效果[J]. 微生物學(xué)報(bào), 2014, 54(11): 1333-1343.

[7] 王 舒, 張林平, 張 揚(yáng), 等. 紅壤區(qū)油茶根際解磷細(xì)菌的篩選、鑒定及其解磷能力[J]. 林業(yè)科學(xué)研究, 2015, 28(3): 409-416.

[8] 任嘉紅, 劉 輝, 吳曉蕙, 等. 南方紅豆杉根際溶無機(jī)磷細(xì)菌的篩選、鑒定及其促生效果[J]. 微生物學(xué)報(bào), 2012, 52(3): 295-303.

[9] 肖 遙, 楚秀麗, 徐肇友, 等. 南方紅豆杉2年生容器苗多點(diǎn)試驗(yàn)的生長節(jié)律家系變異[J]. 林業(yè)科學(xué)研究, 2016, 29(2): 238-244.

[10] 任嘉紅, 劉 輝, 姜 楠, 等. GFP標(biāo)記溶磷草木樨中華根瘤菌CHW10B及其定殖[J]. 林業(yè)科學(xué), 2015, 51(1): 74-79.

[11] Penrose D M, Glick. Methods for Isolating and Characterizing ACC Deaminase-Containing Plant Growth-Promoting Rhizobacteria[J]. Physiologia Plantarum, 2003, 118(1): 10-15.

[12] 魯如坤. 土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法(第一版)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)科技出版社, 2000.

[13] Saleh S S, Glick B R. Involvement of gacS and rpoS in enhancement of the plant growth-promoting capabilities of Enterobacter cloacae CAL2 and UW4[J]. Canadian Journal of Microbiology, 2001, 47(8): 698-705.

[14] Johan H, Leveaul J, Lindow S E. Utilization of the plant hormone indole-3-Acetic acid for growth byPseudomonasputidastrain 1290[J]. Applied Environment Microbiology, 2005, 71(5): 2365-2371.

[15] Sun L N, Zhang Y F, He L Y,etal. Genetic diversity and characterization of heavy metal-resistant-endophytic bacteria from two copper-tolerant plant species on copper mine wasteland[J]. Bioresource Technology, 2010, 101(2): 501-509.

[16] Yu X, Chen M, Jiang Z,etal. The two-component regulators GacS and GacA positively regulate a nonfluorescent siderophore through the Gac/Rsm signaling cascade in high-siderophore-yieldingPseudomonassp. strain HYS[J]. Journal of Bacteriology, 2014, 196(18): 3259-3270.

[17] 劉文干, 何園球, 張 坤, 等. 一株紅壤溶磷菌的分離、鑒定及溶磷特性[J]. 微生物學(xué)報(bào), 2012, 52(3): 326-333.

[18] 王俊娟, 閻愛華, 王 薇, 等. 鐵尾礦區(qū)油松根際溶磷泛菌D2的篩選鑒定及溶磷特性[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào), 2016, 27(11): 3705-3711.

[19] Yi Y M, Huang W Y, Ge Y. Exopolysaccharide: a novel important factor in the microbial dissolution of tric alcium phosphate[J].World J. Microbiol. Biotechnol, 2008, 24: 1059-1065.

[20] 趙小蓉, 林啟美, 李保國. C、N源及C/N比對微生物溶磷的影響[J]. 植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào), 2002, 8(2): 197-204.

[21] 劉 輝, 吳小芹, 任嘉紅, 等. 一株熒光假單胞菌的溶磷特性及其對楊樹的促生效果[J]. 林業(yè)科學(xué), 2013, 49(9): 112-118.

[22] Patel D K, Archana G, Kumar G N. Variation in the nature of organic acid secretion and mineral phosphate solubilization byCitrobactersp. DHRSS in the presence of different sugars[J]. Current Microbiology, 2008, 56(2): 168-174.

[23] 范丙全, 金繼運(yùn), 葛 誠. 溶磷草酸青霉菌篩選及其溶磷效果的初步研究[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2002, 35(5): 525-530.

(責(zé)任編輯：徐玉秀)

Phosphate-solubilizingCharacteristicsandGrowth-promotingEffectofSinorhizobiummelilotiCHW10BonTaxuschinensisvar.mairei

LIYun-ling1, 2,HOUQin-wen1, 2,LIURui-xiang1, 2,RENJia-hong1, 2,ZHANGYi1

(1.Department of Biological Science and Technology, Changzhi University, Changzhi 046011, Shanxi, China；2.Ecological and Environmental Research Institute of Taihangshan Mountains, Changzhi 046011, Shanxi, China)

S718.8

A

1001-1498(2017)05-0751-08

10.13275/j.cnki.lykxyj.2017.05.007

2017-02-15

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31100471);山西省重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)經(jīng)費(fèi)資助

李云玲(1976—)，女，碩士，講師.主要研究方向：環(huán)境微生物.電話: 13509755820. E-mail: lyl_0315@163.com

* 通訊作者：任嘉紅，博士，教授.主要研究方向：森林微生物.E-mail : renjiahong@163.com